PMC

teksti

kuppa on sukupuolitauti, jonka aiheuttaa spirokeeta Treponema pallidum-infektio. Koska kyvyttömyys rutiininomaisesti viljellä tarttuvan aineen, diagnoosi syfilis infektio tehdään ensisijaisesti yhdistelmä kliinisen esityksen ja serologia. Tämä serologinen testaus voidaan jakaa karkeasti kahteen määritystyyppiin: treponemaalisiin testeihin, joissa testataan T: tä vastaan kohdistuvia vasta-aineita. pallidum-ja nontreponemaalitestit, joilla mitataan aktiivisen infektion aikana tuotettuja kardiolipiinivasta-aineita.

viime vuosina monet laboratoriot ovat siirtyneet seulomaan potilaita treponemaalimäärityksellä ja sitten refleksoimaan positiivisia näytteitä ei-reponemaalisiin testeihin, mikä kääntää historiallisen lähestymistavan päinvastaiseksi. Kirjallisuudessa käydään jatkuvaa keskustelua algoritmien suhteellisista ansioista. Vaikka osa keskustelusta keskittyy treponemaalisten vasta-aineiden tunnistamisen kliiniseen merkitykseen oireettomilla potilailla ja erilaisten seulonta-algoritmien kustannustehokkuuteen (4, 8, 9), lisähuolena on markkinoilla olevien treponemaalitestien analyyttinen suorituskyky (10). Vaikka alustavat tutkimukset viittasivat siihen, että analyyttisten väärien positiivisten tulosten määrä oli suhteellisen pieni käytettäessä seulontaan treponemaalisia vasta-ainetestejä (3), tuoreemmassa tutkimuksessa vahvistamattomien positiivisten tulosten esiintyvyys oli suurempi (2). Näitä tuloksia on kuitenkin hieman vaikea tulkita, sillä käytössä oli useita erilaisia seulonta-ja varmistustestien yhdistelmiä. Vaikka monissa tutkimuksissa on verrattu erilaisten markkinoitujen treponemaalisten määritysten suoritusarvoja (1, 5, 7), yksi rajoitus on, että treponemaalisten serologiatulosten katsotaan yleensä edustavan binäärimuuttujaa (eli ”reaktiivista” vs. ”nonreactive”) eikä jatkuvaa. Tämän selvittämiseksi selvitimme, antavatko semikvantitatiiviset tulokset lisätietoja potilaan serologisen tilan määrittämiseksi.

näytteet analysoitiin treponeemisten vasta-aineiden varalta kahdella immunomäärityksellä: Bioplex 2200 syphil IgG-määrityksellä (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) ja Trep-Sure-määrityksellä (Phoenix BioTech Corp., Oakville, Ontario, Kanada). Bioplex SYPHG-määritys on helmipohjainen multiplex-immunomääritys, jossa käytetään rekombinantteja treponemaalisia antigeenejä (Tp15, Tp17 ja Tp47) sieppausreagenssina, minkä jälkeen määritys tehdään hiiren anti-human IgG-phycoerytriini (PE) – konjugaatilla (6). Tulokset ilmaistaan” vasta-aineindeksinä ” (AI), joka on mielivaltainen yksikkö, joka liittyy näytesignaalin ja kalibraattorin määrittelemien katkosten suhteeseen. Trep-Sure on mikrotiitterilevypohjainen entsyymi-immunomääritys (EIA), joka käyttää myös rekombinantteja treponemaaliantigeenejä (patentoidussa seoksessa) sieppausreagenssina, mutta käyttää havaitsemiseen peroksidaasikonjugoituja treponemaaliantigeenejä (11). Nontreponemal vasta-ainemittaus suoritettiin nopealla plasmareagiinitestillä (RPR) (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).

tutkimusnäytteet valittiin näytteistä, jotka lähetettiin laboratorioomme rutiininomaiseen syfilistestaukseen ja analysoitiin ilman tietoa kliinisestä historiasta. Sekä Trep-Sure EIA että RPR testasivat edelleen näytteitä näytteistä, jotka olivat reaktiivisia alkuperäisessä Bioplex SYPHG-seulonnassa. Laboratoriomme palvelee vähän esiintyvää väestöä, jonka alkuperäinen seulontapositiivisuus on noin 3% perustuen historiallisiin tietoihin (tietoja ei näy).

yhteensä 142 näytteelle, joiden todettiin olevan reaktiivisia ensimmäisessä Bioplex-seulontakokeessa, tehtiin edellä kuvattu refleksitesti. Treponemaalisten vasta-aineiden esiintyminen varmistettiin Trep-Sure EIA: lla 77%: ssa (110 / 142) näytteistä, mikä on sama määrä kuin aiemmissa monikeskustutkimuksissa (3). Varmistumisen todennäköisyys riippui kuitenkin suuresti sekä potilaan RPR-tilasta että Bioplex-seulontakokeessa määritetystä SYPHG-arvosta (Kuva. 1). Treponemaalinen vasta-ainetila vahvistettiin EIA: lla kaikille RPR-positiivisille näytteille (n = 27) alkuperäisestä SYPHG-arvosta riippumatta. Sitä vastoin epäsopivat tulokset määritettiin 28%: lle (32 / 115) RPR-negatiivisista potilaista, ja niitä esiintyi yhä useammin näytteissä, joiden SYPHG-arvot olivat alhaiset alkuseulonnassa. Receiver operating characteristic (Roc)-analyysi tehtiin sellaisen raja-arvon tunnistamiseksi, joka antaisi korkean spesifisyyden ”true-positiivisten” (EIA-vahvistettujen) näytteiden tunnistamiseksi (Kuva. 2). Cutoff tekoäly arvo 6, 0, joka tarjoaa 100% spesifisyys (luottamusväli , 89, 3-100, 0%), valittiin. YVA vahvisti kaikki näytteet, joiden seulontasyfg-arvot ylittivät tämän tason (78/78), kun taas vain 50 prosenttia (32/64) näytteistä, joiden seulontasyfg-tasot < 6, 0 AI (p < 0, 0001 ).

sen varmistamiseksi, että ero ei johtunut eroista analyyttisessä herkkyydessä Bioplex-ja Trep-Sure-määritysten välillä, viisi vahvasti positiivista näytettä (SYPHG-tulokset >8, 0 AI) laimennettiin normaalilla seerumilla, jotta Bioplex-määrityksessä saavutettiin arvot 1, 0-2, 0 AI. Kaikki viisi laimennettua näytettä antoivat positiivisen tuloksen Trep-Sure-määrityksessä, mikä osoitti, että tällä varmistustestillä pystyttiin havaitsemaan treponemaalisia vasta-aineita näillä pienemmillä pitoisuuksilla. Tämä oli yhdenmukaista RPR-positiivisista näytteistä saatujen tulosten kanssa, joissa useita heikosti positiivisia näytteitä kuitenkin vahvistettiin YVA: lla.

positiivisen treponemaalisen vasta-ainetuloksen relevanssin määrittäminen potilailla, joilla on negatiivinen RPR, voi olla haastavaa, varsinkin jos potilaan kliininen tausta on selvä. Tästä syystä on tärkeää tunnistaa ja minimoida analyyttiset väärät positiiviset tulokset. Tässä mietinnössä osoitamme, että SYPHG-arvo voi auttaa tiedottamaan tästä päätöksestä ja että sitä voidaan käyttää kehittäessämme refleksitestausstrategiaa. Vaikka FDA ei ole hyväksynyt tässä tutkimuksessa käytettyä seulontamääritystä kvantitatiivisena määrityksenä, nämä tiedot viittaavat siihen, että puolikvantiatiivisesta lintuinfluenssan tuloksesta voidaan edelleen saada hyödyllistä tietoa varmistustestien tarpeesta. Näiden tietojen perusteella tarjoamme laitoksellamme seuraavan algoritmin kuppaseulontaan. RPR testaa edelleen kaikki näytteet, jotka ovat reaktiivisia ensimmäisessä SYPHG-seulontatestissä. RPR-positiiviset näytteet eivät vaadi lisätestausta riippumatta alkuperäisestä tekoälystä SYPHG-määrityksessä. Sen sijaan RPR-negatiivisille testeille, joiden alkuperäinen SYPHG-tulos on <6.0, tehdään automaattisesti varmistava YVA. Tämä algoritmi rajoittaa refleksi EIA testaus noin 1% näytteistä lähetetään syfilis testaus mutta keskittyy näytteisiin todennäköisimmin on epäsopivia tuloksia.

yksi rajoitus on, että koska eri valmistajien treponemal-määrityksiä ei ole standardoitu, tässä tutkimuksessa määritettyjä SYPHG-lintuinfluenssan arvoja sovelletaan vain tapauksiin, joissa alustava seulonta suoritetaan Bioplex-määrityksellä. Tässä esitettyä lähestymistapaa voidaan kuitenkin helposti arvioida muissa määrityksissä, jotta voidaan määrittää ihanteellinen raja-arvo refleksitestauksen käynnistämiseksi. Tärkeä seikka on, että varmistustesteissä on käytettävä määritystä, jonka analyyttinen herkkyys pienten treponemaalisten vasta-aineiden pitoisuuksien havaitsemiseksi on sama tai parempi kuin seulontatestissä. Nykyisten treponemaalisten määritysten suhteellisten analyyttisten herkkyyksien systemaattinen analyysi olisi arvokas väline, jonka avulla laboratoriot voisivat laatia asianmukaisia testausalgoritmeja.

treponemalin ja ei-reponemaalisten määritysten suhteellisen hyödyn määrittäminen kuppatartunnan arvioimiseksi vaatii lisätutkimuksia. Menetelmästä riippumatta laboratorioiden olisi kuitenkin mahdollisuuksien mukaan kehitettävä lähestymistapoja väärien positiivisten analyyttisten tulosten tunnistamiseksi. Treponemaalisten määritysten analyyttisten suorituskykyominaisuuksien ymmärtäminen sekä määrityskohtaisten raja-arvojen määrittäminen varmistustestauksen käynnistämiseksi on lähestymistapa, jota voidaan käyttää apuna tässä suhteessa, erityisesti kun seulotaan alhaisen esiintyvyyden populaatioita.