Taq ADN polimeraza, izolată din Thermus aquaticus, este o ADN polimerază termostabilă care catalizează încorporarea dependentă de primer a nucleotidelor în ADN duplex în direcția 5’3′ în prezența Mg2+. Este ADN polimeraza termostabilă standard utilizată în aplicațiile PCR. Taq nu are activitate exonuclează de 3 ‘5’, dar are activitate exonuclează de 5 ‘3’. Polimeraza Taq este potrivită pentru majoritatea aplicațiilor PCR care nu necesită o enzimă de înaltă fidelitate, cum ar fi detectarea secvențelor specifice de ADN sau ARN.
o reacție tipică în lanț a polimerazei (PCR) include ADN țintă, O polimerază ADN termostabilă, cum ar fi polimeraza Taq, doi primeri oligonucleotidici, dNTP, tampon de reacție și magneziu. Odată asamblată, reacția este plasată într-un cicler termic, care supune reacția la cicluri recurente de schimbări de temperatură în timpul cărora ADN-ul este denaturat, grundurile se recoacă la țintă și sunt extinse de polimerază pentru a crea o copie a catenei ADN. Fiecare ciclu PCR dublează teoretic cantitatea de secvență vizată în reacție până când componentele de reacție devin limitative sau sunt consumate.
în PCR final, Analiza are loc după ce toate ciclurile PCR sunt finalizate și reacția de amplificare a atins un platou (sau punct final). Acest lucru contrastează cu qPCR în timp real, unde formarea produsului PCR este monitorizată în timp real pe măsură ce apare reacția de amplificare. Endpoint PCR este o metodă calitativă. Este utilizat pe scară largă în multe scopuri, inclusiv determinarea prezenței sau absenței unei secvențe ADN specifice într-o probă țintă, detectarea agenților patogeni, amplificarea secvențelor țintă pentru analize suplimentare și detectarea secvențelor ADN specifice pentru a identifica indivizii sau tipurile de celule.
amestecurile Master PCR conțin toate componentele de reacție pentru PCR, inclusiv polimeraza Taq, dNTP-urile și tamponul optimizat. Mixurile Master simplifică configurarea experimentală și economisesc timp, deoarece utilizatorul trebuie pur și simplu să adauge șablon și primeri la reacție.