Taq Polymerase

Taq DNA polymerase, geïsoleerd uit Thermus aquaticus, is een thermostabiele DNA polymerase die de primer-afhankelijke incorporatie van nucleotiden in duplex DNA katalyseert in de 5’→3′ richting in aanwezigheid van Mg2+. Het is de standaard thermostabiele polymerase van DNA die in PCR-toepassingen wordt gebruikt. Taq bezit geen 3’→5 ‘exonuclease activiteit maar heeft 5’ →3 ‘ exonuclease activiteit. De polymerase van Taq is geschikt voor de meeste PCR-toepassingen die geen hoog-getrouwheidsenzym vereisen, zoals het ontdekken van specifieke opeenvolgingen van DNA of van RNA.

een typische polymerasekettingreactie (PCR) omvat target-DNA, een thermostabiele DNA-polymerase zoals Taq-polymerase, twee oligonucleotide-primers, dNTPs, reactiebuffer en magnesium. Eenmaal geassembleerd, wordt de reactie geplaatst in een thermische cycler, die de reactie aan terugkerende cycli van temperatuurveranderingen onderwerpt waarbij DNA gedenatureerd wordt, onthard de inleidingen aan het doel en door de polymerase wordt uitgebreid om een exemplaar van de bundel van DNA tot stand te brengen. Elke PCR-cyclus verdubbelt theoretisch de hoeveelheid gerichte opeenvolging in de reactie totdat de reactiecomponenten beperkend worden of worden verbruikt.

bij eindpuntpcr vindt de analyse plaats nadat alle PCR-cycli zijn voltooid en de amplificatiereactie een plateau (of eindpunt) heeft bereikt. Dit contrasteert met real-time qPCR, waar PCR-productvorming in real-time wordt gecontroleerd aangezien de versterkingsreactie voorkomt. Endpoint PCR is een kwalitatieve methode. Het wordt wijd gebruikt voor vele doeleinden met inbegrip van het bepalen van de aanwezigheid of afwezigheid van een specifieke opeenvolging van DNA in een doelsteekproef, het ontdekken van ziekteverwekkers, het versterken van doelopeenvolgingen voor verdere analyse, en het ontdekken van specifieke opeenvolgingen van DNA om individuen of celtypes te identificeren.

PCR-Mastermengsels bevatten alle reactiecomponenten voor PCR, inclusief Taq-polymerase, dNTPs en geoptimaliseerde buffer. Master mixen vereenvoudigen experimentele setup en tijd te besparen, als de gebruiker gewoon nodig heeft om sjabloon en primers toe te voegen aan de reactie.

Geef een antwoord

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd. Vereiste velden zijn gemarkeerd met *