evidência de transmissão Vertical do HPV de Mães para crianças

Abstract

poucos estudos de grande dimensão avaliaram a concordância com base num amplo espectro de tipos de papilomavírus humano (HPV) em amostras orais e genitais de mães e dos seus recém-nascidos. Esta informação é importante para determinar se as vacinas contra o HPV administradas antes da gravidez podem ser úteis para prevenir a transmissão vertical. O ADN do HPV foi positivo em 30% das mães e 1, 5% dos recém-nascidos. A concordância materna/ recém-nascida (HPV+ / + ou HPV) foi de 71%. Entre as mães com ADN + do HPV, apenas 3% dos seus lactentes eram ADN+ e apenas 1 par tinha o mesmo tipo de HPV. Entre as mulheres com HPV, 0, 8% dos lactentes foram HPV+. O ADN do HPV detectado em recém-nascidos hospitalizados reflecte a infecção actual transmitida aos lactentes durante a gravidez ou o parto. Nenhum dos pares de concordância ADN+ do HPV mãe/bebé detectou tipos virais encontrados nas vacinas contra o HPV, sugerindo que é improvável que a vacinação antes da gravidez seja eficaz na prevenção da transmissão vertical.

1. Introdução o papilomavírus humano (HPV) é bem reconhecido por causar papilomatose laríngea, verrugas genitais e cancro . Os tipos de HPV são classificados como tipos de baixo risco, não-cancerígenos, associados a verrugas anogenitais e papilomatose laríngea ou tipos de HPV de alto risco, oncogénicos, associados a cancros do colo do útero, áreas anogenitais e cabeça e pescoço . Os tipos de HPV mais prevalentes associados aos cancros genitais e orais são os HPV-16, 18 e 33. HPV-6 e -11 são mais comumente associados com papilomatose laríngea neonatal e verrugas genitais.embora o modo predominante de transmissão viral ocorra através do contacto sexual, o HPV também foi encontrado em mulheres Virgens antes do primeiro coito . Estudos sugerem que o vírus pode ser transmitido de mãe para criança antes ou durante o parto . Nós e outros descobrimos que o risco de transmissão vertical do ADN do HPV para a mucosa oral ou genital de recém-nascidos é raro, 1-5% . Em contraste, outros estudos sugerem que a transmissão vertical é comum, 40% -80%. Vários estudos de ADN persistente do HPV, um método para distinguir a inoculação da infecção verdadeira, relataram que a concordância materna/recém-nascido após o nascimento deve ser mantida entre 37% -83% às 6 semanas a 6 meses após o nascimento, enquanto outro estudo demonstrou uma menor prevalência de 10% em lactentes aos 24 meses de acompanhamento . A positividade materna do HPV é consistentemente um factor de risco para a infecção por HPV em lactentes . A prevalência deste modo não sexual de transmissão viral pode ter um impacto importante nas estratégias de vacinação e na gestão clínica das mulheres infectadas no planeamento familiar antes da gravidez. Assim, é importante não só clarificar a frequência de transmissão e concordância, mas também determinar se os mesmos tipos de HPV são detectados na mãe e na criança num ambiente controlado para outras fontes potenciais de transmissão do HPV. O objectivo deste estudo foi avaliar os factores de risco maternos para a transmissão do HPV aos recém-nascidos antes da alta hospitalar e avaliar o nível de concordância específica do tipo de HPV com base nos anticorpos maternos/lactentes e no ADN citológico das amostras genitais e orais.2. Métodos

2.1. Entre 1997 e 2000, todas as mulheres grávidas, com idade igual ou superior a 18 anos, que estavam a ser vistas no seu terceiro trimestre de gravidez durante exames obstétricos de rotina (), foram recrutadas para o estudo na Universidade de hospitais e clínicas de Iowa, Departamento de Obstetrícia/Ginecologia. O estudo incluiu apenas mulheres saudáveis com gravidezes normais. As mães foram excluídas se estivessem tendo gravidezes complicadas, tivessem uma barreira linguística, fossem mentalmente incapazes de consentir, ou não fossem entregar no hospital de pesquisa e, portanto, não seriam elegíveis para os objetivos do estudo. Todos os participantes assinaram um formulário de consentimento aprovado. Nem todas as mulheres recrutadas podiam ser incluídas nas análises finais porque algumas mulheres entregavam noutro local ou o sangue do cordão umbilical não estava disponível no parto. Entre 333 mulheres grávidas incluídas nas análises do estudo, os resultados do HPV foram avaliados através da obtenção de amostras de células cervicais e orais e da recolha de serologia peripartum. Foram obtidas amostras dos 333 recém-nascidos das áreas oral e genital e do sangue do cordão umbilical para o teste do Estado do HPV. Havia 193 recém-nascidos do sexo masculino e 140 do sexo feminino no estudo. Não foram identificados casais do mesmo sexo ou parceiros não biológicos durante o Recrutamento do estudo.

2, 2. Recolha de dados

após a assinatura pelas mães de um formulário de consentimento humano aprovado pela Universidade, estas completaram um questionário auto-administrado de informação sobre a demografia, a reprodução, A história sexual e as lesões relacionadas com o HPV. Os recém-nascidos foram avaliados pelo pediatra atendente quanto à idade gestacional no nascimento, sexo, tipo de parto, preferências de biberão/amamentação, problemas médicos no nascimento, e número de horas após o parto quando o espécime do HPV foi obtido da criança. Foram obtidos esfregaços cervicais maternos e enxaguamentos orais durante o terceiro trimestre de Gravidez e imediatamente antes do parto por obstetras e enfermeiros treinados. Foram obtidas amostras de soro materno assepticamente durante o processo de parto. Antes da descarga, os lactentes foram testados quanto ao ADN do HPV através da lavagem das suas regiões genital e oral. Os procedimentos já foram descritos anteriormente . As amostras orais e genitais da criança foram tomadas em média 42 horas após o nascimento para reduzir o risco de inoculação viral, mas não de infecção do tecido. O tempo mínimo após o nascimento antes de as amostras serem recolhidas para avaliar o ADN do HPV foi fixado em 24 horas; no entanto, uma vez que duas mulheres estavam a planear ser libertadas antes desse tempo, as amostras dos seus recém-nascidos foram recolhidas 24 horas após o nascimento. Nos machos circuncidados, foi testada uma porção de tecido para pesquisa de ADN do HPV. Foram obtidas amostras de soro para lactentes a partir da placenta à nascença.

2, 3. Métodos Laboratoriais.foram efectuados testes serológicos

para determinar se um indivíduo tinha anticorpos contra as proteínas cápsidas específicas ao HPV (partículas tipo vírus/VLPs). Os procedimentos foram descritos noutro local . A presença de anticorpos contra antigénios derivados de proteínas específicas do HPV foi determinada através de um teste ELISA utilizando os tipos 16, 18, 31 e 33 VLPs como antigénios e estes foram definidos como tipos de alto risco do HPV (HPV-HR). Os VLPs dos tipos 6 e 11 do HPV, definidos como tipos de baixo risco (HPV-LR), não estavam disponíveis no momento em que estas análises foram testadas. A reactividade de fundo foi determinada em poços sem antigénio. As suas absorvências foram subtraídas dos valores correspondentes obtidos na presença de antigénios. Os SOROS de controlo conhecidos como positivos e negativos foram testados em cada placa. Para o cálculo do nível de corte, acima do qual os valores de densidade óptica foram considerados positivos, foram incluídos em cada placa 10 soros padrão de dadores de sangue regulares conhecidos como negativos para os anticorpos do HPV. Os meios e a DP foram calculados separadamente para cada antigénio, o ponto de corte foi representado como a absorvância média da amostra de controlo mais 3 DP. preparação da amostra, análises PCR, hibridação do ADN e procedimentos de tipagem de HPV para avaliação de células orais esfoliadas foram baseados num protocolo padrão descrito anteriormente . Cada reação PCR incluiu iniciadores para amplificar o gene-globina para verificar o DNA adequado e a adequação das amplificações PCR do DNA celular. Todas as amostras de células orais deram positivo para o gene globina. Dois por cento do ADN (tipicamente 50-200 ng) extraído das amostras de células foi amplificado por PCR com my09 e my11 primers para detectar o HPV e um primer (HMB01) projetado para amplificar o HPV-51 para melhorar a detecção deste tipo . O produto PCR foi examinado pela primeira vez para detectar a presença de uma banda amplificada de 400 nt do HPV em géis de agarose manchados a 1% de brometo de etídio. Uma alíquota do produto PCR de todas as amostras que eram negativas para o HPV após a coloração foi hibridizada pelo método dot blot com sondas marcadas para uma detecção mais sensível do DNA do HPV. Essas amostras positivas apenas após a hibridação da membrana foram submetidas a amplificação por PCR Hemi-aninhada com primers MY09 e GP5+. A sequenciação do ADN foi utilizada para determinar os tipos de HPV em cada amostra positiva do HPV, realizada pela terminação do corante num sequenciador de ADN (Applied Biosystems-PE). As sequências de nucleótidos foram comparadas com as sequências de GenBank usando o programa BLAST .

2, 4. Foi utilizada a análise estatística de regressão logística

para estimar os rácios de probabilidade (ORs) e os intervalos de confiança de 95% (CIs) para a seropositividade associada ao HPV associada às características da mãe e do recém-nascido, ajustando para o número de parceiros sexuais e história materna de uma doença relacionada com o HPV. A concordância foi examinada usando o teste de McNemar para pares emparelhados em duas tabelas utilizando resultados de DNA VLP e HPV mãe e recém-nascidos. A estatística Kappa foi utilizada para medir o Acordo no estado de positividade do HPV entre as amostras de soros recém-nascidos e mães. A significância estatística foi anotada em .05 e todos os testes foram de 2 lados. Todas as análises foram realizadas utilizando o pacote estatístico SAS .

3. Os resultados

a Tabela 1 mostra as características demográficas e os factores de risco para o ADN do HPV em 333 mulheres grávidas saudáveis positivas para um ou mais tipos de HPV detectados no colo do útero e/ou mucosa oral. A Idade Média na entrega era de 29 anos (intervalo: 18-44 anos), 16% eram raças não-brancas/não-hispânicas, e 77% tinham mais do que o ensino médio. Mais de três quartos tiveram relações sexuais antes dos 21 anos de idade, dois terços tiveram 3 ou mais parceiros antes da atual gravidez, mais de metade teve duas ou menos gravidezes anteriores, e a maioria tinha usado contraceptivos orais. Mais de 25% das mulheres tinham antecedentes de lesão relacionada com o HPV e cinco tinham cancro do colo do útero confirmado histologicamente. A maioria dos recém-nascidos eram do sexo masculino (58%), 39 semanas de gestação (67%) e nascidos por parto vaginal (89%).