Medicină Experimentală și terapeutică

Introducere

un sistem de analiză a monitorizării celulelor în timp real (RTCA) a fost dezvoltat anterior pentru monitorizarea continuă a culturilor celulare aderente (1). Această metodă non-invazivă fără etichetă se bazează pe măsurarea impedanței electrice (indicele celular, CI) între regiunile interdigitate de pe baza plăcilor de cultură tisulară. Măsurarea CI furnizeazăinformații cantitative despre starea biologică a celulelor aderente. De fapt, sensul CI este numărul de celule de supraviețuirepe suprafața plăcii E. Aceste date includ numărul celulei, viabilitatea și morfologia ca profil în timp real (2-4). RTCAsystem este cunoscut dispozitivului de detectare precoce a reacției celulare ca fenotip adynamic împotriva unor reactivi (5).

în studiul nostru anterior, citotoxicitatea imatinibului în carcinomul cu celule scuamoase orale (OSCC) a fost evaluată utilizând WST-8(5– 3-(2- Testul metoxi – 4-nitrofenil)-2-(4 – nitrofenil) – 2h – tetrazol-3-ium) ca măsurare a punctului final (6) și apoi cu un sistem RTCA (7).Măsurătorile efectuate prin teste MTT (bromură de 3–2,5-difeniltetrazoliu) și WST-8 sunt utilizate în mod obișnuit pentru evaluarea citotoxicității. Cu toate acestea, astfel de teste suntlimitat de variațiile efectelor diferiților agenți anticancerigenipe diferite linii celulare. În plus, valorile IC50, calculate prin teste in vitro, tind să fie mai mari decât concentrațiile efective in vivo (8,9).

în studiul nostru anterior, valorile IC50 măsurate de sistemul RTCA au fost mai mici decât cele măsurate prin testul WST-8, sugerând că sistemul RTCA poate evalua sensibil citotoxicitatea și influența imatinibului asupra adeziunii celulare. Cu toate acestea, nu este clar dacă evaluarea valorilor iic50 ale altor agenți anticancerigeni care utilizează RTCAsystem ar fi utilă, deoarece există diferențe în reacțiile citotoxice între medicamentele moleculare vizate, cum ar fi imatinib și agenții anticancerigeni în timp.

în acest studiu, trebuie să selectăm un anumit tip de linii celulare pentru a determina diferența dintre profilul de reacție celulară și reactivii anticancerigeni în timp real folosind sistemul RTCA.Linia celulară non-invazivă SQUU-A și linia celulară invazivă SQUU-B, care au fost stabilite din tumorile locale recurente ale cancerului de limbă la un singur pacient, au fost selectate deoarece am fost implicați în cercetarea metastazelor liniei celulare SQUU-B folosind linia celulară SQUU-a și linia SQUU-Bcell (10-12). Linia de celule SAS au fost stabilite de lacarcinom cu celule scuamoase umane slab diferențiate ale limbii (13). Linia celulară NA a fost stabilită ca o linie celulară producătoare de fibronectină (14). În plus, s-a raportat că citotoxicitatea reactivilor anticanceroși din OSCC a fost evaluată în linia celulară a celulelor scuamoase-A și în linia celulară a celulelor scuamoase-B (15), în linia celulară SAS (16), în linia celulară a celulelor NA (17), utilizând diferite metode convenționale.De aceea, am selectat patru aceste linii celulare cu fiecare caracteristică caracteristică în studiul de față, care au fost, de asemenea, utilizate în testul citotoxic în studiul anterior.

în acest studiu, ne-am concentrat pe un nou dispozitiv RTCA dezvoltat pentru măsurarea în timp real și am evaluat valorile IC50 ca o scară pentru a evalua citotoxicitatea a patru agenți anticancerigeni în patru linii celulare OSCC. Acest lucru ne-a permis să obținem informații despre variațiile observate între diferiții reactivi anticanceroși și liniile celulare în timp real.

scopul studiului de față a fost de a obține profiluri 50 de la imediat după adăugarea agenților anticancer, utilizând un sistem RTCA. Acest studiu a demonstrat avantajul evaluării citotoxicității agenților anticanceroși utilizând un sistem RTCA comparativ cu un test final.

materiale și metode

reactivi și materiale

5-Fluorouracil (5-FU) a fost diluat la 100 mm indimetilsulfoxid (DMSO; Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, MO, Statele Unite ale Americii).Doxifluridina și carboplatina au fost diluate la 100 și respectiv 50 mM în apă distilată. Docetaxelul a fost diluat la 10 mM inetanol. Toți reactivii anticanceroși provin de la Wako PureChemical Industries, Ltd., (Osaka, Japonia) și depozitate la -20 C.

culturi celulare

linii celulare umane OSCC SQUU-a, SQUU-B, SAS și NAwere derivate din probe de limbă umană. SQUU – A și SQUU-B, au fost furnizate în mod special de Morifuji-Wilson M (Universitatea Kumamoto,Kumamoto, Japonia), au fost stabilite din tumori locale recurente de limbă (18). SAS (13,19,20) a fostachiziționate de la Banca de celule Riken BRC (Tsukuba, Japonia). NA (14) a fost oferit cu amabilitate de Dr.Jun-ichi Iwata (Universitatea Kyushu; Fukuoka, Japonia). Toate liniile celulare au fost menținute în mediul vulturului modificat de Dulbecco (DMEM;Nacalai Tesque, Inc., Kyoto, Japonia) conținând 10% ser fetal de vițel(Biowest, Nuaille, Franța) la 37 centi C într-o atmosferă umidificată CU5 % CO2.

măsurarea proliferării celulelor OSCC prin testul de citotoxicitate RTCA

CI a fost dobândită de sistemul de iCELLigence (ACEABiosciences, Inc., San Diego, CA, SUA) ca sistem RTCA. Allmonitoring-ul a fost efectuat la 37ccc cu conținut reglementat de CO2 (5%). Plăcile E (plăci de cultură pentru sistemul de icelligență)conținând 200 de mediu de cultură Ilfov per godeu au fost echilibrate la 37 Ilfov C, iar CI a fost setat la zero în aceste condiții. S-au adăugat celule(2 0,104 celule/sondă, cu excepția cazului în care se specifică altfel) în mediul de cultură 560 unqql s-au adăugat agenți Anticancerigeni la 24 de ore după însămânțarea celulelor. IÎ a fost monitorizată în timp real timp de 96 de ore după însămânțarea celulelor. Valorile IC50 au fost calculate de RTCAData Analysis Software versiunea 1.0 (acea Biosciences, Inc.).

concentrația în opt puncte a patru anticanceratori a fost stabilită pe baza valorilor Cmax în studiul anterior(21-25). În plus, au fost stabilite Puncte de timp pentru 72 de ore, inclusiv 24 de ore și 48 de ore, care au fost metode generale de evaluare a citotoxicității în testul punctului final.

montarea curbei IC50data

am folosit următoarea formă sigmoidală doză-răspuns pentru a calcula valorile IC50: Y=IÎ scăzut + (IÎ ridicat-IÎ scăzut) / {1+10 ^ (Log IC50-X)}, unde ‘IÎ scăzut ‘reprezintă valorile IÎ minime,’ IÎ ridicat ‘ reprezintă valorile indicelui maximumcell, Y este indicele celulei și X este jurnalul de concentrare (m).

măsurarea proliferării celulelor OSCC prin testul WST-8

după însămânțarea inițială și cultura celulelor OSCC,mediul de cultură a fost îndepărtat și înlocuit cu mediu care conține anticanceragent. După 24, 48 și 72 de ore de incubare, s-au adăugat 20 de coloranți WST-8 (Kit de numărare a celulelor-8; Dojindo Corporation, Tokyo,Japonia) la fiecare godeu. După 3 ore, plăcile au fost citite la450 nm / 655 nm. Rata de supraviețuire celulară a fost calculată utilizândformula de mai jos (7). Valorile IC50 au fost calculate prin regresia aproximării liniare a supraviețuirii procentului față de concentrația medicamentului.

rata de supraviețuire a celulelor (%)=(a-C)/(b-c) 100(a=absorbanța la fiecare concentrație a reactivului anticanceros,b=absorbanța la 0 mm a reactivului anticanceros și c=absorbanța martorului).

analiza statistică

toate datele sunt prezentate ca deviația standard medie(DS) a celor trei experimente independente. Corelațiile dintre valorile IC50 obținute utilizând sistemul RTCA și testul WST – 8 au fost evaluate pentru semnificația statistică de către Spearmantest. Valorile cu două cozi ale P <0,05 au fost considerate asignabile.

rezultate

efectul concentrării agentului anticancer asupra proliferării celulelor OSCC utilizând sistemul RTCA

am evaluat citotoxicitatea a patru agenți anticanceratori (5-FU, doxifluridină, carboplatină și docetaxel) în liniile celulare fourOSCC prin monitorizarea valorilor IÎ timp de 96 ore după ce celulele au fost însămânțate la 2 104 celule / godeu pe plăci E(Fig. 1–4). Valorile CI au scăzut în mod dependent de adose în toate cele patru linii celulare OSCC. Prin urmare, scăderea valorilor CI corelată cu scăderea celulelor number.As prezentat în Fig. 2, valoarea CI pentrulinia celulară invazivă SQUU-B a fost mai mică decât cea a altor OSCC cells.As prezentat în Fig. 3, profilul CI obținut pentru linia celulară SAS a arătat o creștere întârziată după 48 h. Ashown în Fig. 4, rata de proliferare și valoarea maximă a CI în linia celulară NA au fost mai mari decât o altă linie celulară.

măsurarea în timp real a profilelor IC50 ale agenților anticanceroși din celulele OSCC utilizând sistemul RTCA

profilele IC50 ale celor patru agenți anticancerori din cele patru linii celulare OSCC au fost determinate de sistemul RTCAsystem și calculate de software-ul comercial furnizat cu instrumentul (un subset al datelor SQUU-B sunt prezentate în Fig. 5). Valorile IC50 au fostplotate timp de 72 de ore după adăugarea de agenți anticanceroși. Valorile iic50 la 24, 48 și 72 h pentru toate cele patru linii celularesunt rezumate în tabelele I–IV. așa cum se arată în Fig. 5, a existat un decalaj de timp în reacțiile citotoxice ale 5-FU (Fig. 5A) anddocetaxel (Fig. 5D), and recovery ofcell proliferation was observed at about 24 h after treatments.However, cytotoxic reactions were observed immediately aftertreatment with anticancer agents such as doxifluridine (Fig. 5B) and carboplatin (Fig. 5C).

Dose-response curves in SQUU-B cell line using RTCAsystem were shown in supplemental materials (Figs. S1–S4) in order to show how to conversion thedata of Fig. 2 into Fig. 5. În timp ce, curbele de viabilitate celulară desquu-B utilizând testul WST-8 au fost, de asemenea, prezentate în materiale suplimentare(Fig. S5–S8). Valorile R2 la 72 h după adăugarea reactivilor anticanceroși în testul WST-8 au fost scăzute la patru reactivi anticancer, comparativ cu unul de 24 h și 48 h. aceste rezultate au arătat că este de dorit ca testul final să fie efectuat la 24 h sau 48 h pentru a fi utilizat ca protocol general. În acest studiu, curbele de viabilitate celulară ale testului WST-8 au fost prezentate în materiale suplimentare, deoarece nu au existat noutăți în modul de calcul al valorilor IC50 utilizând testul WST-8.

corelații între măsurătorile în timp real ale valorilor IC50 utilizând sistemul RTCA și măsurătorile punctuale ale valorilor IC50 utilizând testul WST-8 în celulele OSCC

așa cum se arată în Fig. 6, valorile IC50 la 24, 48 și 72 h folosind două metode au fostplotate. Axa orizontală arată valorile IC50 în timp real măsurate folosind sistemul RTCA, în timp ce axa longitudinală afișeazăsendpoint valorile IC50 măsurate folosind testul WST-8. A fost observată o corelație pozitivă între cele două tipuri de metode de măsurare a IC50 pentru fiecare agent anticancer.Rezultatele 5-FU, doxifluridină, carboplatină și docetaxcel au fost y=8,19 x+346,02 (R2=0,94, rs=0,66, *P<0,05), y=1,00 x+172,70(R2=0,91, rs=0,82, **P<0,01), y=1,90 x+206,81 (R2=0,92,Rs=0,96, **p<0,01), Andy=13,53 x+0,08 (R2=0,95, Rs=0,73, *p<0,05), respectiv. Valorile real-timeIC50 au avut tendința de a fi mai mici decât valorile IC50 corespunzătoare.

discuție

Valorile CI calculate de RTCA prezintă, de asemenea, starea celulei (3). Asshown în smochine. 1-5, valorile SD ale valorilor CI au fost prea mici pentru a vedea. De exemplu, toate valorile SD din Fig.1 au fost sub 0,05. Motivul pentru valorile scăzute ale ci ale SQUU-B a fost sugerat că proteina de adeziune e-cadherin joacă un rol esențial în metastaze, cu niveluri reduse de e-cadherin promovând migrarea celulelor și invazia celulară (26). S-a sugerat că s-a raportat că fibronectinaaccelerarea proliferării și aderenței celulare se datorează caracteristicii liniei celulare ofNA ca linie celulară producătoare de fibronectină (6). Astfel, reacțiile celulare ale fiecărei linii celulareîmpotriva a patru reactivi anticanceroși au fost variabili. Nu am putut găsi relația cauzală dintre valorile IC50 și caracteristicile liniilor celulare în acest studiu. Cu toate acestea, este important să detectați o reacție celulară în timp real ca profil CI pentru a evalua citotoxicitatea reactivului anticancer atunci când se ia în considerare aplicarea farmaceutică la om.

profilul IC50 al liniei celulare SQUU-B a fost descris în Fig. 5 ca profil IC50 prezentativ, deoarece nu au existat diferențe în modelul profilului IC50 în aceeași linie celulară în cazul aceluiași reactiv, deși am calculat valorile IC50 în toate liniile celulare folosind patru reactivi anticancerigeni. Am constatat că profilurile theIC50 au variat pentru fiecare agent anticancer și înfiecare linie celulară OSCC. Așa cum se arată în Fig.5, 5-FU și docetaxel au necesitat mai mult de 24 de ore (48 de ore în figură) pentru a începe să exercite un efect citotoxic asupra celulelor OSCC,în timp ce valorile IC50 s-au recuperat de la aproximativ 24 de ore(48 de ore în figură) după adăugarea de doxifluridină și carboplatină. Astfel, am sugerat că diferențele de profiluri în timp realic50 au fost cauzate de reactivul anticanceros. Astfel de observări nu ar fi fost posibile fără măsurarea în timp real utilizând RTCA. Monitorizarea în timp real a valorilor IC50 a arătat, de asemenea, că aceste valori s-au modificatîn mod semnificativ în timp. Există posibilitatea de a nu detectam modificări folosind metode convenționale, deoarece un singur punct de timp al IC50 după tratamentul cu agentul anticancer este evaluat printr-un test final.

sistemul RTCA este diferit de testele finale tradiționale, deoarece măsurarea impedanței este neinvazivă și poate furniza date cantitative de înaltă calitate privind citotoxicitatea într-o manieră continuă. Așa cum se arată în Fig.6, au existat corelații pozitive semnificative între valorile IC50 obținute cu sistemul RTCA și testul WST-8, chiar dacă au existat unele diferențe în valorile absolute ale CI, cum ar fi valorile ci scăzute obținute pentru linia celulară SQUU-B. Aceste rezultate au sugerat că chiar și o CI scăzută obținută pentru unele linii celulare ar putea evalua sensibilitatea ridicată a citotoxicității în RTCAsystem. În timp ce valorile IC50 în timp real au fost mai mici decât valorile IC50 în timp real atunci când valorile IC50 în timp real obținute cu sistemul RTCA au fost comparate cu valorile IC50 în timp real obținute cu testul WST-8.Aceste rezultate sugerează că sistemul RTCA poate fi utilizat pentru a evalua sensibil efectul agenților anticanceroși asupra proliferării și aderenței celulare.

în sistemul RTCA, celula aderentă acționează ca un izolator pe suprafața electrodului și schimbă mediul ionic al soluției electrode, mărind impedanța (27). Astfel, CI este funcția celuleinumărul și raportul celulelor la intervale de timp diferite. CI = 0 cândnu există adeziune celulară (5). CIchanges descrise de sistemul RTCA sunt reflectate dinamic fenotip ofcell. Aceste monitorizări dinamice ale interacțiunii celulă-medicament ne permit să obținem o mai bună înțelegere a efectelor temporale invitro, în special imediat după tratamentul cu medicament(28). Caracteristica cinetică a celulelor oferă informații perspicace care nu pot fi obținute de la un singur test final convențional, cum ar fi testul WST-8. În timp ce, rezultatele testului WST-8 se reflectă reacția metabolică a survivalcell (29). Toxicitatea utilizând testul WST – 8 ar putea fi subestimată dacă reacția metabolică celulară a fost menținută, deși a avut loc o reacție celulară dinamică. Am sugerat că aceste diferențe de principiu în două metode au fost induse diferențe uriașe de valoare IC50 de până la 8 ori între două metode, așa cum se arată în Fig. 6A. studiul nostru anterior a raportat că IC50 de imatinib în celulele Squu-acel calculate prin sistemul RTCA și testul WST-8 au fost de 4 și, respectiv, 60 de Centimetre (sensibilitate de 15 ori) (6,7). Alte grupuri de cercetare au raportat că IC50 de cisplatină în celulele HK-2 calculate prin sistemul RTCA și testul WST-8 au fost de 0,76 și, respectiv, 25, (sensibilitate de 33 de ori) (30,31).Aceste date anterioare au susținut datele noastre pentru a arăta validitatea.

este important să se obțină măsurători de laimediat după tratamentul cu agenți anticancer pentru a evalua atât efectele secundare ale agenților, cât și efectele dorite ale acestora. Cu toate acestea, există puține rapoarte despre metode utile care corelează datele invitro cu datele umane in vivo. Am considerat că măsurarea timpului real utilizând sistemul RTCA ar beneficia de evaluarea efectelor secundare ale agenților anticanceroși în celulele normale.

valorile Cmax raportate anterior pentru 5-FU,doxifluridină, carboplatină și docetaxel sunt 60 (21), 40-800 (22), 40 (23), și, respectiv, 2 unqqm (24,25), atunci când sunt utilizate pentru tratamentul intravenos la om. Datele noastre s-au corelat cu datele umane, deoarece valorile Cmax au fost incluse în intervalul dozelor experimentale utilizate în acest studiu.

sistemele RTCA sunt noul dispozitiv principal pentru evaluarea citotoxicității, care utilizează intensitatea impedanței celladhesion și nu activitatea enzimatică în celulele țintă, cum ar fi testul MTT. Valorile IC50 ale agenților anticancerigeni calculate de sistemul RTCA au fost corelate semnificativ cu nivelurile IC50 calculate prin testul final convențional. În plus, sistemul RTCA a obținut automat măsurători în timp real de la imediat după tratamentul cu agenți anticancerigeni.

de fapt, sistemul RTCA nu poate evalua direct citotoxicitatea concretă,cum ar fi moartea celulară sau apoptoza și așa mai departe, deoarece indicele celular a fost calculat pe baza impedanței. De aceea, testul combinat între sistemul RTCA și măsurarea morții celulare ar putea fi o metodă eficientă în cazul evaluării reacției celulare concrete, cum ar fi moartea celulară sau apoptoza.De exemplu, colorarea Anexinei V sau exprimarea testului caspazei-3 pentru detectarea apoptozei, testul de eliberare a lactatului dehidrogenazei (LDH) pentru detectarea morții celulare ar putea fi metode eficiente(32,33). În plus, ar putea fi util să se evalueze expresia proteinelor inflamatorii în celulele normale pentru detectarea efectului secundar atunci când reactivul anti-cancer a fost adăugat la celulele normale însămânțate pe placa E. Monitorizarea dinamică în timp real în timpul culturii celulare, inclusiv reactivii anticanceroși, poate oferi obiective valoroase pentru detectarea timpurie a eficienței terapeutice și a efectului secundar, care nu pot fi evaluate în metodele convenționale în testul punctului final. Deci, valoarea IC50 calculată de sistemul RTCA ar putea fi un parametru util, cum ar fi screeningul dintr-un punct de vedere al măsurării timpului real în automat, evitarea problemelor colorimetrice sau a contaminării. În plus, sistemul RTCA permite analiza întregii perioade a experimentului și nu necesită etichetarea care poate afecta negativ cultura celularăexperimente.

noutatea acestui studiu este că sistemul RTCA ar putea detecta citotoxicitatea sensibilitate ridicată comparativ cu o metodă convențională, testul WST-8. În plus, sistemul RTCA ar putea evalua valoarea 50 în timp real, fără a limita perioada experimentală timp de cel puțin 72 de ore după adăugarea reactivilor anticancer.

În concluzie, rezultatele noastre au demonstrat că RTCAsystems sunt utile pentru a testa citotoxicitatea și ar putea fi utilizate în dezvoltarea viitoare a agenților chimioterapeutici folosind celule canceroase și evaluarea efectelor secundare ale acestora în celulele normale. În plus,un sistem RTCA poate fi utilizat pentru a evalua profilurile de reacție celulară, cum ar fi terapia combinată și interacțiunea anticorp-celulă sau medicament-medicament, a reactivilor anticanceroși.

material suplimentar

date justificative

mulțumiri

nu se aplică.

finanțare

nu a fost primită nicio finanțare.

disponibilitatea datelor și a materialelor

seturile de date utilizate și / sau analizate în timpul studiului de față sunt disponibile de la autorul corespunzător cu privire la reasonablerequest.

contribuțiile autorilor

MH și MN au conceput și proiectat studiul. MH andTN a efectuat experimentele și a obținut Datele. MH a analizat datele, a pregătit cifrele și a redactat manuscrisul. MH, TKY și mn au interpretat rezultatele. MH și TKY editat și revizuit themanuscript. Toți autorii au citit și au aprobat finalamanescript.

aprobare etică și consimțământ pentru a participa

nu se aplică.

consimțământul pacientului pentru publicare

nu se aplică.

interese concurente

autorii declară că nu au interese concurente.

	Xing JZ, Zhu L, Jackson JA, Gabos S, SunXJ, Wang XB și Xu X: monitorizarea dinamică a citotoxicității asupra senzorilor microelectronici. Chem Res Toxicol. 18:154–161. 2005.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Xing JZ, Zhu LJ, Gabos s și Xie l:microelectronice senzor de celule test pentru detectarea citotoxicitate șipredicție de toxicitate acută. Toxicol In Vitro. 20:995–1004. 2006.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Zhu J, Wang X, Xu X și Abassi YA: Dynamicand monitorizarea fără etichete a activității citotoxice a celulelor ucigașe naturalefolosind matrice de senzori de celule electronice. J Metode Imunol. 309:25–33.2006. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Xi B, Yu n, Wang X, Xu X și Abassi YA:aplicarea tehnologiei bazate pe celule fără etichete în drugdiscovery. Biotehnol J. 3: 484-495. 2008. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	t Oktocrker Sener l, Albeniz G, Dinc b andAlbeniz I: iCELLigence sistem de analiză celulară în timp real pentru examinarea citotoxicității medicamentelor la liniile celulare canceroase. Exp Ther Med.14:1866–1870. 2017. Vezi articolul : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Morioka m, Hazekawa M, Kawakubo-YasukochiT, Nishinakagawa t, Nakamura s și Nakashima m: efectul colagentype I sau fibronectin uman pe citotoxicitatea imatinibului în oralcarcinom cu celule scuamoase. Pharmacol Pharm. 7:255–263. 2016.Vezi articolul: Google Scholar
	Hazekawa m, Morioka M, Nishinakagawa T, Kawakubo-Yasukochi T, Nakamura s și Nakashima m: Evaluarea citotoxicității imatinibului pentru carcinomul cu celule scuamoase orale prin sistemul de analiză a celulelor în timp. eJBio. 13:56–62. 2017.
	McEneny-King a, Edginton AN și Rao PP:investigarea interacțiunilor de legare ale medicamentului anti-Alzheimer donepezil cu CYP3A4 și glicoproteina P. Bioorg Med Chem Lett.25:297–301. 2015. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ota T, Shinotoh H, Fukushi K, Kikuchi T,Sato K, Tanaka N, Shimada H, Hirano s, Miyoshi M, Arai H, și colab.: Esyimation de plasmă IC50 de donepezil pentru inhibarea cerebralăacetilcolinesterazei la pacienții cu boală alzheimerfolosind tomografie cu emisie de pozitroni. Clin Neurophaemacol. 33:74–78.2010. Vezi Articolul : Google Scholar
	Kawakubo-Yasukochi T, Morioka m, HayashiY, Nishinakagawa T, Hazekawa M, Kawano s Nakamura s și NakashimaM: linia celulară SQUU-B își răspândește proprietățile metastatice tononmetastatic clona Squu-a de la același pacient prin exosomi.J Oral Biosci. 58:33–38. 2016. Vezi articolul: Google Scholar
	Morioka M, Kawakubo-Yasukochi T, HayashiY, Hazekawa M, Nishinakagawa T, Ono K, Kawano S, Nakamura s andNakashima M: Exozomii din liniile celulare de carcinom scuamos oral, SQUU-a și SQUU-B, definesc tropismul diseminării limfatice. JOral Biosci. 58:180–184. 2016. Vezi articolul: Google Scholar
	Kawakubo-Yasukochi T, Morioka M, HazekawaM, Yasukochi a, Nishinakagawa T, Ono K, Kawano s, Nakamura s andNakashima M: miR-200C-3P răspândește capacitatea invazivă în micromediul carcinomului cu celule scuamoase. Mol Carcinog. 57:295–302.2018. Vizualizarearticol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Takahashi K, Kanazawa H, Akiyama Y, TazakiS, Takahara M, Muto T, Tanzaawa H și Sato K: stabilirea șicaracterizarea unei linii celulare (SAS) din carcinomul cu celule scuamoase slab diferențiat de limba. J Jpn Stomatol Soc.38:20–28. 1989.
	Yoshiya m: o linie celulară producătoare de fibronectină stabilită dintr-un carcinom cu celule scuamoase Umane al limbii și caracterizarea acesteia. Jpn J Oral Maxilofac Surg. 36:868–880.1990. Vezi articolul : Google Scholar
	Tanaka H, Toyoshima T, Sonoda K, KitamuraR, Sasaguri M, Kawano s, Matsubara R, Goto Y și Nakamura s:funcția apoptotică a antigenului asociat tumorii rcas1 în carcinomul cu celule scuamoase. J Transl Med. 12:1122014. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Chien MH, Chang WM, Lee WJ, Chang YC, LaiTC, Chan DV, Sharma R, Lin YF și Hsiao m: Un anticorp umanizat fuzionat cu ligand Fas(FasL) împotriva glicoproteinei 72 asociate tumorii prezintă selectiv efectul citotoxic împotriva celulelor canceroase orale cu un raport FasL/Fas scăzut. Mol Cancer Ther.16:1102–1113. 2017. Vezi articolul : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Takaoka s, Iwase M, Uchida M, Yoshida s,Kondo G, Watanabe H, Ohashi M, Nagumo m și Shintani S: efect decombinând inhibitori ai receptorilor factorului de creștere epidermică și proliferarea cisplatinon și apoptoza carcinoamelor cu celule scuamoase orale. Int J Oncol. 30:1460–1476. 2007.
	Morifuji m, Taniguchi s, Sakai H,Nakabeppu Y și Ohishi m: expresia diferențială a citokeratindupă implantarea ortotopică a liniilor celulare de limbă umană nou înființate cu capacitate metastatică definită. Sunt J Pathol.156:1317–1326. 2000. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Hung CM, Chang CC, Lin CW, Ko SY și HsuYC: Cucurbitacina E ca inductor al morții celulare și apoptozei în linia celulară de carcinom cu celule scuamoase umane SAS. Int J Mol Sci.14:17147–17156. 2013. Vezi articolul : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Chen YW, Huang HS, Shieh YS, Ma KH, HuangSH, Hueng DY, SYTWU HK și Lin GJ: un compus roman NSC745885exerts efect anti-tumoral pe celulele Sas ale cancerului de limbă in vitro și Invivo. PLoS Unu. 9: e1047032014. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Casale F, Canaparo R, Serpe l, Muntoni e,Pepa CD, Costa M, Marirone L, Zara GP, Fornari G și Eandi m:concentrațiile plasmatice ale 5-fluorouracilului și ale metaboliților săi la pacienții cu cancer de colon. Pharmacol Res. 50: 173-179. 2004. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Van der Heyden SA, Highley MS, de BruijinEA, TJADEN UR, Reeuwijk HJ, Van Slooten H, Van Oosterom AT și MaesRA: Farmacocinetica și biodisponibilitatea oral5 ‘ -deoxi-5-fluorouridinei la pacienții cu cancer. Br J Clin Pharmecol.47:351–356. 1999. Vezi articolul : Google Scholar
	Kern W, Braess J, Friedrichsen S, KaufmannCC, Schleyer E și Hiddemann W: farmacocinetica carboplatinei pacienții care primesc carboplatină și paclitaxel/docetaxel pentrucancerele pulmonare avansate: impactul vârstei și funcția renală pe Zonăsub curbă. J Cancer Res Clin Oncol. 127:64–68. 2001.Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Kenmotsu H și Tanigawara Y:farmacocinetica, dinamica și toxicitatea docetaxelului: de ce doza japoneză diferă de doza Occidentală. Cancer Sci.106:497–504. 2015. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Minami H, Kawada K, Sasaki Y, Igarashi T,Saeki T, Tahara M, Itoh K și Fujii H: farmacocinetica șifarmacodinamica docetaxelului nelegat de proteine la pacienții cu cancer.Cancer Sci. 97:235–241. 2006. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Zhao P, Guo s, Tu Z, Di L, Zha X, Zhou mână Zhang X: Gihl3 induce migrarea celulelor tumorale epiteliale umane și invazia prin downregulation de e-cadherin. Acta Biochim BiophysSin (Shanghai). 48:266–274. 2016. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Szulccek R, Bogaard HJ și van NieuwAmerogen GP: Celulă electrică-senzor de impedanță a substratului pentru cuantificarea proliferării endoteliale, a funcției de barieră și a motilității. J Vis Exp. 28-2014 martie. ViewArticle: Google Scholar
	Ku M, Kang M, Suh JS și Yang J: efecte pentru tratamentul secvențial al siAkt și paclitaxel pe liniile de cancer gastric. Int J Med Sci. 13:708–716. 2016. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Feng Z, Wang Z, Yang M, Zhou l și Bao Y:Polysaccharopeptide exerts immunoregulatory effects viaMyD88-dependent signaling pathway. Int J Biol Macromol. 82:201–207.2016. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Genc G, Kilinc V, Bedir A and Ozkaya O:Effect of creatine and pioglitazone on Hk-2 cell line cisplatinnephrotoxicity. Ren Fail. 36:1104–1107. 2014. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ng NS, Wu MJ, Myers SJ and Aldrich-WrightJR: Toxicitatea celulelor renale in vitro a unor cpmplexe de platină (II) pe bază de fenantrolină neconvenționalăanticancer. J inorgbiochem. 179:97–106. 2018. Vezi articolul : Google Scholar
	Ma K, Zhang C, huang MY, Guo YX și Hu GQ:Crosstalk între autofagie dependentă de Beclin-1 și apoptoza dependentă de caspază indusă de transhinona IIA în humanosteosarcomul MG-63 celule. Oncol Rep.36:1807-1818. 2016. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Augustine D, Rao RS, Anbu J and ChidambaraMurthy KN: In vitro cytotoxic and apoptotic induction effect ofearthworm coelomic fluid of Eudrilus eugeniae, Eisenia foetida, andPerionyx excavatus on human oral squamous cell carcinoma-9 cellline. Toxicol Rep. 6:347–357. 2019. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI