TEXT
Syfilis je sexuálně přenosné onemocnění způsobené infekcí s spirochete Treponema pallidum. Vzhledem k neschopnosti rutinně kultivovat infekční agens se diagnostika infekce syfilisem provádí primárně kombinací klinického projevu a sérologie. Toto sérologické testování lze široce rozdělit do dvou typů testů: treponemální testy, které testují protilátky namířené proti T. pallidum a nontreponemální testy, které měří antikardiolipinové protilátky produkované během aktivní infekce.
V posledních letech, mnoho laboratoří se posunuly ke screeningu pacientů s treponemám testu a pak reflexing pozitivní vzorky nontreponemal testování, praxe, která obrátí historický přístup. V literatuře probíhá debata o relativních výhodách algoritmů. Zatímco část diskuse se zaměřuje na klinický význam identifikace protilátky proti treponemám u asymptomatických pacientů a náklady-účinnost různých detekční algoritmy (4, 8, 9), další problém je analytický výkon treponemám testy jsou k dispozici na trhu (10). Přestože počáteční studie naznačují, že míra analytické falešně pozitivní výsledky, je relativně nízká při použití protilátek proti treponemám testy pro screening (3), více nedávný průzkum identifikoval vyšší frekvence neoficiální pozitivní výsledky (2). Tyto výsledky jsou však poněkud obtížné interpretovat, protože bylo použito několik různých kombinací screeningových a potvrzujících testů. Zatímco mnoho studií porovnávalo výkonnostní charakteristiky různých treponemálních testů uváděných na trh (1, 5, 7), jedním omezením je, že výsledky treponemální sérologie jsou obvykle považovány za binární proměnnou (tj. Abychom to vyřešili, zkoumali jsme, zda semikvantitativní výsledky poskytují další informace relevantní pro stanovení sérologického stavu pacienta.
Vzorky byly analyzovány na přítomnost protilátky proti treponemám pomocí dvou imunologických testů: Bioplex 2200 syfilis IgG testu (SYPHG) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) a Trep-Jistý test (Phoenix BioTech Corp., Oakville, Ontario, Kanada). Bioplex SYPHG testu je korálek založené na multiplex imunologický test, který používá rekombinantní treponemám antigeny (Tp15, Tp17, a Tp47) jako zachycení činidla, následuje detekce s myší anti-lidské IgG-fykoerytrinem (PE) konjugát (6). Výsledky jsou vyjádřeny jako „antibody index“ (AI), což je libovolný jednotky týkající se poměr vzorku signál kalibrátoru definované šortky. Trep-Určitě je na mikrotitrační destičce na bázi enzymové imunoanalýzy (EIA), který také používá rekombinantní treponemám antigeny (patentovaná směs) jako zachycení činidla, ale od peroxidáza konjugovaná treponemám antigeny pro detekci (11). Měření netreponemálních protilátek bylo provedeno rychlým testováním plazmatického reaginu (RPR) (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).
studijní vzorky byly vybrány ze vzorků odeslaných do naší laboratoře pro rutinní testování syfilisu a analyzovány bez znalosti klinické historie. Alikvoty ze vzorků, které byly reaktivní při počátečním screeningu Bioplex SYPHG, byly dále testovány jak Trep-Sure EIA, tak RPR. Naše laboratoř slouží populaci s nízkou prevalencí, s počáteční mírou pozitivní obrazovky přibližně 3% na základě historických údajů (údaje nejsou zobrazeny).
celkem 142 vzorků, které byly identifikovány jako reaktivní v počátečním screeningovém testu Bioplex, podstoupilo reflexní testování, jak je popsáno výše. Přítomnost protilátky proti treponemám byla potvrzena Trep-Jistě EIA v 77% (110/142) vzorků, kurz, podobné tomu, které bylo hlášeno v předchozích multicentrických studiích (3). Pravděpodobnost potvrzení však byla vysoce závislá jak na stavu RPR pacienta, tak na hodnotě SYFG stanovené v screeningovém testu Bioplex (obr. 1). Stav treponemálních protilátek byl potvrzen EIA u všech vzorků pozitivních na RPR (n = 27), bez ohledu na počáteční hodnotu SYFG. Naproti tomu nesouhlasné výsledky byly stanoveny u 28% (32/115) pacientů s RPR negativními, se zvyšující se frekvencí ve vzorcích s nízkými hodnotami SYFG v počátečním screeningu. Byla provedena analýza provozní charakteristiky přijímače (ROC) k identifikaci mezní hodnoty, která by poskytla vysokou úroveň specifičnosti pro identifikaci vzorků“ true-pozitivních “ (potvrzených EIA) (obr. 2). Byla vybrána mezní hodnota AI 6,0, která poskytuje 100% specificitu (interval spolehlivosti , 89,3 až 100,0%). Všechny vzorky s screening SYPHG hodnoty nad tuto úroveň (78/78) byly potvrzeny EIA ve srovnání s pouze 50% (32/64) vzorků s detekční SYPHG úrovně < 6.0 AI (P < 0.0001 ).
porovnání výsledků treponemálních protilátek. Celkem 142 vzorků bylo testováno na treponemální protilátky pomocí testů Bioplex a Trep-Sure (EIA), jakož i na reaktivitu RPR. Výsledky jsou kategorizovány podle hodnoty SYPHG zjištěné v počátečním screeningovém testu Bioplex.
ROC analýza hodnot SYPHG pro predikci skutečně pozitivních vzorků (potvrzených EIA). Citlivost byla definována jako identifikace vzorků s reaktivními výsledky v potvrzující EIA. Hodnota plochy pod křivkou (AUC) je 0.919 (95% CI 0.87 až 0.96), 100% specificita dosáhnout na všechny hodnoty AI ≥ 5.8. Kontingenční tabulka 2-by-2 vytvořená pomocí 6.0 AI jako mezní hodnota je také zobrazena. Frekvence výsledků potvrzených EIA pro obě skupiny byly významně odlišné (P < 0.0001).
Aby se zajistilo, že tento rozdíl není způsoben rozdíly v analytické citlivosti mezi Bioplex a Trep-Určitě testy, pět silně pozitivní vzorky (SYPHG výsledky >8.0 AI) byly zředěný s normální sérum k dosažení hodnot v rozmezí od 1.0 do 2.0 AI v Bioplex testu. Všech pět těchto zředěných vzorků, dal pozitivní výsledky v Trep-Jistý test, prokazující, že tento konfirmační test byl schopen detekovat protilátky proti treponemám v těchto nižších koncentracích. To bylo v souladu s výsledky pozorovanými u vzorků pozitivních na RPR, kde několik slabě pozitivních vzorků bylo nicméně potvrzeno EIA.
stanovení relevance pozitivního výsledku treponemální protilátky u pacienta s negativním RPR může být náročné, zejména při absenci jasné klinické anamnézy. Z tohoto důvodu je důležité identifikovat a minimalizovat analytické falešně pozitivní výsledky. V této zprávě prokazujeme, že hodnota SYPHG může pomoci informovat toto rozhodnutí a může být použita při vývoji strategie pro reflexní testování. I když screeningový test používaný v této studii nebyly schváleny FDA jako kvantitativní test, tyto údaje naznačují, že semiquantitiative AI výsledek může ještě poskytnout užitečné informace týkající se třeba pro konfirmační testování. Na základě těchto údajů nabízíme následující algoritmus pro screening syfilisu v naší instituci. Všechny vzorky, které jsou reaktivní v počátečním screeningovém testu SYPHG, jsou dále testovány RPR. RPR-pozitivní vzorky nevyžadují žádné další testování, bez ohledu na počáteční AI v testu SYPHG. Naproti tomu RPR-negativní testy s počátečními výsledky SYPHG <6.0 jsou automaticky podrobeny potvrzující EIA. Tento algoritmus omezuje reflexní testování EIA na zhruba 1% vzorků odeslaných k testování na syfilis, ale zaměřuje se na vzorky, které mají s největší pravděpodobností nesouhlasné výsledky.
Jedním z omezení je, že z důvodu nedostatku standardizace treponemám testy od různých výrobců, konkrétní SYPHG hodnoty AI zjištěné v této studii se vztahují pouze na případy, kdy počáteční screening se provádí pomocí Bioplex testu. Zde demonstrovaný přístup však lze snadno vyhodnotit pro jiné testy, aby se určila ideální mezní hodnota pro spuštění reflexního testování. Důležitým bodem je, že, když konfirmační testování je provedeno, musí být provedeno pomocí testu, který má analytickou citlivost pro detekci nízkých koncentrací protilátky proti treponemám rovné nebo lepší než screeningového testu. Systematická analýza relativní analytické citlivosti současných treponemálních testů by byla cenným nástrojem, který by laboratořím pomohl vytvořit vhodné testovací algoritmy.
stanovení relativních výhod použití treponemálních versus netreponemálních testů k hodnocení pacientů na infekci syfilisem vyžaduje další studium. Bez ohledu na metodu by však laboratoře měly vyvinout přístupy k identifikaci analytických falešně pozitivních výsledků, kdykoli je to možné. Pochopení vlastnosti analytické funkční způsobilosti z treponemám testy, spolu s kterým se test-konkrétní ukázka vyvolat konfirmační testování, je přístup, který může být použit na pomoc v tomto ohledu, a to zejména při screeningu s nízkou prevalencí populace.