Gasteyer a dezvoltat o experiență de comedie cu grupul de improvizații din Los Angeles The Groundlings. A jucat roluri mici pe Seinfeld (ca client condamnat al supa nazist), precum și pe spectacole Partidul celor cinci, Frasier, Hope & Gloria și NYPD Blue. În 1996, Gasteyer s-a alăturat distribuției Saturday Night Live. Printre cele mai populare personaje ale sale s-au numărat profesoara de muzică de liceu Bobbie Mohan-Culp, gazda Națională a radioului public Delicious Dish Margaret Jo McCullen, cântăreața feministă Lilith Fair Cinder Calhoun și impresiile ei despre Martha Stewart și Celine Dion. În 2000, ea și Chris Parnell au audiat pentru a reuși Colin Quinn ca co-ancore ale segmentului de parodie de știri actualizare de Weekend, dar pozițiile au mers în cele din urmă la Tina Fey și Jimmy Fallon.
după șase sezoane, Gasteyer a părăsit SNL în 2002. Ulterior, a apărut în diverse programe de televiziune, filme și producții de scenă. În 2004, Gasteyer a interpretat-o pe mama personajului principal Cady Heron (Lindsay Lohan) în lungmetrajul Mean Girls, scris de colega de castă SNL Tina Fey. Filmul a prezentat și alți foști colegi de distribuție SNL, inclusiv Fey, Tim Meadows, și Amy Poehler. De asemenea, a apărut în musicalul filmului Showtime din 2005 Reefer Madness ca Mae, iubita condamnată a lui Jack și proprietarul Reefer Den.
Gasteyer a jucat într-o renaștere a operei Threepenny de pe Broadway ca doamna Peachum, împreună cu Jim Dale, Alan Cumming și Cyndi Lauper. Producția a avut loc în perioada 24 martie-25 iunie 2006.
pe 24 iunie 2005, Gasteyer a creat rolul lui Elphaba în producția de la Chicago a musicalului rău, alături de Kate Reinders ca Glinda. Producția a fost deschisă pe 13 iulie 2005. Gasteyer a fost nominalizată la Premiul Jefferson pentru interpretarea ei. Ea a jucat ultima ei performanță pe 22 ianuarie 2006, înlocuită de Kristy Cates. Ulterior a reluat rolul în producția de pe Broadway din 10 octombrie 2006, până în 7 ianuarie 2007, înlocuind Eden Espinosa.
pe 12 aprilie 2007, mass-media a anunțat că Gasteyer s-a alăturat distribuției noului musical de atunci, Writing Arthur, pentru Festivalul de lucrări noi din 2007 pentru teatre din California, care s-a desfășurat în perioada 14 aprilie-22 aprilie. Gasteyer a cântat la Chicago în Stephen Sondheim musical Passion la Chicago Shakespeare Theatre din 2 octombrie 2007 până în 11 noiembrie 2007.
ea a fost inițial distribuită ca Gloria în bisuri! Producția de serie de vară a Damn Yankees, dar din cauza rănirii în timpul repetițiilor, ea a fost înlocuită de Megan Lawrence. Gasteyer a participat la citirea versiunii muzicale de pe Broadway a Clubului First Wives.ea a jucat rolul lui Kitty Dean în piesa de pe Broadway, familia regală, care a început spectacolele la Teatrul Samuel J. Friedman pe 15 septembrie 2009 și a fost deschisă oficial pe 8 octombrie 2009. Spectacolul și-a încheiat derularea pe 13 decembrie 2009. Gasteyer a jucat, de asemenea, ca Frisco Kate Fothergill în centrele orașului bisuri! producția de Girl Crazy, care se desfășoară în perioada 19 noiembrie-22 noiembrie 2009.
s-a întors la Saturday Night Live pentru un episod special de Ziua Mamei pe 8 mai 2010 și pentru un alt episod de Ziua Mamei pe 11 mai 2012.
Gasteyer a apărut în sezonul opt din Curb Your Enthusiasm ca prietena lui Larry David.din 2011 până în 2014, Gasteyer a jucat rolul Sheila Shay în serialul de comedie ABC Suburgatory, iar din martie 2013 a fost purtătoare de cuvânt a Planului de dietă Weight Watchers.
în 2014, profitând de pregătirea ei ca cântăreață, Gasteyer a înregistrat și lansat I ‘ m Hip, un album de standarde de jazz. „One Mint Julep” a fost una dintre selecțiile pe care le-a inclus. În 2015, a jucat-o pe Mimi Schwinn în New York City Center Encores! Off-Broadway renaștere a musicalului un nou creier, care apare și pe înregistrarea distribuției.
din 2016 până în 2017, Gasteyer a avut un rol principal în succesul cultului TBS People of Earth, în calitate de lider al unui grup de sprijin pentru răpiri extraterestre.
în octombrie 2019, a lansat albumul de vacanță Sugar & Booze. Gasteyer a apărut ulterior ca concurent în cel de-al doilea sezon al cântărețului mascat sub masca „The Tree”, terminând în cele din urmă competiția pe locul șase.
în februarie 2020, Gasteyer va juca rolul lui Katherine Hastings în comedia NBC pilot American Auto care a fost scris de Justin Spitzer. În septembrie și octombrie 2020, ea a exprimat un panda roșu pe nume Nut într-un serial animat pentru adulți intitulat Magical Girl Friendship Squad.