PMC

tekst

syfilis er en seksuelt overført sygdom forårsaget af infektion med spirochete Treponema pallidum. På grund af manglende evne til rutinemæssigt at dyrke det infektiøse middel, diagnose af syfilisinfektion udføres primært ved en kombination af klinisk præsentation og serologi. Denne serologiske test kan bredt opdeles i to typer analyser: treponemale tests, der tester for antistoffer rettet mod T. pallidum og nontreponemal test, der måler anticardiolipin antistoffer produceret under aktiv infektion.

i de senere år har mange laboratorier skiftet til screening af patienter med en treponemal assay og derefter reflekteret positive prøver til nontreponemal test, en praksis, der vender den historiske tilgang. Der er løbende debat i litteraturen om algoritmernes relative fordele. Mens en del af diskussionen fokuserer på den kliniske relevans af at identificere treponemale antistoffer hos asymptomatiske patienter og omkostningseffektiviteten af forskellige screeningsalgoritmer (4, 8, 9), er en yderligere bekymring den analytiske ydeevne af treponemale tests tilgængelige på markedet (10). Selvom indledende undersøgelser antydede, at frekvensen af analytiske falsk-positive resultater var relativt lav, når der blev anvendt treponemal antistoftest til screening (3), identificerede en nyere undersøgelse en højere frekvens af ubekræftede positive resultater (2). Disse resultater er imidlertid noget vanskelige at fortolke, da der blev anvendt flere forskellige kombinationer af screening og bekræftende tests. Mens mange undersøgelser har sammenlignet præstationsegenskaberne for forskellige markedsførte treponemalassays (1, 5, 7), er en begrænsning, at treponemal serologiresultater normalt anses for at repræsentere en binær variabel (dvs. “reaktiv” versus “ikke-reaktiv”) snarere end en kontinuerlig. For at løse dette undersøgte vi, om semikvantitative resultater giver yderligere oplysninger, der er relevante for at bestemme en patients serologiske status.prøver blev analyseret for tilstedeværelsen af treponemale antistoffer ved anvendelse af to immunoassays: biopleks 2200 syfilis IgG assay (SYPHG) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) og Trep-Sure assay (Phoenicis BioTech Corp., Oakville, Ontario, Canada). SYPHG-analysen er et perlebaseret multipleksimmunoassay, der bruger rekombinante treponemale antigener (Tp15, Tp17 og Tp47) som indfangningsreagens efterfulgt af påvisning med et Murin anti-humant IgG-phycoerythrin (PE) konjugat (6). Resultaterne udtrykkes som et “antistofindeks” (AI), som er en vilkårlig enhed relateret til forholdet mellem prøvesignal og kalibratordefinerede afskæringer. Trep-Sure er et mikropladebaseret immunoassay (EIA), der også bruger rekombinante treponemale antigener (i en proprietær blanding) som indfangningsreagens, men bruger peroksidase-konjugerede treponemale antigener til påvisning (11). Nontreponemal antistofmåling blev udført ved hurtig plasma reagin (RPR) test (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).

Undersøgelsesprøver blev udvalgt fra prøver sendt til vores laboratorium til rutinemæssig syfilis test og analyseret uden kendskab til kliniske historier. Alikvoter fra prøver, der var reaktive i den indledende SYPHG-screening, blev yderligere testet af både Trep-Sure VVM og RPR. Vores laboratorium tjener en population med lav prævalens med en indledende screen-positiv rate på cirka 3% baseret på Historiske data (data ikke vist).

i alt 142 prøver, der blev identificeret som reaktive i den indledende biopleks screeningsanalyse, gennemgik reflekstest som beskrevet ovenfor. Tilstedeværelsen af treponemale antistoffer blev bekræftet af Trep-Sure VVM i 77% (110/142) af prøverne, en hastighed svarende til den, der blev rapporteret i tidligere multicenterundersøgelser (3). Sandsynligheden for bekræftelse var imidlertid stærkt afhængig af både patientens RPR-status og SYPHG-værdien bestemt i biopleks screeningsassayet (Fig. 1). Treponemal antistofstatus blev bekræftet af VVM for alle RPR-positive prøver (n = 27), uanset den oprindelige SYPHG-værdi. I modsætning hertil blev uoverensstemmende resultater bestemt for 28% (32/115) af de RPR-negative patienter med en stigende frekvens i prøver med lave SYPHG-værdier i den indledende screening. Modtager driftskarakteristik (ROC) analyse blev udført for at identificere en afskæringsværdi, der ville give et højt niveau af specificitet til identifikation af “sand-positive” (VVM-bekræftede) prøver (Fig. 2). En cutoff AI-værdi på 6,0, der giver 100% specificitet (konfidensinterval , 89,3 til 100,0%), blev valgt. Alle prøver med screeningssyphg-værdier over dette niveau (78/78) blev bekræftet af VVM sammenlignet med kun 50% (32/64) af prøverne med screeningssyphg-niveauer < 6.0 AI (P < 0.0001 ).

for at sikre, at denne forskel ikke skyldtes forskelle i analytisk følsomhed mellem biopleks-og Trep-Sure-analyserne, blev fem stærkt positive prøver (SYPHG-resultater af >8,0 AI) fortyndet med normalt serum for at opnå værdier mellem 1,0 til 2,0 AI i Biopleks-analysen. Alle fem af disse fortyndede prøver gav positive resultater i Trep-Sure-analysen, hvilket viste, at denne bekræftende test var i stand til at detektere treponemale antistoffer ved disse lavere koncentrationer. Dette var i overensstemmelse med resultaterne set i RPR-positive prøver, hvor flere svagt positive prøver ikke desto mindre blev bekræftet af VVM.det kan være udfordrende at bestemme relevansen af et positivt treponemalt antistofresultat for en patient med en negativ RPR, især i fravær af en klar klinisk historie. Af denne grund er det afgørende at identificere og minimere analytiske falsk-positive resultater. I denne rapport demonstrerer vi, at SYPHG-værdien kan hjælpe med at informere denne beslutning og kan bruges, når man udvikler en strategi for reflekstest. Selvom screeningsanalysen anvendt i denne undersøgelse ikke er blevet ryddet af FDA som et kvantitativt assay, antyder disse data, at det semikvantiative AI-resultat stadig kan give nyttige oplysninger relateret til behovet for bekræftende test. Baseret på disse data tilbyder vi følgende algoritme til syfilis screening på vores institution. Alle prøver, der er reaktive i den indledende SYPHG-screeningstest, testes yderligere af RPR. RPR-positive prøver kræver ingen yderligere test, uanset den oprindelige AI i SYPHG-analysen. I modsætning hertil udsættes RPR-negative tests med indledende SYPHG-resultater af <6.0 automatisk for bekræftende VVM. Denne algoritme begrænser refleks VVM-test til cirka 1% af prøverne sendt til syfilis-test, men fokuserer på de prøver, der mest sandsynligt har uoverensstemmende resultater.

en begrænsning er, at på grund af manglende standardisering af treponemal-analyser fra forskellige producenter, gælder de specifikke SYPHG AI-værdier, der er identificeret i denne undersøgelse, kun for de tilfælde, hvor indledende screening udføres ved hjælp af Biopleks-analysen. Imidlertid kan den her demonstrerede tilgang let evalueres for andre analyser for at bestemme den ideelle afskæringsværdi for at udløse reflekstest. Et vigtigt punkt er, at når bekræftende test gennemføres, skal det udføres ved hjælp af et assay, der har en analytisk følsomhed til påvisning af lave koncentrationer af treponemale antistoffer, der er lig med eller bedre end screeningsanalysen. En systematisk analyse af de relative analytiske følsomheder af nuværende treponemal-analyser ville være et værdifuldt værktøj til at hjælpe laboratorier med at etablere passende testalgoritmer.

bestemmelse af de relative fordele ved at bruge treponemal versus nontreponemal assays til evaluering af patienter for syfilisinfektion kræver yderligere undersøgelse. Uanset metoden bør laboratorier imidlertid udvikle tilgange til at identificere analytiske falsk-positive resultater, hvor det er muligt. Forståelse af de analytiske præstationsegenskaber ved treponemal-assays sammen med etablering af analysespecifikke cutoffs for at udløse bekræftende test er en tilgang, der kan bruges til at hjælpe i denne henseende, især ved screening af populationer med lav prævalens.