Taq DNA polimerase, isolada a partir de TerMus aquaticus, é uma DNA polimerase termostável que catalisa a incorporação primer-dependente de nucleótidos em DNA duplex na direção 5’→3′ na presença de Mg2+. É a DNA polimerase padrão termostável usada em aplicações PCR. Taq não possui 3’→5 ‘atividade de exonuclease, mas tem 5 ‘→3 ‘ atividade de exonuclease. A Taq polimerase é adequada para a maioria das aplicações PCR que não requerem uma enzima de alta fidelidade, como a detecção de sequências específicas de ADN ou ARN.
uma reacção em cadeia de polimerase típica (PCR) inclui ADN-alvo, uma polimerase de ADN termostável, como a Taq polimerase, dois iniciadores oligonucleotídicos, dNTPs, tampão de reacção e magnésio. Uma vez montada, a reação é colocada em um termociclador, que submete a reação a ciclos recorrentes de mudanças de temperatura durante os quais o DNA é desnaturado, primers anelam ao alvo e são estendidos pela polimerase para criar uma cópia da cadeia de DNA. Cada ciclo de PCR duplica teoricamente a quantidade de sequência alvo na reação até que os componentes de reação se tornem limitantes ou sejam consumidos.
no endpoint PCR, a análise ocorre após todos os ciclos de PCR são completados e a reação de amplificação atingiu um patamar (ou endpoint). Isto contrasta com o qPCR em tempo real, onde a formação do produto PCR é monitorada em tempo real à medida que a reação de amplificação ocorre. O Endpoint PCR é um método qualitativo. É amplamente utilizado para muitos fins, incluindo a determinação da presença ou ausência de uma sequência específica de ADN numa amostra-alvo, a detecção de agentes patogénicos, a amplificação de sequências-alvo para posterior análise e a detecção de sequências específicas de ADN, a fim de identificar indivíduos ou tipos de células.
PCR Master Mixes contain all the reaction components for PCR, including Taq polymerase, dNTPs and optimized buffer. As misturas mestre simplificam a configuração experimental e economizam tempo, pois o usuário simplesmente precisa adicionar template e primers para a reação.