PMC

TEXT

sifilisul este o boală cu transmitere sexuală cauzată de infecția cu spirocheta Treponema pallidum. Din cauza incapacității de a cultiva în mod obișnuit agentul infecțios, diagnosticul infecției cu sifilis se face în primul rând printr-o combinație de prezentare clinică și serologie. Această testare serologică poate fi împărțită în două tipuri de teste: teste treponemale care testează anticorpi direcționați împotriva T. pallidum și teste nontreponemale care măsoară anticorpii anticardiolipinici produși în timpul infecției active.

în ultimii ani, multe laboratoare au trecut la screeningul pacienților cu un test treponemal și apoi la reflexarea probelor pozitive la testarea netreponemală, o practică care inversează abordarea istorică. Există o dezbatere continuă în literatura de specialitate cu privire la meritele relative ale algoritmilor. În timp ce o parte a discuției se concentrează asupra relevanței clinice a identificării anticorpilor treponemali la pacienții asimptomatici și a rentabilității diferiților algoritmi de screening (4, 8, 9), o preocupare suplimentară este performanța analitică a testelor treponemale disponibile pe piață (10). Deși studiile inițiale au sugerat că rata rezultatelor analitice fals pozitive a fost relativ scăzută atunci când se utilizează teste de anticorpi treponemali pentru screening (3), Un studiu mai recent a identificat o frecvență mai mare a rezultatelor pozitive neconfirmate (2). Cu toate acestea, aceste rezultate sunt oarecum dificil de interpretat, deoarece au fost utilizate mai multe combinații diferite de teste de screening și de confirmare. În timp ce multe studii au comparat caracteristicile de performanță ale diferitelor teste treponemale comercializate (1, 5, 7), o limitare este că rezultatele serologiei treponemale sunt de obicei considerate a reprezenta o variabilă binară (adică „reactivă” versus „nereactivă”) mai degrabă decât una continuă. Pentru a aborda acest lucru, am examinat dacă rezultatele semicantitative oferă informații suplimentare relevante pentru determinarea stării serologice a pacientului.

probele au fost analizate pentru prezența anticorpilor treponemali prin utilizarea a două teste imunologice: testul Bioplex 2200 syphilis IgG (SYPHG) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) și testul Trep-Sure (Phoenix BioTech corp., Oakville, Ontario, Canada). Testul BIOPLEX SYPHG este un test imunologic multiplex pe bază de mărgele care utilizează antigene treponemale recombinante (Tp15, Tp17 și Tp47) ca reactiv de captare, urmat de detectarea cu un conjugat Murin anti-uman IgG-ficoeritrin (PE) (6). Rezultatele sunt exprimate ca un” indice de anticorpi ” (AI), care este o unitate arbitrară legată de raportul dintre semnalul eșantionului și limitele definite de calibrator. Trep-Sure este un test imunologic enzimatic pe bază de microplăci (EIA) care utilizează, de asemenea, antigene treponemale recombinante (într-un amestec proprietar) ca reactiv de captare, dar utilizează antigene treponemale conjugate cu peroxidază pentru detectare (11). Măsurarea anticorpilor netreponemali a fost efectuată prin testarea rapidă a reactivului plasmatic (RPR) (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).

probele de studiu au fost selectate din probele trimise la laboratorul nostru pentru testarea de rutină a sifilisului și analizate fără cunoașterea Istoriilor clinice. Alicote din probe care au fost reactive în screeningul inițial Bioplex SYPHG au fost testate în continuare atât de EIA Trep-Sure, cât și de RPR. Laboratorul nostru servește o populație cu prevalență scăzută, cu o rată inițială pozitivă a ecranului de aproximativ 3% pe baza datelor istorice (datele nu sunt prezentate).

Un total de 142 de probe care au fost identificate ca reactive în testul inițial de screening Bioplex au fost supuse testelor reflexe așa cum s-a descris mai sus. Prezența anticorpilor treponemali a fost confirmată de EIA Trep-Sure în 77% (110/142) din probe, o rată similară cu cea raportată în studiile multicentrice anterioare (3). Cu toate acestea, probabilitatea confirmării a fost foarte dependentă atât de starea RPR a pacientului, cât și de valoarea SYPHG determinată în testul de screening Bioplex (Fig. 1). Statusul anticorpilor treponemali a fost confirmat de EIA pentru toate probele RPR pozitive (n = 27), indiferent de valoarea inițială a SYPHG. În schimb, rezultatele discordante au fost determinate pentru 28% (32/115) dintre pacienții cu RPR negativ, cu o frecvență crescândă în probele cu valori scăzute ale SYPHG în screeningul inițial. Analiza caracteristicii de funcționare a receptorului (Roc) A fost efectuată pentru a identifica o valoare limită care ar oferi un nivel ridicat de specificitate pentru identificarea probelor „adevărat pozitive” (confirmate EIA) (Fig. 2). A fost selectată o valoare cutoff AI de 6,0 , oferind specificitate de 100% (interval de încredere , 89,3 până la 100,0%). Toate probele cu valori syphg de screening peste acest nivel (78/78) au fost confirmate de EIM comparativ cu doar 50% (32/64) din probele cu niveluri syphg de screening < 6.0 AI (P < 0.0001).

pentru a se asigura că această diferență nu s-a datorat diferențelor de sensibilitate analitică între testele Bioplex și cele Trep-Sure, cinci probe puternic pozitive (rezultatele SYPHG ale >8,0 AI) au fost diluate cu ser normal pentru a obține valori cuprinse între 1,0 și 2,0 AI în testul Bioplex. Toate cele cinci probe diluate au dat rezultate pozitive în testul Trep-Sure, demonstrând că acest test de confirmare a fost capabil să detecteze anticorpi treponemali la aceste concentrații mai mici. Acest lucru a fost în concordanță cu rezultatele observate în probele RPR-pozitive, unde mai multe exemplare slab pozitive au fost totuși confirmate de EIM.determinarea relevanței unui rezultat pozitiv al anticorpilor treponemali pentru un pacient cu RPR negativ poate fi dificilă, în special în absența unui istoric clinic clar. Din acest motiv, este esențial să se identifice și să se minimizeze rezultatele analitice fals pozitive. În acest raport, demonstrăm că valoarea SYPHG poate ajuta la informarea acestei decizii și poate fi utilizată la elaborarea unei strategii de testare reflexă. Deși testul de screening utilizat în acest studiu nu a fost aprobat de FDA ca test cantitativ, aceste date sugerează că rezultatul ai semicantitiativ poate oferi în continuare informații utile legate de necesitatea testării de confirmare. Pe baza acestor date, oferim următorul algoritm pentru screeningul sifilisului la instituția noastră. Toate probele care sunt reactive în testul inițial de screening SYPHG sunt testate în continuare de RPR. Probele RPR pozitive nu necesită teste suplimentare, indiferent de AI inițială în testul SYPHG. În schimb, testele RPR-negative cu rezultatele inițiale SYPHG ale <6.0 sunt supuse automat EIA de confirmare. Acest algoritm limitează testarea EIA reflexă la aproximativ 1% din probele trimise pentru testarea sifilisului, dar se concentrează pe probele cel mai probabil să aibă rezultate discordante.

o limitare este că, din cauza lipsei de standardizare a testelor treponemice de la diferiți producători, valorile specifice ai SYPHG identificate în acest studiu se aplică numai cazurilor în care screeningul inițial este efectuat folosind testul Bioplex. Cu toate acestea, abordarea demonstrată aici poate fi ușor evaluată pentru alte teste pentru a determina valoarea limită ideală pentru a declanșa testarea reflexă. Un aspect important este că, atunci când se implementează testarea de confirmare, aceasta trebuie făcută folosind un test care are o sensibilitate analitică pentru detectarea concentrațiilor scăzute de anticorpi treponemali egali sau mai buni decât cei ai testului de screening. O analiză sistematică a sensibilităților analitice relative ale testelor treponemale actuale ar fi un instrument valoros pentru a ajuta laboratoarele să stabilească algoritmi de testare adecvați.determinarea meritelor relative ale utilizării testelor treponemale versus netreponemale pentru a evalua pacienții pentru infecția cu sifilis necesită studii suplimentare. Cu toate acestea, indiferent de metodă, laboratoarele ar trebui să dezvolte abordări pentru a identifica rezultatele analitice fals pozitive ori de câte ori este posibil. Înțelegerea caracteristicilor de performanță analitică ale testelor treponemice, împreună cu stabilirea unor limite specifice testelor pentru declanșarea testelor de confirmare, este o abordare care poate fi utilizată pentru a ajuta în acest sens, în special atunci când se analizează populațiile cu prevalență scăzută.