tekst
kiła jest chorobą przenoszoną drogą płciową spowodowaną zakażeniem krętkiem Treponema pallidum. Ze względu na niezdolność do rutynowej hodowli czynnika zakaźnego, rozpoznanie zakażenia kiłą odbywa się przede wszystkim przez połączenie prezentacji klinicznej i serologii. To badanie serologiczne można ogólnie podzielić na dwa rodzaje testów: testy treponemalne, które testują przeciwciała skierowane przeciwko T. testy pallidum i nontreponemal mierzące Przeciwciała antykardiolipinowe wytwarzane podczas aktywnego zakażenia.
w ostatnich latach wiele laboratoriów przeniosło się na badania przesiewowe pacjentów z testem treponemalnym, a następnie odruchowe próbki dodatnie do badań nietreponemalnych, praktyka, która odwraca historyczne podejście. W literaturze toczy się debata na temat względnych zalet algorytmów. Podczas gdy część dyskusji koncentruje się na znaczeniu klinicznym identyfikacji przeciwciał treponemalnych u pacjentów bezobjawowych i opłacalności różnych algorytmów przesiewowych (4, 8, 9), dodatkowym problemem jest wydajność analityczna testów treponemalnych dostępnych na rynku (10). Chociaż wstępne badania sugerowały, że odsetek wyników analitycznych fałszywie dodatnich był stosunkowo niski w przypadku stosowania testów na obecność przeciwciał treponemalnych do badań przesiewowych (3), nowsze badania wykazały większą częstotliwość niepotwierdzonych wyników dodatnich (2). Wyniki te są jednak nieco trudne do zinterpretowania, ponieważ zastosowano kilka różnych kombinacji badań przesiewowych i potwierdzających. Podczas gdy wiele badań porównało charakterystykę wydajności różnych sprzedawanych testów treponemalnych (1, 5, 7), jednym z ograniczeń jest to, że wyniki serologii treponemalnej są zwykle uważane za zmienną binarną (tj. „reaktywną” w porównaniu z „niereaktywną”), a nie ciągłą. Aby temu zaradzić, zbadaliśmy, czy wyniki semiquantitative dostarczają dodatkowych informacji istotnych dla określenia stanu serologicznego pacjenta.
Próbki analizowano pod kątem obecności przeciwciał treponemalnych przy użyciu dwóch testów immunologicznych: Bioplex 2200 syphilis IgG assay (SYPHG) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) i trep-Sure assay (Phoenix BioTech Corp., Oakville, Ontario, Kanada). Test Bioplex SYPHG jest MULTIPLEKSOWYM testem immunologicznym opartym na koralikach, który wykorzystuje rekombinowane antygeny treponemalne (Tp15, Tp17 i Tp47) jako odczynnik wychwytujący, a następnie wykrywa się mysi anty-ludzki koniugat IgG-fikoerytryny (PE) (6). Wyniki są wyrażone jako „wskaźnik przeciwciał” (AI), który jest arbitralną jednostką związaną ze stosunkiem sygnału próbki do odcięcia zdefiniowanego przez kalibrator. Trep-Sure jest enzymatycznym testem immunologicznym opartym na mikropłytkach (EIA), który również wykorzystuje rekombinowane antygeny treponemalne (w zastrzeżonej mieszaninie) jako odczynnik wychwytywający, ale wykorzystuje do wykrywania antygeny treponemalne sprzężone z peroksydazą (11). Pomiar nietreponemalnych przeciwciał przeprowadzono za pomocą szybkich testów odczynników plazmatycznych (RPR) (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).
próbki do badań zostały wybrane z próbek wysłanych do naszego laboratorium do rutynowych badań kiły i przeanalizowane bez znajomości historii klinicznej. Alikwoty z próbek, które były reaktywne w początkowym badaniu przesiewowym Bioplex SYPHG, były dalej testowane zarówno przez Trep-Sure EIA, jak i RPR. Nasze laboratorium obsługuje populację o niskiej częstości występowania, z początkowym pozytywnym wskaźnikiem przesiewowym wynoszącym około 3% w oparciu o Dane historyczne (dane nie pokazane).
łącznie 142 próbki, które zidentyfikowano jako reaktywne w początkowym teście przesiewowym Bioplexu, poddano badaniu odruchowemu, jak opisano powyżej. Obecność przeciwciał treponemalnych została potwierdzona przez EIA Trep-Sure w 77% (110/142) próbek, w tempie podobnym do odnotowanego we wcześniejszych badaniach wieloośrodkowych (3). Jednak prawdopodobieństwo potwierdzenia było w dużym stopniu zależne zarówno od stanu RPR pacjenta, jak i wartości SYFG określonej w teście przesiewowym Bioplex (Fig. 1). Status przeciwciał treponemalnych został potwierdzony przez EIA dla wszystkich próbek RPR-dodatnich (n = 27), niezależnie od początkowej wartości SYFG. W przeciwieństwie do tego, rozbieżne wyniki oznaczono dla 28% (32/115) pacjentów z ujemnym RPR, z coraz większą częstością w próbkach o niskich wartościach SYFG w początkowym badaniu przesiewowym. Przeprowadzono analizę charakterystyki operacyjnej odbiornika (Roc) w celu zidentyfikowania wartości odcięcia, która zapewniłaby wysoki poziom specyficzności dla identyfikacji próbek „prawdziwie dodatnich” (EIA-confirmed) (Fig. 2). Wybrano wartość odcięcia AI wynoszącą 6,0, zapewniającą 100% swoistość (przedział ufności, 89,3 do 100,0%). Wszystkie próbki z przesiewowymi wartościami SYFG powyżej tego poziomu (78/78) zostały potwierdzone przez EIA w porównaniu do tylko 50% (32/64) próbek z przesiewowymi wartościami SYFG < 6,0 AI (P < 0,0001 ).
porównanie wyników przeciwciał treponemalnych. Łącznie 142 próbki przebadano na obecność przeciwciał treponemalnych przy użyciu testów Bioplex i Trep-Sure (EIA), jak również na reaktywność RPR. Wyniki są klasyfikowane według wartości SYFG wykrytej w początkowym teście przesiewowym Bioplex.
analiza ROC wartości SYPHG do przewidywania próbek true-dodatnich (potwierdzonych EIA). Czułość zdefiniowano jako identyfikację próbek z reaktywnymi wynikami w potwierdzającym OOŚ. Wartość pola pod krzywą (AUC) wynosi 0,919 (95% CI, 0,87 do 0,96), przy czym 100% swoistości uzyskuje się przy wszystkich wartościach AI ≥ 5,8. Pokazano również tabelę awaryjną 2-na-2 skonstruowaną przy użyciu sztucznej inteligencji 6.0 jako odcięcia. Częstość występowania potwierdzonych wyników badania EIA w obu grupach była znacząco różna (P < 0,0001).
aby upewnić się, że ta rozbieżność nie była spowodowana różnicami w czułości analitycznej między testami Bioplex i Trep-Sure, pięć silnie dodatnich próbek (wyniki SYPHG>8, 0 AI) rozcieńczono normalną surowicą, aby osiągnąć wartości między 1, 0 a 2, 0 AI w teście Bioplex. Wszystkie pięć z tych rozcieńczonych próbek dało pozytywne wyniki w teście Trep-Sure, wykazując, że ten test potwierdzający był w stanie wykryć przeciwciała treponemalne w tych niższych stężeniach. Było to zgodne z wynikami obserwowanymi w próbkach RPR-dodatnich, w których kilka słabo dodatnich próbek zostało jednak potwierdzonych przez OOŚ.
określenie znaczenia dodatniego wyniku przeciwciała treponemalnego dla pacjenta z ujemnym RPR może być trudne, szczególnie w przypadku braku jasnego wywiadu klinicznego. Z tego powodu kluczowe znaczenie ma identyfikacja i minimalizacja wyników analitycznych fałszywie dodatnich. W tym raporcie wykazujemy, że wartość SYPHG może pomóc w podjęciu tej decyzji i może być wykorzystana przy opracowywaniu strategii badań odruchowych. Chociaż test przesiewowy stosowany w tym badaniu nie został zatwierdzony przez FDA jako test ilościowy, dane te sugerują, że wynik SEMIQUANTYTIATIVE AI może nadal dostarczać użytecznych informacji związanych z potrzebą badań potwierdzających. Na podstawie tych danych oferujemy następujący algorytm badania przesiewowego kiły w naszej instytucji. Wszystkie próbki, które są reaktywne w początkowym teście przesiewowym SYPHG, są dalej testowane przez RPR. RPR-dodatnie próbki nie wymagają dalszych badań, niezależnie od początkowej AI w teście SYPHG. Natomiast testy RPR-ujemne z początkowymi wynikami SYPHG <6.0 są automatycznie poddawane potwierdzającej EIA. Algorytm ten ogranicza odruchowe badanie EIA do około 1% próbek wysyłanych do badania kiły, ale koncentruje się na próbkach, które najprawdopodobniej mają sprzeczne wyniki.
jednym z ograniczeń jest to, że ze względu na brak standaryzacji testów treponemalnych od różnych producentów, określone wartości SYPHG AI określone w tym badaniu dotyczą tylko przypadków, w których wstępne badanie przesiewowe przeprowadza się przy użyciu testu Bioplex. Jednakże przedstawione tutaj podejście można łatwo ocenić dla innych testów w celu określenia idealnej wartości odcięcia w celu uruchomienia testów odruchowych. Ważną kwestią jest to, że w przypadku wdrożenia testu potwierdzającego należy go wykonać przy użyciu testu, który ma czułość analityczną do wykrywania niskich stężeń przeciwciał treponemalnych równych lub lepszych niż w teście przesiewowym. Systematyczna analiza względnej wrażliwości analitycznej obecnych testów treponemalnych byłaby cennym narzędziem pomagającym laboratoriom w tworzeniu odpowiednich algorytmów testowania.
określenie względnych zalet stosowania testów treponemalnych w porównaniu z testami nietreponemalnymi w celu oceny pacjentów z zakażeniem kiłą wymaga dalszych badań. Niezależnie jednak od metody laboratoria powinny opracować metody identyfikacji wyników analitycznych fałszywie dodatnich w miarę możliwości. Zrozumienie analitycznej charakterystyki wydajności testów treponemalnych, wraz z ustaleniem specyficznych dla testu odcięć w celu uruchomienia testów potwierdzających, jest podejściem, które może być wykorzystane w tym względzie, szczególnie w przypadku badań przesiewowych populacji o niskim wskaźniku rozpowszechnienia.