Biochimie structurală/enzimă/complot dublu-reciproc: Lineweaver Burk plote

Lineweaver-Burke plot

ecuația dublu-reciprocă se obține prin luarea reciprocă a ambele părți ale ecuației Michaelis-Menten. Graficul dublu-reciproc (cunoscut și sub numele de Lineweaver-Burk) este creat prin trasarea vitezei inițiale inverse (1/V0) în funcție de inversul concentrației substratului (1/). Vmax poate fi determinat cu precizie și, prin urmare, KM poate fi determinat și cu precizie, deoarece se formează o linie dreaptă. Panta liniei rezultate este KM/Vmax, interceptarea y este 1/Vmax, iar interceptarea x este -1 / KM. Folosind ecuația Michaelis-Menten, Vmax este un asimptot și, prin urmare, poate fi doar aproximat și, ca rezultat, KM, care este Vmax/2, nu poate fi determinat cu exactitate. Acest complot este o modalitate utilă de a determina diferiți inhibitori, cum ar fi competitivi, necompetitivi și necompetitivi.

inhibitor competitiv

pentru inhibitorii competitivi, inhibitorul concurează cu molecula de substrat pentru a se lega de situsul de legare. În consecință, KM va crește fără a modifica valoarea Vmax. Aceasta înseamnă că cele două grafice vor avea aceeași interceptare y așa cum se arată mai jos. Cu toate acestea, noul X-intercept poate fi destul de evaziv. Pentru acest tip de inhibitori, este necesară o concentrație mai mare a substratului pentru a obține jumătate din locurile active ocupate. Prin urmare, KM2 va fi mai mare decât KM1. Aceasta se traduce printr-o valoare reciprocă mai mare a KM1 decât cea a KM2. Cu toate acestea, interceptarea x are semnul negativ în fața sa, astfel pe grafic trebuie să se deplaseze spre dreapta față de interceptarea anterioară. Pentru a arăta acest lucru pe parcela dublă reciprocă, panta va crește pentru a arăta puterea inhibitorului competitiv obligatoriu. În timp ce panta crește odată cu prezența inhibitorului, interceptarea y rămâne aceeași în prezența și absența inhibitorului.

pentru inhibitorii necompetitivi, inhibitorul se va lega doar de un complex enzimă-substrat; prin urmare, nu concurează cu substratul pentru locul de legare. În consecință, valorile KM și Vmax scad. În consecință, valoarea reciprocă a noului Vmax ar trebui să fie într-o poziție mai înaltă pe axă, deoarece o fracție devine mai mare atunci când numitorul devine mai mic. Noua valoare reciprocă a KM se va deplasa spre stânga, iar explicația ar trebui să fie similară cu cea a inhibitorului competitiv. Pentru a arăta acest lucru pe un complot dublu reciproc, panta va rămâne aceeași ca și cum enzima nu ar fi legată de inhibitor, dar interceptarea axei x va scădea. Graficul dublu reciproc pentru enzima cu și fără inhibitor necompetitiv va fi două linii paralele.

pentru inhibitorii necompetitivi, inhibitorul se poate lega de enzimă înainte ca substratul să se poată lega de locul de legare. Nu trebuie să aștepte ca enzima să devină un complex enzimă-substrat pentru a se lega de enzimă. Inhibarea va determina o scădere a valorii Vmax în timp ce KM nu este afectat. Aceasta înseamnă că valoarea de -1/KM rămâne aceeași pentru cele două linii, în timp ce noua valoare de 1 / Vmax este mai mare față de cea anterioară. Pentru a arăta acest lucru pe un complot dublu reciproc, scăderea Vmax va crește interceptarea y cu o pantă mai mare.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată. Câmpurile obligatorii sunt marcate cu *