Streszczenie
Tło. Leczenie zakażeń kandydozą jest ważnym problemem w systemie ochrony zdrowia. Celem badania było zbadanie in vitro wpływu olejku lawendowego i klotrimazolu na wyizolowane C. albicans z kandydozy pochwy. Materiały i metody. W tym badaniu klinicznym uzyskano C. albicans wyizolowany z próbek wydzieliny z pochwy. Wyniki. Porównanie par wykazało, że lawenda i klotrimazol miały znaczącą różnicę; różnica ta w grupie lawendy była niższa niż klotrimazol. Ale po 48 godzinach nie było żadnej różnicy między grupami. Stwierdzono istotną różnicę pomiędzy grupami klotrimazolu i DMSO. Porównując zmiany między grupami w oparciu o to samo rozcieńczenie, po 24 h i 48 h w grupie klotrimazolu, wykazano dwukrotną istotną różnicę w liczbie komórek grzyba, że jej średnia podczas 48 h była mniejsza niż 24 h. W grupie lawendowej zaobserwowano istotną różnicę pomiędzy tymi dwoma okresami, tylko przy rozcieńczeniach 1/20 i 1/80. Średnia liczba komórek grzyba po 48 h była również niższa w grupie lawendowej. Wnioski. Biorąc pod uwagę, że lawenda ma działanie przeciwgrzybicze, może być stosowana jako środek przeciwgrzybiczy. Konieczne są jednak dalsze badania kliniczne w celu potwierdzenia jego stosowania w zakażeniu candida.
1. Wprowadzenie
infekcje ginekologiczne to najczęstsze powody, dla których kobiety odwiedzają lekarza i proszą o leczenie, a w ostatnich latach nasilenie i częstość występowania zakażeń grzybiczych niespodziewanie wzrosły. Jedną z chorób wywoływanych przez endogenną florę pochwy jest kandydoza. Szacuje się, że 75% kobiet co najmniej raz w życiu doświadcza kandydozy sromu i pochwy. Prawie 45% kobiet cierpi na tę infekcję dwa razy w roku. Na szczęście tylko niewielka liczba kobiet cierpi na przewlekłe nawracające infekcje. C. albicans jest odpowiedzialny za zarodek w 85-90% zakażeń drożdżycą pochwy . Wczesne rozpoznanie i odpowiednie leczenie zapalenia pochwy są ważne, ponieważ brak terminowego i odpowiedniego leczenia tych zakażeń prowadzi do poważnych powikłań, takich jak zapalenie narządów miednicy mniejszej, niepłodność, przewlekły ból miednicy, przedwczesny poród i niebezpieczeństwa zakażenia HIV . Ponieważ liczba pacjentów z AIDS i cukrzycą oraz stosowanie antybiotyków wzrasta każdego dnia, a biorąc pod uwagę, że ta choroba grzybicza ma wysoką częstość występowania w tej populacji pacjentów, ważne jest, aby znaleźć bezpieczne, a także odpowiednie leczenie. Tłusta esencja jest tradycyjnie stosowana w leczeniu i zapobieganiu różnym chorobom i infekcjom .
w obecnej erze nastąpił duży trend w opiece medycznej w Ameryce, który polega na stosowaniu medycyny komplementarnej i alternatywnej. Obejmuje szereg zabiegów z akupunktury i spotkań modlitewnych, a co ważniejsze, stosowanie leków ziołowych, które obejmują tradycyjne zioła i rodzime rośliny z Chin, Indii, Afryki, Europy i Ameryki. Chociaż podstawowe badania naukowe nie zostały przeprowadzone na tych roślinach, tło stosowania ziół w minionych wiekach, a także bycie produktem naturalnym, udowodniło, że jest to stosunkowo bezpieczna terapia. Tak, ta medycyna alternatywna została podkreślona ze względu na ograniczone skutki uboczne i niski koszt jego stosowania w leczeniu chorób przewlekłych i profilaktyce .
Lawenda (Lavandula angustifolia), jako rodzaj zioła leczniczego, może być skutecznie stosowana w leczeniu wydzielin z pochwy. Olejek lawendowy jest często stosowany w medycynie tradycyjnej, a jego wpływ na zmniejszenie ilości grzyba Candida albicans wykazano w badaniach in vitro i klinicznych .
z drugiej strony, jednym z konwencjonalnych leków chemicznych w leczeniu kandydozy pochwy jest klotrimazol. Ponieważ ten chemiczny lek ma skutki uboczne, takie jak zwiększona aktywność enzymów wątrobowych, bolesne oddawanie moczu i depresja (z powodu ogólnoustrojowego wchłaniania leku) oraz powikłania, takie jak podrażnienie i uczucie mrowienia lub kontaktowe zapalenie skóry , oraz ze względu na rosnącą odporność na leki przeciwgrzybicze , w tym badaniu oceniono wpływ lawendy (Lavandula angustifolia) i klotrimazolu na wzrost kandydozy pochwy, in vitro.
2. Metodologia
w tym badaniu pobrano próbki dopochwowo w sterylnych warunkach od 45 kobiet z klinicznymi objawami grzybicy pochwy, które skierowano do klinik powiązanych z Uniwersytetem Medycznym Babol. Po umieszczeniu pacjenta w pozycji litotomii i umieszczeniu sterylnego wziernika w pochwie, do pobierania próbek z tylnego fornix i bocznych boków pochwy użyto sterylnego wacika, a następnie próbkę umieszczono w sterylnej probówce. Próbki zostały przebadane i dostarczone do laboratorium Mykologicznego Uniwersytetu Medycznego w Babolu. Tylko 20 z 45 próbek było dodatnich w teście in vitro. Zastosowane metody to środowisko uprawy Candida CHROMagar, utworzona rurka zarodkowa w surowicy ludzkiej i agar mączki kukurydzianej do wytwarzania chlamydosporu w tym środowisku.
w laboratorium przeprowadzono mokry rozmaz w celu wykrycia komórek grzybów drożdżowych i zakażeń trichomonas; poza tym przeprowadzono hodowlę laboratoryjną na Sabouraud, podłoże BHI do pierwotnej izolacji grzybów i test probówki zarodkowej przez ludzką surowicy krwi z Chromagarem w celu identyfikacji rodzajów candida. Grzyby utrzymywano i passowano w pożywce Sabourauda w celu oceny in vitro 1% klotrimazolu, a tłustą esencję lawendy na C. albicans zbadano w ponad 20 próbkach wyizolowanych od 45 pacjentów, stosując metodę analizy liczby komórek (makrodilucji). Kropla Clotrimazolu jest jednym z głównych leków stosowanych w leczeniu zakażeń grzybiczych w Iranie, a firma Behvazan jest jedną z kilku firm farmaceutycznych w Iranie, która produkuje i dystrybuuje ten lek. Kropla klotrimazolu została zakupiona w aptece w Babolu, natomiast olejek lawendowy został przygotowany i zakupiony od firmy Barij Essence. W tej firmie wykorzystano nadziemne części rośliny lawendy, a jej olejek eteryczny został zabrany przez Clevengera. Związkami Lavandula angustifolia po GC (chromatografia gazowa) były limonen, cyneol, linalol i linalyl acet. Nie jest jasne, który z nich ma działanie przeciwgrzybicze. Wydaje się, że wszystkie związki mają działanie przeciwgrzybicze.
w metodzie makrodylucji, loopful colony czysta kultura C. preparat albicans stosowany w agarze z dekstrozą Sabouraud dostarczał zawiesinę o stężeniu 0,5 McF drożdżaków (103 i 106 komórek grzybów na mL) w pożywce do hodowli agaru bhi (brain Heart Infusion).
Po przygotowaniu zawiesiny C. albicans, lawendy i klotrimazolu przeprowadzono rozcieńczenie. Tak więc lawendę z czystym rozpuszczalnikiem DMSO (dimetylosulfotlenek) rozcieńczono do 1/5 w sterylnej probówce i tę samą procedurę przeprowadzono również dla klotrimazolu. Następnie przygotowano rozcieńczenia 1/10, 1/20, 1/40, 1/80 i 1/160 każdego leku i wlano do 5 studzienek mikropłytki. W szóstej studzience mikropłytki wylano kontrolę DMSO i ostatecznie do wszystkich studzienek mikropłytki dodano 100 mikrolitrów Półkrwi zawiesiny grzybów. Zabieg ten wykonywano trzy razy dla lawendy i trzy razy dla klotrimazolu (w trzech egzemplarzach), a następnie mikropłytki umieszczano w Bain marie w temperaturze 37°C. Po 24 i 48 godzinach komórki grzyba policzono za pomocą mikroskopowego hemocytometru Neubauera (jako liczba krwinek czerwonych w hematologii). Kropla klotrimazolu (1%) została wyprodukowana w Behvazan Pharmaceutical Company, a olejek lawendowy został przygotowany w Barij Essence Company. Uzyskane dane analizowano za pomocą statystyk opisowych oraz wykorzystano analizę nieparametryczną testu Kruskala-Wallisa oraz testy Manna-Whitneya i Wilcoxona.
3. Wyniki
spośród 45 próbek podejrzanych o zakażenie candida pochwy, żadna z próbek nie miała rzęsistkowica w bezpośrednim teście, ale tylko 25 przypadków było pozytywnych dla C. albicans. Ze względu na niepowodzenie 5 przypadków zbadano in vitro 20 przypadków C. albicans uzyskanych od pacjentów. Analizując dane, stwierdzono przez test normalności, że rozkład danych nie jest normalny. Zastosowano więc nieparametryczny test Kruskala-Wallisa oraz testy Manna-Whitneya i Wilcoxona. Porównanie trzech grup kontrolnych lawendy, klotrimazolu i DMSO za pomocą testu Kruskala-Wallisa w ciągu pierwszych 24 godzin rozcieńczeń 1/40 () i 1/160 () wykazało znaczącą różnicę między grupami. W odniesieniu do innych rozcieńczeń i po 48h, liczba komórek grzyba nie wykazała znaczących różnic między tymi trzema grupami. Porównanie pomiędzy dwiema grupami lawendy i klotrimazolu za pomocą testu Manna-Whitneya wykazało, że liczba komórek grzyba po 24 godzinach, w rozcieńczeniach odpowiednio 1/20 i 1/40 oraz 1/160,, i , miała znaczącą różnicę między tymi dwiema grupami. W tych rozcieńczeniach, w ciągu pierwszych 24 godzin, liczba komórek grzybów w grupie lawendy była niższa niż w grupie klotrimazolu (Fig.1), a po 48 godzinach nie stwierdzono różnic między grupami (fig. 2). Ale porównanie grup klotrimazolu i DMSO wykazało, że istnieje znacząca różnica między tymi dwiema grupami w rozcieńczeniach 1/40 i 1/160 i nie ma znaczącej różnicy między lawendą a DMSO. Chociaż, jak widać na fig. 1, średnia liczba komórek grzyba w lawendzie była niższa niż w pozostałych dwóch grupach w większości rozcieńczeń, testy nie wykazały statystycznie istotnych różnic.
test Wilcoxona przeprowadzono oddzielnie w grupach klotrimazolu i lawendy w celu porównania zmian między grupami w oparciu o te same rozcieńczenia między 24h a 48h. Porównanie grupy klotrimazolowej po 24h i 48h wykazało, że istniała znacząca różnica między liczbą komórek grzyba dla rozcieńczeń odpowiednio 1/10, 1/20, 1/40, 1/80 i 1/160,,,, i, a jej średnia w 48h była mniejsza niż 24h. w grupie lawendowej zaobserwowano znaczącą różnicę między tymi dwoma okresami tylko dla rozcieńczeń 1/20 i 1/80 . Ponadto w tej grupie średnia liczba komórek grzyba była również niższa po 48h. ale w przypadku rozcieńczenia 1/10 średnia liczba komórek grzyba po 48h była wyższa niż w przypadku większej liczby rozcieńczeń. Niektóre leki są bardziej skuteczne przy niższych rozcieńczeniach.
4. Dyskusja
wraz ze wzrostem lekoopornego leczenia grzybiczego w ostatnich latach i niekorzystnym działaniem środków przeciwgrzybiczych, zapotrzebowanie na nowe leki stało się ważne. W niniejszym badaniu wykazano, że zioło lawendy ma działanie przeciwgrzybicze. Badania nad przeciwgrzybiczym działaniem lawendy były różne. Lawenda miała bardzo słabe działanie hamujące grzyba w niektórych badaniach, ale w większości przypadków jej działanie przeciwgrzybicze było znacznie pozytywne . Devkatte et al. w badaniach nad olejkami ziołowymi jako potencjalnymi inhibitorami wzrostu Candida albicans zmierzono do określenia minimalnego stężenia hamującego i minimalnego stężenia grzybobójczego 38 esencji olejków ziołowych. Poinformowano, że olejek cynamonowy był najlepszy i miał wpływ na stężenie fungicydu 0,03 procent w stosunku do 4 szczepów candida. Większość olejów znajdowała się w grupie umiarkowanej, a 9 olejów było najmniej skutecznych, w których lawenda była uważana za najmniej skuteczną. Mahboubi et al. poinformował, że lawenda ma umiarkowaną aktywność przeciwgrzybiczą, podczas gdy inne olejki eteryczne, takie jak tymianek i geranium, mają silne działanie przeciwgrzybicze. Mahboubi wykazał, że niektóre olejki eteryczne są najbardziej skuteczne przeciwko szczepom candida . Zasadniczo olejek lawendowy ma długą historię stosowania leczniczego w tradycyjnej medycynie chińskiej (TCM) i ma działanie przeciwbakteryjne przeciwko grzybom i bakteriom . Kilka kombinacji, takich jak octan linalylu, linalol, kwas masłowy i kwas propionowy, bierze udział w tej aktywności . W podobnym badaniu wykazano, że olejek eteryczny Lavandula angustifolia i jego główne składniki, linalol i octan linalylu, mogą zabijać lub hamować wzrost grzybów . Dane wykazały istotną różnicę między trzema grupami lawendy, klotrimazolu i kontroli w wyższych rozcieńczeniach (1/40 i 1/160) dla aktywności przeciwgrzybiczej. Liczba komórek grzyba w grupie lawendowej była niższa niż w pozostałych grupach. Behmanesh et al. stwierdzono, że liczba komórek grzybiczych w probówkach zawierających wlew lawendy i esencję lawendową była mniejsza niż w probówkach klotrimazolu. Ponadto, najskuteczniejsze działanie przeciwgrzybicze leków (niższa liczba komórek grzybiczych) obserwowano przy wyższych rozcieńczeniach . W swoich badaniach D ’ Auria et al. stwierdzono, że wyższe rozcieńczenia lawendy hamują tworzenie się grzybów i wydłużenie włókien oraz zmniejszają wzrost grzyba i jego szybkość dyfuzji w tkance.
wyniki porównania pomiędzy dwiema grupami lawendy i klotrimazolu wykazały, że liczba komórek grzyba po 24h, dla rozcieńczeń 1/20 i 1/40 i 1/160, miała istotne różnice. W tych rozcieńczeniach liczba komórek grzyba w lawendzie była niższa niż klotrimazol. W podobnym badaniu wykazano, że we wszystkich różnych rozcieńczeniach klotrimazol miał najniższe działanie przeciwgrzybicze i najwyższą liczbę komórek grzybów. W tym badaniu odkryliśmy, że napar z ziela lawendy i jego istoty w porównaniu z klotrimazolem ma wyższą aktywność przeciwgrzybiczą przeciwko C. albicans .
dane dotyczące porównania klotrimazolu i grup kontrolnych wykazały istotne różnice w stężeniach 1/40 i 1/160 między tymi dwiema grupami. Gharibi et al. w badaniu porównano jednoczesne stosowanie flukonazolu i klotrimazolu z częstymi dawkami w leczeniu nawracającej kandydozy i wykazano, że dwie metody zmniejszania dolegliwości i objawów swędzenia, drapania, obrzęku, rumienia i szczelin były bardzo skuteczne dwa tygodnie po leczeniu (), a objawy kandydozy pochwy również zmniejszyły się w ciągu 6 tygodni leczenia w grupie interwencyjnej i miały znaczącą różnicę w grupie kontrolnej ().
wyniki badań na temat zmian między grupami według tego samego rozcieńczenia, ale po 24h i 48h w grupie klotrimazolu wykazały, że dla rozcieńczeń 1/10, 1/20, 1/40, 1/80 i 1/160 istniała znacząca różnica między dwiema liczeniami komórek grzybów, w których ich średnia była wyższa w ciągu 24h niż 48h. również w grupie lawendowej, przy rozcieńczeniach 1/20 i 1/80, istotna różnica była obserwowana dwa razy i liczba komórek grzyba wynosiła 1/10, 1/20, 1/40, 1/80 i 1/160. średnia liczba komórek grzyba była niższa po 48h.ghahramanlo et al. przeprowadził podobne badanie i wykazał wzrost efektów przeciwgrzybiczych w żywicach akrylowych ze wzrostem stężenia nanocząstek i czasu w porównaniu do mikroorganizmów kontaktowych.
5. Wniosek
zgodnie z wynikami tego badania i informacjami zapisanymi w starych księgach ziół leczniczych Iranu, możemy uzyskać dodatkowe informacje z dalszych badań w celu wsparcia skuteczności lawendy.
konflikt interesów
autorzy nie mają konfliktu interesów.
podziękowania
autorzy dziękują zastępcy ds. badań i Technologii Uniwersytetu Medycznego w Babolu za wsparcie finansowe.