Bioquímica estrutural/Enzyme/Duplo-Recíproco enredo: Lineweaver Burk plote

Lineweaver-Burke enredo

O duplo-recíproco equação é obtida tomando-se o recíproco de ambos os lados do Michaelis-Menten equação. O gráfico duplo-recíproco (também conhecido como o lineweaver-Burk) é criado por traçar a velocidade inicial inversa (1/V0) como uma função do inverso da concentração do substrato (1/). O Vmax pode ser determinado com precisão e assim KM também pode ser determinado com precisão porque uma linha reta é formada. O declive da linha resultante é KM/Vmax, a intercepção y é 1/Vmax, e a intercepção x é -1 / KM. Usando a equação de Michaelis-Menten, o Vmax é uma assintota e só pode ser aproximado e como resultado, o KM, que é Vmax / 2, não pode ser determinado com precisão. Esta parcela é uma forma útil de determinar diferentes inibidores, tais como competitivos, Não Competitivos e não competitivos.

Inibidor Competitivo

Por inibidores competitivos, o inibidor compete com o substrato molécula de ligar para o local de ligação. Consequentemente, o KM aumentará sem alterar o valor Vmax. Isto significa que os dois grafos terão a mesma interceptação em y como mostrado abaixo. No entanto, a nova intercepção x pode ser bastante esquiva. Para este tipo de inibidores, é necessária uma maior concentração do substrato para ocupar metade dos locais activos. Portanto, o KM2 será maior que o KM1. Isto se traduz em um valor recíproco mais elevado de KM1 do que o de KM2. No entanto, a interceptação x tem o sinal negativo na frente dela, assim no grafo ele tem que se mover para a direita em relação à interceptação anterior. Para mostrar isso no gráfico duplo recíproco, o declive aumentará para mostrar a força do inibidor competitivo de ligação. Enquanto o declive aumenta com a presença do inibidor, a interceptação em y permanece a mesma na presença e ausência do inibidor. para os inibidores não competitivos, o inibidor apenas se liga a um complexo de substrato enzimático.; por conseguinte, não compete com o substrato para o local de ligação. Consequentemente, os valores de KM e Vmax diminuem. Conseqüentemente, o valor recíproco do novo Vmax deve estar em uma posição mais elevada sobre o eixo, como uma fração se torna maior quando o denominador fica menor. O novo valor recíproco de KM passará para a esquerda e a explicação deverá ser semelhante à do inibidor competitivo. Para mostrar isso em um gráfico duplo recíproco, a inclinação permanecerá a mesma como se a enzima não estivesse ligada ao inibidor, mas a interceptação do eixo x diminuirá. A parcela de dupla reciprocidade para a enzima com e sem inibidores não competitivos será de duas linhas paralelas.

para inibidores não-competitivos, o inibidor pode ligar-se à enzima antes que o substrato possa ligar-se ao local de ligação. Não tem de esperar que a enzima se torne um complexo de substrato enzimático para se ligar à enzima. A inibição provocará uma diminuição do valor de Vmax enquanto o KM não for afectado. Isto significa que o valor de -1/KM permanece o mesmo para as duas linhas, enquanto o novo valor de 1/Vmax é maior em relação ao anterior. Para mostrar isso em um gráfico duplo recíproco, a diminuição em Vmax irá aumentar a interceptação em y com um declive maior.

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