TEKST
Syfilis er en seksuelt overførbar sykdom forårsaket av infeksjon med spirochete Treponema pallidum. På grunn av en manglende evne til rutinemessig kultur smittestoffet, diagnose av syfilis infeksjon er primært gjort av en kombinasjon av klinisk presentasjon og serologi. Denne serologiske testing kan grovt deles inn i to typer analyser: treponemal tester som tester for antistoffer rettet mot T. pallidum og nontreponemal tester som måler antikardiolipin antistoffer produsert under aktiv infeksjon.i de senere år har mange laboratorier skiftet til screening av pasienter med treponemal-analyse og deretter reflexing positive prøver til nontreponemal testing, en praksis som reverserer den historiske tilnærmingen. Det er pågående debatt i litteraturen om algoritmens relative fordeler. Mens en del av diskusjonen fokuserer på den kliniske relevansen av å identifisere treponemale antistoffer hos asymptomatiske pasienter og kostnadseffektiviteten til forskjellige screeningsalgoritmer (4, 8, 9), er en ytterligere bekymring den analytiske ytelsen til treponemale tester tilgjengelig på markedet (10). Selv om innledende studier antydet at frekvensen av analytiske falske positive resultater var relativt lav ved bruk av treponemal antistofftester for screening (3), identifiserte en nyere undersøkelse en høyere frekvens av ubekreftede positive resultater (2). Disse resultatene er imidlertid noe vanskelige å tolke, da flere forskjellige kombinasjoner av screening og bekreftende tester ble brukt. Mens mange studier har sammenlignet ytelsesegenskapene til ulike markedsførte treponemal-analyser (1, 5, 7), er en begrensning at treponemal serologiske resultater vanligvis anses å representere en binær variabel (dvs. «reaktiv» versus «ikke-reaktiv») i stedet for en kontinuerlig. For å løse dette, undersøkte vi om semiquantitative resultater gir ytterligere informasjon som er relevant for å bestemme pasientens serologiske status.Prøver ble analysert for tilstedeværelse av treponemal antistoffer ved bruk av to immunoassays: Bioplex 2200 syfilis IgG assay (SYPHG) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) og Trep-Sure assay (Phoenix BioTech Corp., Oakville, Ontario, Canada). Bioplex SYPHG-analysen er et perlebasert multipleksimmunoassay som bruker rekombinante treponemale antigener (Tp15, Tp17 og Tp47) som fangstreagens, etterfulgt av deteksjon med et murint Anti-humant IgG-phycoerythrin (PE) – konjugat (6). Resultatene uttrykkes som EN» antistoffindeks » (AI), som er en vilkårlig enhet relatert til forholdet mellom prøvesignal og kalibratordefinerte cutoffs. Trep-Sure er et mikroplatebasert enzymimmunoassay (EIA) som også bruker rekombinante treponemale antigener (i en proprietær blanding) som fangstreagenset, men benytter peroksidase-konjugerte treponemale antigener for deteksjon (11). Nontreponemal antistoff måling ble utført av rapid plasma reagin (RPR) testing (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).
Studieprøver ble valgt fra prøver sendt til vårt laboratorium for rutinemessig syfilis testing og analysert uten kunnskap om klinisk historie. Alikvoter fra prøver som var reaktive i den første Bioplex SYPHG-screeningen ble ytterligere testet av Både TREP-Sure EIA og RPR. Vårt laboratorium serverer en lav prevalenspopulasjon, med en innledende skjermpositiv rate på ca 3% basert på historiske data (data ikke vist).
totalt 142 prøver som ble identifisert som reaktive i den første Bioflex-screeninganalysen, gjennomgikk refleksprøving som beskrevet ovenfor. Tilstedeværelsen av treponemale antistoffer ble bekreftet av TREP-Sure EIA i 77% (110/142)av prøvene, en hastighet tilsvarende den som ble rapportert i tidligere multisenterstudier (3). Sannsynligheten for bekreftelse var imidlertid svært avhengig av både PASIENTENS RPR-status og SYPHG-verdien bestemt i Bioflex-screeninganalysen (Fig. 1). Treponemal antistoffstatus ble bekreftet AV EIA for alle rpr-positive prøver (n = 27), uavhengig av INITIAL SYPHG-verdi. I kontrast ble uoverensstemmende resultater bestemt for 28% (32/115) AV de RPR-negative pasientene, med en økende frekvens i prøver med lave SYPHG-verdier i den første screeningen. Receiver operating characteristic (ROC) analyse ble utført for å identifisere en cutoff verdi som ville gi en høy grad av spesifisitet for å identifisere «true-positive» (EIA-bekreftet) prøver (Fig. 2). En cutoff AI-verdi på 6,0, som gir 100% spesifisitet (konfidensintervall , 89,3 til 100,0%), ble valgt. Alle prøver med SCREENING SYPHG verdier over dette nivået (78/78) ble bekreftet AV EIA sammenlignet med bare 50% (32/64) av prøvene med screening SYPHG nivåer <6.0 AI (P< 0.0001 ).
Sammenligning av treponemal antistoff resultater. Totalt 142 prøver ble testet for treponemale antistoffer ved bruk av Både Bioplex og TREP-Sure (EIA) analyser samt FOR RPR reaktivitet. Resultatene er kategorisert ETTER SYPHG-verdien som ble oppdaget i den første Bioflex-screeningsanalysen.
ROC analyse AV SYPHG verdier for å forutsi sann-positive (EIA-bekreftet) prøver. Sensitivitet ble definert som identifisering av prøver med reaktive resultater i DEN bekreftende EIA. Verdien for arealet under kurven (AUC) er 0,919 (95% KI, 0,87 til 0,96), med 100% spesifisitet oppnådd ved ALLE AI-verdier ≥ 5,8. En 2-by-2 beredskapstabell konstruert ved hjelp av 6.0 AI som cutoff er også vist. Frekvensene AV EIA-bekreftede resultater for de to gruppene var signifikant forskjellige (P < 0,0001).for å sikre at denne forskjellen ikke skyldes forskjeller i analytisk følsomhet Mellom Bioplex-og Trep-Sure-analysene, ble fem sterkt positive prøver (SYPHG-resultater av >8,0 AI) fortynnet med normalt serum for å oppnå verdier mellom 1,0 til 2,0 AI i Bioplex-analysen. Alle fem av disse fortynnede prøvene ga positive resultater i Trep-Sure-analysen, noe som viste at denne bekreftende testen var i stand til å oppdage treponemale antistoffer ved disse lavere konsentrasjonene. Dette var i samsvar med resultatene sett I RPR-positive prøver, hvor flere svakt positive prøver likevel ble bekreftet av EIA.
å Bestemme relevansen av et positivt treponemalt antistoffresultat for en pasient med negativ RPR kan være utfordrende, spesielt i fravær av en klar klinisk anamnese. Av denne grunn er det viktig å identifisere og minimere analytiske falske positive resultater. I denne rapporten viser VI AT SYPHG-verdien kan bidra til å informere denne beslutningen og kan brukes når man utvikler en strategi for refleks testing. Selv om screeningsanalysen som ble brukt i denne studien ikke har blitt klarert AV FDA som en kvantitativ analyse, tyder disse dataene på at det semiquantitiative AI-resultatet fortsatt kan gi nyttig informasjon relatert til behovet for bekreftende testing. Basert på disse dataene, tilbyr vi følgende algoritme for syfilis screening på vår institusjon. Alle prøver som er reaktive i DEN første SYPHG screening test er videre testet AV RPR. RPR-positive prøver krever ingen ytterligere testing, uavhengig av den første AI I SYPHG-analysen. I motsetning til DETTE blir RPR-negative tester med innledende SYPHG-resultater av <6.0 automatisk underlagt bekreftende EIA. Denne algoritmen begrenser refleks EIA testing til omtrent 1% av prøvene sendt for syfilis testing, men fokuserer på prøvene mest sannsynlig å ha uharmoniske resultater.
en begrensning er at PÅ grunn av manglende standardisering av treponemal-analyser fra forskjellige produsenter, gjelder DE spesifikke SYPHG AI-verdiene som er identifisert i denne studien bare for de tilfellene der første screening utføres Ved Bruk Av Bioflex-analysen. Imidlertid kan tilnærmingen vist her lett evalueres for andre analyser for å bestemme den ideelle cutoff-verdien for å utløse refleks testing. Et viktig poeng er at når bekreftende testing er implementert, må det gjøres ved hjelp av en analyse som har en analytisk følsomhet for å oppdage lave konsentrasjoner av treponemale antistoffer som er lik eller bedre enn screeningsanalysen. En systematisk analyse av de relative analytiske følsomhetene til nåværende treponemal-analyser vil være et verdifullt verktøy for å hjelpe laboratorier med å etablere passende testalgoritmer.Å Bestemme de relative fordelene ved å bruke treponemal versus nontreponemal-analyser for å evaluere pasienter for syfilisinfeksjon krever videre studier. Uansett metode bør laboratorier imidlertid utvikle tilnærminger for å identifisere analytiske falske positive resultater når det er mulig. Å forstå de analytiske ytelsesegenskapene til treponemal-analyser, sammen med å etablere analysespesifikke cutoffs for å utløse bekreftende testing, er en tilnærming som kan brukes til å hjelpe i denne forbindelse, spesielt når man screener lavprevalenspopulasjoner.