PMC

TEXT

syfilis är en sexuellt överförbar sjukdom orsakad av infektion med spirochete Treponema pallidum. På grund av en oförmåga att rutinmässigt odla smittämnet görs diagnos av syfilisinfektion främst genom en kombination av klinisk presentation och serologi. Denna serologiska testning kan i stort sett delas in i två typer av analyser: treponemala tester som testar för antikroppar riktade mot T. pallidum och nontreponemal tester som mäter antikardiolipinantikroppar som produceras under aktiv infektion.

under de senaste åren har många laboratorier skiftat till screeningpatienter med en treponemal analys och sedan reflekterat positiva prover till icke-reponemal testning, en praxis som vänder den historiska metoden. Det pågår debatt i litteraturen om algoritmernas relativa fördelar. Medan en del av diskussionen fokuserar på den kliniska relevansen av att identifiera treponemala antikroppar hos asymptomatiska patienter och kostnadseffektiviteten hos olika screeningalgoritmer (4, 8, 9), är en ytterligare oro den analytiska prestandan hos treponemala tester som finns tillgängliga på marknaden (10). Även om initiala studier föreslog att frekvensen av analytiska falskt positiva resultat var relativt låg vid användning av treponemala antikroppstester för screening (3), identifierade en nyare undersökning en högre frekvens av obekräftade positiva resultat (2). Dessa resultat är dock något svåra att tolka, eftersom flera olika kombinationer av screening och bekräftande tester användes. Medan många studier har jämfört prestandaegenskaperna hos olika marknadsförda treponemala analyser (1, 5, 7) är en begränsning att treponemala serologiska resultat vanligtvis anses representera en binär variabel (dvs ”reaktiv” kontra ”icke-reaktiv”) snarare än en kontinuerlig. För att ta itu med detta undersökte vi om semikvantitativa resultat ger ytterligare information som är relevant för att bestämma patientens serologiska status.

prover analyserades för närvaron av treponemala antikroppar genom användning av två immunanalyser: Bioplex 2200 syfilis IGG-analys (SYPHG) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) och Trep-Sure-analysen (Phoenix BioTech Corp., Oakville, Ontario, Kanada). Bioplex SYPHG-analysen är en pärlbaserad multipleximmunanalys som använder rekombinanta treponemala antigener (Tp15, Tp17 och Tp47) som infångningsreagens, följt av detektion med ett Murin anti-humant IgG-phycoerythrin (PE) konjugat (6). Resultaten uttrycks som ett” antikroppsindex ” (AI), vilket är en godtycklig enhet relaterad till förhållandet mellan provsignal och kalibratordefinierade cutoffs. Trep-Sure är en mikroplattbaserad enzymimmunanalys (EIA) som också använder rekombinanta treponemala antigener (i en proprietär blandning) som infångningsreagens men använder peroxidas-konjugerade treponemala antigener för detektion (11). Icke-reponemal antikroppsmätning utfördes genom snabb plasma reagin (RPR) testning (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).

studieprover valdes från prover som skickades till vårt laboratorium för rutinmässig syfilistestning och analyserades utan kunskap om kliniska historier. Alikvoter från prover som var reaktiva vid den initiala Bioplex SYPHG-screeningen testades ytterligare av både Trep-Sure EIA och RPR. Vårt laboratorium betjänar en population med låg prevalens, med en initial skärmpositiv hastighet på cirka 3% baserat på historiska data (data visas inte).

totalt 142 prover som identifierades som reaktiva i den initiala Bioplex screeninganalysen genomgick reflextestning som beskrivits ovan. Förekomsten av treponemala antikroppar bekräftades av TREP-Sure MKB i 77% (110/142) av proverna, en hastighet som liknar den som rapporterats i tidigare multicenterstudier (3). Sannolikheten för bekräftelse var dock starkt beroende av både patientens RPR-status och SYPHG-värdet bestämt i Bioplex-screeninganalysen (Fig. 1). Treponemal antikroppsstatus bekräftades av MKB för alla RPR-positiva prover (n = 27), oavsett det initiala SYPHG-värdet. Däremot bestämdes diskordanta resultat för 28% (32/115) av de RPR-negativa patienterna, med en ökande frekvens i prover med låga SYPHG-värden vid den initiala screeningen. Mottagaroperationskarakteristik (ROC)-analys utfördes för att identifiera ett cutoff-värde som skulle ge en hög specificitet för att identifiera ”true-positive” (MKB-bekräftade) prover (Fig. 2). Ett cutoff AI-värde på 6,0, vilket gav 100% specificitet (konfidensintervall , 89,3 till 100,0%), valdes. Alla prover med screening SYPHG-värden över denna nivå (78/78) bekräftades av MKB jämfört med endast 50% (32/64) av proverna med screening SYPHG-nivåer < 6.0 AI (P < 0.0001 ).

för att säkerställa att denna skillnad inte berodde på skillnader i analytisk känslighet mellan Bioplex-och Trep-Sure-analyserna späddes fem starkt positiva prover (SYPHG-resultat av > 8,0 AI) med normalt serum för att uppnå värden mellan 1,0 och 2,0 AI i Bioplex-analysen. Alla fem av dessa utspädda prover gav positiva resultat i trep-Sure-analysen, vilket visade att detta bekräftande test kunde detektera treponemala antikroppar vid dessa lägre koncentrationer. Detta överensstämde med resultaten i RPR-positiva prover, där flera svagt positiva prover ändå bekräftades av MKB.att bestämma relevansen av ett positivt treponemalt antikroppsresultat för en patient med en negativ RPR kan vara utmanande, särskilt i avsaknad av en tydlig klinisk historia. Av denna anledning är det viktigt att identifiera och minimera analytiska falskt positiva resultat. I denna rapport visar vi att SYPHG-värdet kan bidra till att informera detta beslut och kan användas vid utveckling av en strategi för reflextestning. Även om screeninganalysen som används i denna studie inte har rensats av FDA som en kvantitativ analys, tyder dessa data på att det semikvantitiativa AI-resultatet fortfarande kan ge användbar information relaterad till behovet av bekräftande testning. Baserat på dessa data erbjuder vi följande algoritm för syfilisscreening hos vår institution. Alla prover som är reaktiva i det initiala SYPHG-screeningtestet testas ytterligare av RPR. RPR-positiva prover kräver ingen ytterligare testning, oavsett den initiala AI i SYPHG-analysen. Däremot utsätts RPR-negativa tester med initiala SYPHG-resultat av <6.0 automatiskt för bekräftande MKB. Denna algoritm begränsar reflex EIA-testning till ungefär 1% av proverna som skickas för syfilistestning men fokuserar på de prover som troligen har ojämna resultat.

en begränsning är att på grund av brist på standardisering av treponemala analyser från olika tillverkare gäller de specifika SYPHG AI-värdena som identifierats i denna studie endast de fall där initial screening utförs med hjälp av Bioplex-analysen. Det tillvägagångssätt som demonstreras här kan emellertid lätt utvärderas för andra analyser för att bestämma det ideala cutoff-värdet för att utlösa reflextestning. En viktig punkt är att när bekräftande testning implementeras måste det göras med hjälp av en analys som har en analytisk känslighet för att detektera låga koncentrationer av treponemala antikroppar lika med eller bättre än screeninganalysens. En systematisk analys av de relativa analytiska känsligheterna hos nuvarande treponemala analyser skulle vara ett värdefullt verktyg för att hjälpa laboratorier att upprätta lämpliga testalgoritmer.

att bestämma de relativa fördelarna med att använda treponemal kontra icke-reponemala analyser för att utvärdera patienter för syfilisinfektion kräver ytterligare studier. Oavsett metod bör laboratorier dock utveckla metoder för att identifiera analytiska falskt positiva resultat där det är möjligt. Att förstå de analytiska prestandaegenskaperna hos treponemala analyser, tillsammans med att fastställa analysspecifika cutoffs för att utlösa bekräftande testning, är ett tillvägagångssätt som kan användas för att hjälpa till i detta avseende, särskilt vid screening av populationer med låg prevalens.