PMC

tekst

syfilis is een seksueel overdraagbare ziekte veroorzaakt door infectie met de spirochete Treponema pallidum. Vanwege een onvermogen om routinematig cultuur van de infectieuze agens, diagnose van syfilis infectie wordt voornamelijk gedaan door een combinatie van klinische presentatie en serologie. Dit serologic het testen kan globaal in twee soorten analyses worden verdeeld: treponemal tests die voor antilichamen tegen T. testen worden geleid die. pallidum-en nontreponemale tests die anticardiolipine-antilichamen meten die tijdens actieve infectie worden geproduceerd.

in de afgelopen jaren zijn veel laboratoria overgegaan op het screenen van patiënten met een treponemale assay en vervolgens het reflexen van positieve monsters naar niet-reponemale testen, een praktijk die de historische benadering omkeert. Er is in de literatuur voortdurend debat over de relatieve verdiensten van de algoritmen. Terwijl een deel van de discussie zich richt op de klinische relevantie van het identificeren van treponemale antilichamen bij asymptomatische patiënten en de kosteneffectiviteit van verschillende screeningsalgoritmen (4, 8, 9), is een extra zorg de analytische prestaties van treponemale tests die op de markt beschikbaar zijn (10). Hoewel uit eerste studies bleek dat het percentage analytische vals-positieve resultaten relatief laag was bij het gebruik van treponemal antilichaamtests voor screening (3), bleek uit een recenter onderzoek een hogere frequentie van onbevestigde positieve resultaten (2). Deze resultaten zijn echter enigszins moeilijk te interpreteren, aangezien verschillende combinaties van screening-en bevestigingstests werden gebruikt. Terwijl vele studies de prestatiekenmerken van diverse op de markt gebrachte treponemal analyses (1, 5, 7) hebben vergeleken is één beperking dat treponemal serologieresultaten gewoonlijk worden beschouwd om een binaire variabele (d.w.z., “reactieve” versus “niet-reactieve”) eerder dan een ononderbroken te vertegenwoordigen. Om dit aan te pakken, hebben we onderzocht of semiquantatieve resultaten aanvullende informatie leveren die relevant is voor het bepalen van de serologische status van een patiënt.

monsters werden geanalyseerd op de aanwezigheid van treponemale antilichamen door gebruik te maken van twee immunoassays: de Bioplex 2200 syfilis IgG assay (Syphg) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) en de Trep-Sure assay (Phoenix BioTech Corp., Oakville, Ontario, Canada). De bioplex syphg-test is een multiplex-immunoassay op basis van parels die recombinant treponemale antigenen (Tp15, Tp17 en Tp47) als capture-reagens gebruikt, gevolgd door detectie met een muriene anti-humane IgG-phycoerythrin (PE) conjugaat (6). De resultaten worden uitgedrukt als een “antilichaamindex” (AI), die een willekeurige eenheid met betrekking tot de verhouding van steekproefsignaal aan kalibrator-gedefinieerde cutoffs is. Trep-Sure is een op microplaat gebaseerde enzymimmunoassay (EIA) die ook recombinante treponemale antigenen (in een eigen mengsel) als capture-reagens gebruikt, maar peroxidase-geconjugeerde treponemale antigenen gebruikt voor detectie (11). Nontreponemal antilichaammeting werd uitgevoerd door middel van snelle plasmareagentia (RPR) testen (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).

Studiemonsters werden geselecteerd uit monsters die naar ons laboratorium werden gestuurd voor routinematige syfilis testen en geanalyseerd zonder kennis van de klinische geschiedenis. Aliquots van monsters die reactief waren in de initiële bioplex syphg screening werden verder getest door zowel de Trep-Sure EIA als RPR. Ons laboratorium bedient een populatie met een lage prevalentie, met een initiële screen-positive rate van ongeveer 3% gebaseerd op Historische gegevens (Gegevens niet getoond).

in totaal 142 monsters die in de initiële bioplex screening assay als reactief werden geïdentificeerd, ondergingen een reflextest zoals hierboven beschreven. De aanwezigheid van treponemale antilichamen werd bevestigd door de trep-Sure EIA in 77% (110/142) van de monsters, een percentage dat vergelijkbaar is met het percentage dat werd gerapporteerd in eerdere multicenterstudies (3). De waarschijnlijkheid van bevestiging was echter sterk afhankelijk van zowel de RPR-status van de patiënt als de SYPHG-waarde bepaald in de bioplex screening assay (Fig. 1). Treponemale antilichaamstatus werd bevestigd door EIA voor alle RPR-positieve monsters (n = 27), ongeacht de initiële SYPHG-waarde. Daarentegen werden voor 28% (32/115) van de RPR-negatieve patiënten disharmonische resultaten vastgesteld, met een toenemende frequentie in monsters met lage SYPHG-waarden in de initiële screening. De analyse van de Receiver operating characteristic (ROC) werd uitgevoerd om een cut-off waarde te identificeren die een hoge mate van specificiteit zou opleveren voor het identificeren van “true-positive” (EIA-bevestigde) monsters (Fig. 2). Een cut-off AI-waarde van 6,0, die 100% specificiteit geeft (betrouwbaarheidsinterval , 89,3 tot 100,0%), werd geselecteerd. Alle monsters met screening syphg-waarden boven dit niveau (78/78) werden bevestigd door de EIA, vergeleken met slechts 50% (32/64) van de monsters met screening syphg-waarden < 6,0 AI (P < 0,0001 ).

om ervoor te zorgen dat dit verschil niet te wijten was aan verschillen in analytische gevoeligheid tussen de bioplex-en Trep-Sure-assays, werden vijf sterk positieve monsters (SYPHG-resultaten van >8,0 AI) verdund met normaal serum om waarden tussen 1,0 en 2,0 AI te bereiken in de bioplex-assay. Alle vijf van deze verdunde monsters gaven positieve resultaten in de Trep-Sure-test, waaruit bleek dat deze bevestigingstest in staat was treponemale antilichamen bij deze lagere concentraties op te sporen. Dit kwam overeen met de resultaten die werden gezien in RPR-positieve monsters, waar verschillende zwak positieve monsters niettemin door EIA werden bevestigd.

het bepalen van de relevantie van een positief treponemaal antilichaamresultaat voor een patiënt met een negatieve RPR kan een uitdaging zijn, vooral bij afwezigheid van een duidelijke klinische voorgeschiedenis. Om deze reden, is het essentieel om analytische vals-positieve resultaten te identificeren en te minimaliseren. In dit rapport laten we zien dat de SYPHG-waarde kan helpen om deze beslissing te onderbouwen en kan worden gebruikt bij het ontwikkelen van een strategie voor reflextesten. Hoewel de screening assay gebruikt in deze studie is niet goedgekeurd door de FDA als een kwantitatieve assay, deze gegevens suggereren dat de semiquantitiative AI resultaat kan nog steeds nuttige informatie met betrekking tot de behoefte aan bevestigende testen. Op basis van deze gegevens bieden wij het volgende algoritme voor syfilis screening aan bij onze instelling. Alle monsters die reactief zijn in de initiële syphg screening test worden verder getest door RPR. RPR-positieve monsters vereisen geen verdere tests, ongeacht de initiële AI in de syphg-analyse. RPR-negatieve tests met initiële SYPHG-resultaten van <6.0 worden daarentegen automatisch aan bevestigende EIA onderworpen. Dit algoritme beperkt reflex EIA testen tot ongeveer 1% van de monsters verzonden voor syfilis testen, maar richt zich op de monsters meest waarschijnlijk disharmonische resultaten.

een beperking is dat, wegens een gebrek aan standaardisatie van treponemale assays van verschillende fabrikanten, de specifieke SYPHG AI-waarden die in dit onderzoek zijn vastgesteld, alleen van toepassing zijn op de gevallen waarin een eerste screening wordt uitgevoerd met behulp van de bioplex-assay. De hier gedemonstreerde benadering kan echter gemakkelijk worden geëvalueerd voor andere analyses om de ideale Cut-offwaarde te bepalen om reflextests te activeren. Een belangrijk punt is dat, wanneer bevestigende tests worden uitgevoerd, dit moet worden gedaan met behulp van een assay die een analytische gevoeligheid voor het opsporen van lage concentraties treponemal antilichamen gelijk aan of beter dan die van de screening assay. Een systematische analyse van de relatieve analytische gevoeligheden van de huidige treponemal assays zou een waardevol hulpmiddel zijn om laboratoria te helpen geschikte testalgoritmen vast te stellen.

het bepalen van de relatieve verdiensten van het gebruik van treponemale versus niet-reponemale assays om patiënten op syfilisinfectie te evalueren vereist verder onderzoek. Ongeacht de methode moeten laboratoria echter benaderingen ontwikkelen om waar mogelijk analytische fout-positieve resultaten te identificeren. Het begrijpen van de analytische prestatiekenmerken van treponemal assays, samen met het vaststellen van assay-specifieke cutoffs om bevestigende tests te activeren, is een benadering die kan worden gebruikt om in dit verband te helpen, in het bijzonder bij het screenen van populaties met lage prevalentie.