TEXT
a szifilisz egy szexuális úton terjedő betegség, amelyet a spirochete Treponema pallidum fertőzése okoz. A fertőző ágens rutinszerű tenyésztésének képtelensége miatt a szifilisz fertőzés diagnózisát elsősorban a klinikai megjelenítés és a szerológia kombinációjával végzik. Ez a szerológiai vizsgálat széles körben két vizsgálati típusra osztható: treponemális tesztek, amelyek T elleni antitesteket tesztelnek. pallidum és nontreponemal vizsgálatok, amelyek az aktív fertőzés során termelt antikardiolipin antitesteket mérik.
az elmúlt években számos laboratórium eltolódott a treponemális vizsgálattal rendelkező betegek szűrésére, majd a pozitív mintákat reflexszerűen a nontreponemális tesztelésre, egy olyan gyakorlatra, amely megfordítja a történelmi megközelítést. A szakirodalomban folyamatos vita folyik az algoritmusok relatív érdemeiről. Míg a vita egy része a treponemális antitestek tünetmentes betegekben történő azonosításának klinikai jelentőségére, valamint a különböző szűrési algoritmusok (4, 8, 9) költséghatékonyságára összpontosít, további aggodalomra ad okot a piacon elérhető treponemális tesztek analitikai teljesítménye (10). Bár a kezdeti vizsgálatok azt sugallták, hogy az analitikai hamis pozitív eredmények aránya viszonylag alacsony volt, amikor treponemális antitest teszteket alkalmaztak a szűrésre (3), egy újabb felmérés a nem megerősített pozitív eredmények nagyobb gyakoriságát azonosította (2). Ezeket az eredményeket azonban némileg nehéz értelmezni, mivel a szűrővizsgálatok és megerősítő tesztek több különböző kombinációját alkalmazták. Míg sok tanulmány összehasonlította a különböző forgalmazott treponemális vizsgálatok (1, 5, 7) teljesítményjellemzőit, az egyik korlátozás az, hogy a treponemális szerológiai eredményeket általában bináris változónak tekintik (azaz “reaktív” versus “nem reaktív”), nem pedig folytonosnak. Ennek kezelésére megvizsgáltuk, hogy a semikvantitatív eredmények további információkat szolgáltatnak-e a beteg szerológiai állapotának meghatározásához.
a treponemális antitestek jelenlétét két immunvizsgálat segítségével elemezték: a Bioplex 2200 syphilis IgG assay (SYPHG) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) és a Trep-Sure assay (Phoenix BioTech Corp., Oakville, Ontario, Kanada). A BIOPLEX SYPHG assay egy gyöngy alapú multiplex immunoassay, amely rekombináns treponemális antigéneket (tp15, Tp17 és Tp47) alkalmaz capture reagensként, majd egy Murin anti-humán IgG-phycoerythrin (PE) konjugátum (6) kimutatásával. Az eredményeket “antitest indexként” (AI) fejezzük ki, amely egy tetszőleges egység, amely a minta jelének a kalibrátor által meghatározott kivágásokhoz viszonyított arányához kapcsolódik. A Trep-Sure egy mikroplate-alapú enzim immunoassay (EIA), amely rekombináns treponemális antigéneket is használ (szabadalmaztatott keverékben) capture reagensként, de peroxidáz-konjugált treponemális antigéneket használ kimutatáshoz (11). A nontreponemális antitestmérést gyors plazma reagin (RPR) teszteléssel (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) végezték.
A vizsgálati mintákat a laboratóriumunkba rutin szifilisz vizsgálat céljából küldött mintákból választottuk ki, majd a klinikai előzmények ismerete nélkül elemeztük. A kezdeti BIOPLEX SYPHG szűrés során reaktív mintákból származó aliquotokat mind a Trep-Sure EIA, mind az RPR tovább tesztelte. Laboratóriumunk alacsony prevalenciájú populációt szolgál ki, kezdeti képernyő-pozitív aránya körülbelül 3% a történelmi adatok alapján (nem látható adatok).
összesen 142 mintát, amelyeket a kezdeti Bioplex szűrővizsgálat során reaktív anyagként azonosítottak, reflexvizsgálatnak vetettek alá a fent leírtak szerint. A treponemális antitestek jelenlétét a Trep-Sure EIA megerősítette a minták 77% – ában (110/142), ami hasonló a korábbi multicentrikus vizsgálatokban (3). A megerősítés valószínűsége azonban nagymértékben függött mind a beteg RPR státusától,mind a BIOPLEX szűrővizsgálatban meghatározott SZIFILG értéktől (ábra). 1). A treponemális antitest státuszt az EIA megerősítette minden RPR-pozitív mintára (n = 27), függetlenül a kezdeti szifilisz értéktől. Ezzel szemben az RPR-negatív betegek 28% – ánál (32/115) diszkordáns eredményeket határoztak meg, növekvő gyakorisággal az alacsony SZIFILG-értékű mintákban a kezdeti szűrésben. Vevő működési jellemző (ROC) elemzést végeztünk, hogy azonosítsa a vágási érték, amely biztosítja a magas szintű specificitás azonosítására “true-pozitív” (EIA-megerősített) minták (ábra. 2). Egy 6,0-es, 100% – os specificitást biztosító (konfidencia intervallum , 89,3-100,0%) AI értéket választottak ki. Az EIA az e szint felett (78/78) szűrési SYPHG értékekkel rendelkező összes mintát megerősítette, szemben a < 6.0 AI (P < 0.0001) szűrési szinttel rendelkező minták mindössze 50% – ával (32/64 ).
a treponemális antitest eredmények összehasonlítása. Összesen 142 mintát vizsgáltak treponemális antitestekre mind a Bioplex, mind a Trep-biztos (EIA) vizsgálatok, valamint az RPR reaktivitás alkalmazásával. Az eredményeket a kezdeti Bioplex szűrővizsgálatban észlelt SZIFILISZÉRTÉK alapján osztályozzák.
ROC értékek elemzése a true-pozitív (EIA-megerősített) minták előrejelzésére. Az érzékenységet úgy határozták meg, mint a megerősítő környezeti hatásvizsgálatban reaktív eredménnyel rendelkező minták azonosítását. A görbe alatti terület (AUC) értéke 0,919 (95% CI, 0,87-0,96), 100% – os specificitással, minden AI értéknél ≥ 5,8. A 2-by-2 készenléti táblázat segítségével épített 6.0 AI, mint a cutoff is látható. A KHV által megerősített eredmények gyakorisága a két csoport esetében szignifikánsan eltérő volt (P < 0, 0001 ).
annak biztosítása érdekében, hogy ez a különbség nem a Bioplex és a Trep-Sure vizsgálatok közötti analitikai érzékenységi különbségek miatt következett be, öt erősen pozitív mintát (a 8.0 AI) hígítottak normál szérummal, hogy a Bioplex vizsgálatban 1,0-2,0 AI közötti értékeket érjenek el. Ezen hígított minták közül mind az öt pozitív eredményt adott a Trep-biztos vizsgálatban, bizonyítva, hogy ez a megerősítő teszt képes volt treponemális antitesteket kimutatni ezekben az alacsonyabb koncentrációkban. Ez összhangban volt az RPR-pozitív mintákban látott eredményekkel, ahol ennek ellenére több gyengén pozitív mintát is megerősített a KHV.
a pozitív treponemális antitest eredmény relevanciájának meghatározása negatív RPR-ben szenvedő beteg esetében kihívást jelenthet, különösen egyértelmű klinikai anamnézis hiányában. Ezért kritikus fontosságú az analitikai hamis pozitív eredmények azonosítása és minimalizálása. Ebben a jelentésben bemutatjuk, hogy a SYPHG érték segíthet a döntés tájékoztatásában, és felhasználható a reflexvizsgálat stratégiájának kidolgozásakor. Bár az ebben a tanulmányban alkalmazott szűrési vizsgálatot az FDA mennyiségi vizsgálatként nem törölte, ezek az adatok arra utalnak, hogy a semiquantitiative AI eredmény továbbra is hasznos információkat nyújthat a megerősítő tesztelés szükségességével kapcsolatban. Ezen adatok alapján az alábbi algoritmust kínáljuk a szifilisz szűrésére intézményünkben. Minden olyan mintát, amely a kezdeti szifilisz szűrővizsgálat során reaktív, az RPR tovább tesztel. Az RPR-pozitív minták nem igényelnek további vizsgálatokat, függetlenül a SYPHG teszt kezdeti AI-jétől. Ezzel szemben a <6.0 kezdeti SYPHG eredményeivel végzett RPR-negatív teszteket automatikusan megerősítő EIA-nak vetik alá. Ez az algoritmus korlátozza reflex EIA vizsgálat nagyjából 1% – A küldött minták szifilisz vizsgálat, de összpontosít a minták legvalószínűbb, hogy ellentmondásos eredményeket.
az egyik korlátozás az, hogy a különböző gyártók treponemális tesztjeinek szabványosításának hiánya miatt az ebben a tanulmányban azonosított specifikus SYPHG AI értékek csak azokra az esetekre vonatkoznak, amikor az első szűrést a Bioplex assay segítségével végzik. Az itt bemutatott megközelítés azonban könnyen kiértékelhető más teszteknél annak érdekében, hogy meghatározzuk az ideális vágási értéket a reflex tesztelés kiváltásához. Fontos szempont, hogy megerősítő vizsgálat végrehajtásakor olyan vizsgálati módszerrel kell elvégezni, amely analitikai érzékenységgel rendelkezik a treponemális antitestek alacsony koncentrációjának kimutatására, amely egyenlő vagy jobb, mint a szűrővizsgálat. A jelenlegi treponemális vizsgálatok relatív analitikai érzékenységének szisztematikus elemzése értékes eszköz lenne a laboratóriumok számára a megfelelő vizsgálati algoritmusok létrehozásához.
a treponemal versus nontreponemal vizsgálatok relatív előnyeinek meghatározása a betegek szifilisz fertőzés értékeléséhez további vizsgálatot igényel. A módszertől függetlenül azonban a laboratóriumoknak megközelítéseket kell kidolgozniuk az analitikai hamis pozitív eredmények azonosítására, ahol csak lehetséges. A treponemális vizsgálatok analitikai teljesítményjellemzőinek megértése, valamint a megerősítő tesztelés kiváltására szolgáló assay-specifikus kivágások létrehozása olyan megközelítés, amely segíthet ebben a tekintetben, különösen az alacsony prevalenciájú populációk szűrésekor.