experimenteel en therapeutisch geneesmiddel

introductie

een realtime celmonitoringanalyse (RTCA) werd eerder ontwikkeld voor continue monitoring van aanhangende celculturen (1). Deze label-vrije en niet-invasieve methode is gebaseerd op het meten van de elektrische impedance (cell index, CI) tussen interdigitated gebieden op de basis van weefselkweekplaten. De CI-meting levert kwantitatieve informatie over de biologische status van aanhangende cellen. Eigenlijk is de Betekenis van CI het aantal overlevingscellen op het oppervlak van de E-plaat. Deze gegevens omvatten het celaantal, levensvatbaarheid, en morfologie als real-time profiel (2-4). RTCAsystem is bekend aan vroege opsporing apparaat van celreactie als adynamisch fenotype tegen sommige reagentia (5).

in ons vorige onderzoek werd de cytotoxiciteit van imatinib bij oralsquamous cell carcinoma (OSCC) beoordeeld met behulp van WST.-8(5– 3-(2- methoxy-4-nitrofenyl)-2-(4-nitrofenyl) – 2H – tetrazool – 3-ium) test als een endpoint meting (6), en vervolgens later met een RTCA-systeem (7).Eindpuntmetingen door MTT (3-2,5-difenyltetrazoliumbromide) en WST-8-tests worden vaak gebruikt om de cytotoxiciteit te evalueren. Nochtans, worden dergelijke analyses beperkt door variaties in de gevolgen van verschillende antikankeragent op verschillende cellijnen. Bovendien zijn de IC50-waarden berekend door middel van in vitro endpoint assays meestal hoger dan de effectieve concentraties in vivo (8,9).

in onze vorige studie waren de IC50-waarden gemeten door het RTCA-systeem lager dan die gemeten door de WST-8-test, wat erop wijst dat het RTCA-systeem de cytotoxiciteit en de invloed van imatinib op de celladhesiegevoelig kan evalueren. Het is echter onduidelijk of de evaluatie van de IC 50-waarden van andere middelen tegen kanker die het Rtcasysteem gebruiken nuttig zou zijn omdat er in de loop van de tijd verschillen zijn in cytotoxische reacties tussen moleculair gerichte geneesmiddelen zoals imatinib en antikankermiddelen.

in deze studie moeten we een bepaald type cellijnen selecteren om het verschil van celreactieprofiel tegen reagentia tegen kanker in real-time te bepalen met behulp van RTCA-systeem.Niet-invasieve SQUU-a cellijn en invasieve SQUU-B cellijn die werden vastgesteld uit lokale recidiverende tong kanker tumoren in een enkele patiënt, werden geselecteerd omdat we bezig waren met onderzoek op metastase van SQUU – B cellijn met behulp van SQUU-a cellijn en SQUU-Bcell lijn (10-12). SAS-cellijn werd vastgesteld uitpoorly gedifferentieerd humaan plaveiselcelcarcinoom van de tong (13). NA cellijn werd vastgesteld als een fibronectine-producerende cellijn (14). Verder is gemeld dat de cytotoxiciteit van anti-kankerreagentia in OSCC is geëvalueerd in SQUU-a-cellijn en SQUU-B-cellijn (15), SAS-cellijn (16), NA-cellijn (17) met behulp van verschillende conventionele methoden.Dat is waarom, selecteerden wij vier deze cellijnen met elk kenmerkend kenmerk in de huidige studie, die ook in cytotoxische analyse in vorige studie werden gebruikt.

in deze studie richtten we ons op een nieuw RTCA-apparaat ontwikkeld voor real-time metingen en evalueerden we de IC50-waarden als een schaal om de cytotoxiciteit van onze antikankermiddelen in vier OSCC-cellijnen te beoordelen. Hierdoor konden we informatie verkrijgen over de variaties die werden waargenomen tussen de verschillende reagentia tegen kanker en cellijnen in realtime.

Het doel van deze studie was om 50 profielen te verkrijgen van onmiddellijk na toevoeging van antikankermiddelen met behulp van een RTCA-systeem. Deze studie toonde het voordeel aan van het evalueren van de cytotoxiciteit van middelen tegen kanker met behulp van een RTCA-systeem in vergelijking met een endpoint assay.

materialen en methoden

reagentia en materialen

5-Fluorouracil (5-FU) werd verdund tot 100 mM indimethylsulfoxide (DMSO; Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, MO, USA).Doxifluridine en carboplatine werden verdund tot respectievelijk 100 en 50 mM in gedestilleerd water. Docetaxel werd verdund tot 10 mM inethanol. Alle reagentia tegen kanker waren afkomstig van Wako PureChemical Industries, Ltd., (Osaka, Japan) en opgeslagen bij -20°C.

celcultuur

menselijke OSCC-cellijnen SQUU-a, SQUU-B, SAS en Nawer werden afgeleid van monsters van menselijke tong. SQUU – A en SQUU-B, werden geleverd door Morifuji-Wilson M (Kumamoto University, Kumamoto, Japan), werden vastgesteld op basis van lokale terugkerende tonguecancer tumoren (18). SAS (13,19,20) werd aangekocht bij de Riken BRC Celbank (Tsukuba, Japan). NA (14) werd vriendelijk verstrekt door Dr.Jun-ichi Iwata (Kyushu Universiteit; Fukuoka, Japan). Alle cellijnen werden onderhouden in Dulbecco ’s modified Eagle’ s medium (DMEM;Nacalai Tesque, Inc., Kyoto, Japan) met 10% foetaal kalfsserum(Biowest, Nuaille, Frankrijk) bij 37°C in een bevochtigde atmosfeer met 5% CO2.

meting van OSCC – celproliferatie door de RTCA-cytotoxiciteitstest

CI werd verkregen door het iCELLigence system (ACEABiosciences, Inc., San Diego, CA, USA) als het RTCA-systeem. Alle controles werden uitgevoerd bij 37°C met gereguleerd Co2gehalte (5%). E-platen (kweekplaten voor het iCELLigence-systeem)met 200 µl kweekmedium per putje werden geëquilibreerd tot 37°C, en CI werd onder deze omstandigheden op nul gezet. Cellen (2×104 cellen/putje, tenzij anders aangegeven) werden toegevoegd in 560 µl kweekmedium antikankermiddelen werden toegevoegd 24 uur na het voeden van de cellen. De CI werd in real-time gecontroleerd voor het inzaaien van 96 uur na cel. De IC50-waarden werden berekend door RTCAData Analysis Software Versie 1.0 (ACEA Biosciences, Inc.).

8 punten concentratie van vier anti-kankerreagentia werd vastgesteld op basis van Cmax-waarden in vorige studie (21-25). Bovendien werden tijdpunten vastgesteld gedurende 72 uur, waaronder 24 uur en 48 uur, wat een algemene methode was om de cytotoxiciteit in de eindpuntbepaling te evalueren.

Curve fitting van de IC50data

We gebruikten de volgende sigmoidale dose-responseformula om de IC50-waarden te berekenen: Y=Low CI + (HighCI-Low CI)/{1+10 ^ (Log IC50-X)}, waarbij ‘Low CI ‘de minimale CI-waarden voorstelt,’ High CI ‘ de maximale celindexwaarden, Y de celindex en X de log van concentratie (M).

meting van de proliferatie van OSCC-cellen door de WST-8-test

na het inzaaien en kweken van OSCC-cellen werd het kweekmedium verwijderd en vervangen door een middel dat anticanceragent bevat. Na 24, 48 en 72 H van incubatie, 20µl WST-8 kleurstof (Cell Counting Kit-8; Dojindo Corporation, Tokyo,Japan) werd toegevoegd aan elke put. Na 3 uur werden de platen afgelezen bij 450 nm / 655 nm. De celoverleving werd berekend met behulp van het onderstaande formulier (7). IC50-waarden werden berekend door lineaire approximatie regressie van het percentage overleving versus de geneesmiddelconcentratie.

cell survival rate (%)=(a-c)/(b-c) ×100(a=absorptie bij elke concentratie van het antikankerreagens,b=absorptie bij 0 µM van het antikankerreagens en c = absorptie van de blanco).

statistische analyse

alle gegevens worden weergegeven als de gemiddelde ± standaardafwijking (SD) van drie onafhankelijke experimenten. Correlaties tussen de 50 waarden verkregen met behulp van het RTCA-systeem en WST-8assay werden beoordeeld op statistische significantie door de Spearmantest. Tweestaartwaarden van P<0,05 werden als significant beschouwd.

resultaten

Effect van de concentratie van het middel tegen kanker op de proliferatie van OSCC-cellen met behulp van het RTCA-systeem

we hebben de cytotoxiciteit van vier middelen tegen kanker (5-FU, doxifluridine, carboplatine en docetaxel) in fourOSCC-cellijnen geëvalueerd door de CI-waarden voor 96 uur na het zaaien van de cellen in 2×104 cellen / put op E-platen(Afb. 1–4). De CI-waarden werden op adose-afhankelijke wijze verlaagd in alle vier OSCC-cellijnen. Daarom correleerde de reductie in CI-waarden met de afname in cel number.As weergegeven in Fig. 2, de CI waarde voor invasieve SQUU – B cellijn was lager dan die van andere OSCC cells.As weergegeven in Fig. 3, CI profileobtained voor SAS cellijn toonde vertraagde toename na 48 h. Asshown in Fig. 4, De snelheid van verspreiding en maximale CI waarde in na cellijn waren hoger dan een van andere cellijnen.

Real-time meting van de IC50-profielen van antikankermiddelen in OSCC-cellen met behulp van het RTCA-systeem

De IC50-profielen van de vier antikankerreagentia in de vier OSCC-cellijnen werden bepaald door het Rtcasysteem en berekend door de commerciële software die bij het instrument werd geleverd (een deelverzameling van de SQUU-b-gegevens wordt weergegeven in Fig. 5). De IC50-waarden werden gedurende 72 uur na toevoeging van antikankermiddelen uitgezet. De IC50-waarden bij 24, 48 en 72 uur voor alle vier de cellijnen zijn samengevat in de tabellen I-IV. 5, Er was een vertraging in de cytotoxische reacties van 5-FU (Fig. 5A) anddocetaxel (Fig. 5D), and recovery ofcell proliferation was observed at about 24 h after treatments.However, cytotoxic reactions were observed immediately aftertreatment with anticancer agents such as doxifluridine (Fig. 5B) and carboplatin (Fig. 5C).

Dose-response curves in SQUU-B cell line using RTCAsystem were shown in supplemental materials (Figs. S1–S4) in order to show how to conversion thedata of Fig. 2 into Fig. 5. Terwijl, cel levensvatbaarheid curven van quu-B met behulp van WST-8 assay werden ook aangetoond in aanvullende materialen (Fig. S5–S8). R2-waarden bij 72 uur na toevoeging van antikankerreagentia in de WST-8-test waren laag in vier antikankerreagentia in vergelijking met een van 24 uur en 48 uur. uit deze resultaten bleek dat het wenselijk is dat de eindpuntbepaling bij 24 uur of 48 uur als algemeen protocol wordt gebruikt. In deze studie werden de cellevensvatbaarheidscurves van de WST-8-test niet-complementaire materialen aangetoond omdat er geen nieuwigheid was in de wijze waarop IC50-waarden met de WST-8-test werden berekend.

correlaties tussen real-timemetingen van IC50-waarden met behulp van het RTCA-systeem en endpointmetingen van IC50-waarden met behulp van de WST-8assay in OSCC-cellen

zoals weergegeven in Fig. 6, IC50 waarden bij 24, 48, en 72 h gebruikend twee methodes werden uitgezet. De horizontale as toont real-time IC50 waarden gemeten met behulp van het RTCA-systeem, terwijl de longitudinale as laat zien Endpoint IC50 waarden gemeten met behulp van de WST-8 assay. Er werd een apositieve correlatie waargenomen tussen de twee typen assaymethode om de IC50 voor elk middel tegen kanker te meten.Het resultaat van 5-FU, doxifluridine, carboplatine, en docetaxcelwere y=8.19 x+346.02 (R2=0.94,rs=0.66, *P<0.05), y=1,00 x+172.70(R2=0.91, rs=0.82, **P<0.01),y=1,90 x+206.81 (R2=0.92,rs=0.96, **P<0.01), andy=13.53 x+0.08 (R2=0.95,rs=0.73, *P<0.05), respectievelijk. De real-timeIC50-waarden waren meestal lager dan de corresponderende IC50-waarden.

discussie

CI-waarden berekend door de RTCA geven ook de celstatus weer (3). Asshown in vijgen. 1-5, SD-waarden van CI-waarden waren te klein om te zien. Bijvoorbeeld alle SD-waarden in Fig.1 waren onder 0,05. De reden voor lage CI waarden van SQUU-B werd gesuggereerd dat het adhesieproteã ne E-cadherin een essentialrol in metastase speelt, met verminderde niveaus van e-cadherin bevorderende celmigratie en celinvasie (26). De reden voor hoge maximum CI waarden van na werd voorgesteld dat het is gemeld dat fibronectinaccelerated celproliferatie en adhesie toe te schrijven aan de eigenschap van na cellijn als fibronectin producerende cellijn (6). Zo waren de celreacties van elke cellijn tegen vier reagentia tegen kanker variabel. We konden het causale verband tussen IC50-waarden en de kenmerken van cellijnen in deze studie niet vinden. Het is echter belangrijk om een celreactie in real-time te detecteren als een CI-profiel om de toxiciteit van antikankerreagens te evalueren wanneer farmaceutische toepassing op de mens wordt overwogen.

het IC50-profiel van de SQUU – B-cellijn werd beschreven in Fig. 5 als representatief IC50-profiel omdat er geen verschillen waren in IC50-profielpatroon in dezelfde cellijn incase van hetzelfde reagens, hoewel we IC50-waarden in alle cellijn berekenden gebruikend vier reagentia tegen kanker. We vonden dat de IC50 profielen varieerden voor elk middel tegen kanker en in elke OSCC cellijn. Zoals in Fig.5, 5-FU en docetaxel hadden meer dan 24 uur (48 uur in de figuur) nodig om een cytotoxisch effect op de OSCC-cellen uit te oefenen,terwijl de IC50-waarden na toevoeging van doxifluridine en carboplatine waren hersteld van ongeveer 24 uur(48 uur in de figuur). Zo stelden we voor dat de verschillen in real-timeIC50 profielen veroorzaakt werden door antikankerreagens. Dergelijke observaties zouden niet mogelijk zijn geweest zonder real-time meting met behulp van de RTCA. Real-time monitoring van de IC50-waarden toonde ook aan dat deze waarden in de loop van de tijd sterk veranderden. Er bestaat de mogelijkheid wijzigingen niet met conventionele methoden te detecteren, omdat slechts één tijdstip van de IC50 na behandeling met het middel tegen kanker wordt geëvalueerd door middel van een endpoint assay.

het RTCA-systeem is in tegenstelling tot traditionele eindpuntassays omdat de impedantiemeting niet-invasief is en kwalitatief hoogwaardige kwantitatieve gegevens over cytotoxiciteit op een continue manier kan opleveren. Zoals in Fig.6, waren er significante positieve correlaties tussen de 50 waarden verkregen met het RTCA-systeem en WST-8assay, ook al waren er enkele verschillen in absolute waarden van CI zoals lage CI waarden verkregen voor SQUU-B cellijn. Deze resultaten suggereerden dat zelfs een lage CI verkregen voor sommige cellijnen in staat zou zijn om de cytotoxiciteit hoge gevoeligheid in RTCAsystem te evalueren. Terwijl de real-time IC50-waarden lager waren dan de Endpoint IC50-waarden wanneer de real-time IC50-waarden verkregen met het RTCA-systeem werden vergeleken met de Endpoint IC50-waarden verkregen met de WST-8-assay.Deze resultaten suggereren dat het RTCA-systeem kan worden gebruikt om het effect van antikankermiddelen op de celproliferatie en adhesie gevoelig te evalueren.

in RTCA-systeem werkt adherente cel als isolator op het oppervlak van de elektrode en verandert het Ionische medium van de elektrodeoplossing, waardoor de impedantie toeneemt (27). Aldus, is CI functie van het cellnumber en de verhouding van cellen op verschillende tijdsintervallen. BI = 0 wanneer er geen celadhesie is (5). CIchanges beschreven door RTCA-systeem zijn gereflecteerd dynamisch fenotype van Cell. Deze dynamische monitoring van cel-geneesmiddelinteractie stelt ons in staat om een beter inzicht te krijgen in temporele effecten invitro, vooral onmiddellijk na behandeling met geneesmiddel(28). De kinetische eigenschap van thecells biedt inzichtelijke informatie aan die niet van een conventionele enige eindpuntanalyse zoals analyse WST-8 kan worden verkregen. Terwijl de resultaten van de WST-8-test worden weerspiegeld metabole reactie van overlevingcell (29). Toxiciteit met behulp van WST-8assay zou kunnen worden onderschat als cel metabole reactie wereremained hoewel dynamische celreactie werd opgetreden. Wij stelden voor dat deze voornaamste verschillen in twee methoden werden veroorzaakt door verschillen van IC50-waarde tot 8 keer tussen twee methoden, zoals weergegeven in Fig. 6A. onze vorige studie meldde dat IC50 van imatinib in SQUU-Acells berekend door RTCA-systeem en WST-8 analyse respectievelijk 4 µM en 60µM waren (gevoeligheid van 15 keer) (6,7). Andere onderzoeksgroepen meldden dat IC50 van cisplatine in HK-2-cellen, berekend door RTCA-systeem en WST-8-test, respectievelijk 0,76 µM en 25µM bedroeg (gevoeligheid van 33 keer) (30,31).Deze vorige gegevens ondersteunden onze gegevens om de geldigheid aan te tonen.

Het is belangrijk dat direct na de behandeling met middelen tegen kanker metingen worden verricht om zowel de bijwerkingen van de middelen als de gewenste effecten te beoordelen. Er zijn echter weinig meldingen van nuttige methoden die invitro-gegevens correleren met humane in vivo-gegevens. We waren van mening dat het meten van de realtime met behulp van het RTCA-systeem de evaluatie van de bijwerkingen van antikankermiddelen in normale cellen ten goede zou komen.

eerder gemelde Cmax-waarden van 5-FU,doxifluridine, carboplatine en docetaxel zijn 60 (21), 40-800 (22), 40 (23), en 2 µM (24,25),respectievelijk, bij gebruik voor intraveneuze behandeling bij mensen. Onze gegevens correleerden met de gegevens bij de mens omdat de Cmaxwaarden waren opgenomen in het bereik van de experimentele doses die in dit onderzoek werden gebruikt.

RTCA-systemen zijn het nieuwe belangrijkste hulpmiddel om de cytotoxiciteit te evalueren, waarbij gebruik wordt gemaakt van de impedantie-intensiteit van celladhesion en niet van de enzymactiviteit in doelcellen zoals de MTTassay. IC50-waarden van antikankermiddelen berekend door RTCA-systeem waren significant gecorreleerd met IC50-waarden berekend door de conventionele eindpuntbepaling. Bovendien heeft het RTCA-systeem metingen automatisch in real-time verkregen van onmiddellijk na behandeling met antikankermiddelen.

in feite kan het RTCA-systeem de directe cytotoxiciteit, zoals celdood of apoptose, niet evalueren, omdat de celindex werd berekend op basis van de impedantie. Daarom kan de combinatietest tussen RTCA-systeem en celdoodmeting een effectieve methode zijn in het geval van evaluatie van concrete celreacties zoals celdood of apoptose precies.Bijvoorbeeld, Annexine V kleuring of expressie van caspase-3 assayvoor detectie van apoptose, lactaat Dehydrogenase (LDH) releaseasay voor detectie van celdood kunnen effectieve methoden(32,33). Bovendien zou het nuttig kunnen zijn om uitdrukking van ontstekingseiwit in de normale cellen te evalueren voordetectie van bijwerking wanneer het reagens tegen kanker aan de op e-plaat geplaatste normale cellen werd toegevoegd. Dynamische real-time monitoring tijdens celculturen met inbegrip van reagentia tegen kanker kan waardevolle inzichten bieden voor de vroege detectie van therapeutische efficiëntie en neveneffect, die niet kunnen worden geëvalueerd in conventionele methoden in end-pointassay. Dus, IC50-waarde berekend door RTCA-systeem kan nuttige parameter zijn voor zoals screening vanuit een standpunt van realtime meting in geautomatiseerde, het vermijden van colorimetrische problemen of verontreiniging. Voorts staat het RTCA-systeem de analyse van de gehele periode van het experiment toe en vereist niet de etikettering die celcultuurexperiments negatief kan beà nvloeden.

de nieuwheid van deze studie is dat RTCA-systeem cytotoxiciteit hoge gevoeligheid kon detecteren in vergelijking met een conventionele methode, WST-8 assay. Bovendien kon het RTCA-systeem de 50-waarde in real-time nauwkeurig evalueren zonder beperkingen van de experimentele periode gedurende ten minste 72 uur na toevoeging van antikankerreagentia.

concluderend toonden onze resultaten aan dat Rtcasystemen nuttig zijn voor het bepalen van de cytotoxiciteit en kunnen worden gebruikt voor de toekomstige ontwikkeling van chemotherapeutische middelen met behulp van kankercellen en de evaluatie van hun bijwerkingen in normale cellen. Bovendien, kan een RTCA systeem worden gebruikt om de cel reactie profielen,zoals gecombineerde therapie en antilichaam-cel of drug-druginteracties, van reagentia tegen kanker te evalueren.

aanvullend materiaal

ondersteunende gegevens

bevestigingen

niet van toepassing.

financiering

Er is geen financiering ontvangen.

beschikbaarheid van gegevens en materialen

De tijdens de onderhavige studie gebruikte en/of geanalyseerde datasets zijn op redelijk verzoek verkrijgbaar bij de corresponderende auteur.

bijdragen van auteurs

MH en MN hebben het onderzoek ontworpen en ontworpen. MH andTN voerde de experimenten uit en verwierf de gegevens. MH analyseerde de gegevens, bereidde de cijfers en stelde het manuscript op. MH, TKY en mn interpreteerden de resultaten. MH en TKY redigeerden en reviseerden hetmanuscript. Alle auteurs hebben het eindmanuscript gelezen en goedgekeurd.

ethische goedkeuring en toestemming om deel te nemen

niet van toepassing.

toestemming van de patiënt voor publicatie

niet van toepassing.

concurrerende belangen

De auteurs verklaren geen concurrerende belangen te hebben.

	Xing JZ, Zhu L, Jackson JA, Gabos S, SunXJ, Wang XB en Xu X: Dynamic monitoring of cytotoxicity onmicroelectronic sensors. Chem Res Toxicol. 18:154–161. 2005.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Xing JZ, Zhu LJ, Gabos s and Xie L:Microelectronic cell sensor assay for detection of cytotoxicity andprediction of acute toxicity. Toxicol In Vitro. 20:995–1004. 2006.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Zhu J, Wang X, Xu X and Abassi YA: Dynamicand label-free monitoring of natural killer cell cytotoxic activityusing electronic cell sensor arrays. J Immunol Methoden. 309:25–33.2006. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Xi B, Yu N, Wang X, Xu X and Abassi YA:The application of cell-based label-free technology in drugdiscovery. Biotechnol J. 3: 484-495. 2008. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Türker Sener L, Albeniz G, Dinc B andAlbeniz I: iCELLigence real-time cell analysis system for examining the cytotoxicity of drugs to cancer cell lines. Exp Ther Med.14:1866–1870. 2017. Bekijk artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Morioka M, Hazekawa M, Kawakubo-YasukochiT, Nishinakagawa T, Nakamura S and Nakashima M: Effect of collagentype I or human fibronectin on imatinib cytotoxiciteit bij Oralsquamous celcarcinoom. Pharmacol Pharm. 7:255–263. 2016.Bekijk artikel: Google Scholar
	Hazekawa M, Morioka M, Nishinakagawa T, Kawakubo – Yasukochi T, Nakamura S and Nakashima M: Beoordeling van de cytotoxiciteit van imatinib voor oraal plaveiselcelcarcinoom door areal-time cel analyse systeem. eJBio. 13:56–62. 2017.
	McEneny-King A, Edginton AN en Rao PP:Investigating the binding interactions of the anti-Alzheimer drugdonepezil with CYP3A4 and P-glycoproteïne. Bioorg Med Chem Lett.25:297–301. 2015. Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ota T, Shinotoh H, Fukushi K, Kikuchi t,Sato K, Tanaka N, Shimada H, Hirano S, Miyoshi m, Arai h, et al:Esyimation of plasma IC50 of donepezil for cerebralacetylcholinesterase inhibitie bij patiënten met Alzheimer met behulp van positron emissie tomografie. Clin Neurophaemacol. 33:74–78.2010. Bekijk Het Artikel : Google Scholar
	Kawakubo-Yasukochi T, Morioka M, HayashiY, Nishinakagawa T, Hazekawa M, Kawano s Nakamura s en NakashimaM: de SQUU-B-cellijn verspreidt zijn metastatische eigenschappen tononmetastatisch kloon Squu-a van dezelfde patiënt via exosomen.J Oral Biosci. 58:33–38. 2016. Bekijk artikel : Google Scholar
	Morioka M, Kawakubo-Yasukochi T, HayashiY, Hazekawa M, Nishinakagawa T, Ono K, Kawano s, Nakamura s andNakashima M: Exosomen van orale plaveiselcelcarcinoomlijnen, SQUU – A en SQUU-B, bepalen het tropisme van lymfatische verspreiding. JOral Biosci. 58:180–184. 2016. Bekijk artikel : Google Scholar
	Kawakubo-Yasukochi T, Morioka M, HazekawaM, Yasukochi A, Nishinakagawa T, Ono K, Kawano s, Nakamura s andNakashima M: Mir-200c-3P verspreidt invasieve capaciteit in menselijke oralsquamous celcarcinoom micro-omgeving. Mol Carcinog. 57:295–302.2018. Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Takahashi K, Kanazawa H, Akiyama Y, TazakiS, Takahara M, Muto T, Tanzaawa H en Sato K: vaststelling en karakterisering van een cellijn (Sas) uit slecht gedifferentieerd plaveiselcelcarcinoom van de tong. J Jpn Stomatol Soc.38:20–28. 1989.
	Yoshiya M: een fibronectineproducerende cellline die is vastgesteld uit een humaan plaveiselcelcarcinoom van de tongueen en de karakterisering ervan. Jpn J Oral Maxillofac Sur. 36:868–880.1990. Bekijk artikel: Google Scholar
	Tanaka H, Toyoshima T, Sonoda K, KitamuraR, Sasaguri M, Kawano s, Matsubara R, Goto Y en Nakamura s:Apoptotic function of tumor-associated antigen RCAS1 in oralsquamous cell carcinoma. J Transl Med. 12:1122014. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Chien MH, Chang WM, Lee WJ, Chang YC, LaiTC, Chan DV, Sharma R, Lin YF en Hsiao M: Een FAS ligand(FasL)-gefuseerd gehumaniseerd antilichaam tegen tumor-associatedglycoproteïne 72 vertoont selectief het cytotoxische effect tegen orale kankercellen met een lage FasL/Fas verhouding. Mol Kanker Er.16:1102–1113. 2017. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
Takaoka s, Iwase M, Uchida M, Yoshida S,Kondo G, Watanabe H, Ohashi M, Nagumo m en Shintani s : Effect van het combineren van epidermale groeifactor receptor inhibitors en Cisplatinonproliferatie en apoptose van orale plaveiselcelcarcinomacellen. Int J Oncol. 30:1460–1476. 2007.
	Morifuji M, Taniguchi S, Sakai H,Nakabeppu Y en Ohishi m: differentiële expressie van cytokeratin na orthotopische implantatie van nieuw vastgestelde humane tonguecancer-cellijnen met een gedefinieerd metastatisch vermogen. Am J Pathol.156:1317–1326. 2000. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Hung CM, Chang CC, Lin CW, Ko SY en HsuYC: Cucurbitacine e Als inductor van celdood en apoptose in humaan plaveiselcelcarcinoom cellijn SAS. Int J Mol Sci.14:17147–17156. 2013. Bekijk artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
Chen YW, Huang HS, Shieh YS, Ma KH, HuangSH, Hueng DY, Sytwu HK and Lin GJ: a novel compound NSC745885exerts anti-tumor effect on tong cancer SAS cells in vitro en Invivo. PLoS ÉÉN. 9: e1047032014. Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Casale F, Canaparo R, Serpe L, Muntoni E,Pepa CD, Costa M, Marirone L, Zara GP, Fornari G en Eandi M:plasmaconcentraties van patiënten met 5-fluorouracil en zijn metabolieten incolonkanker. Pharmacol Res. 50: 173-179. 2004. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Van Der Heyden SA, Highley MS, de BruijinEA, Tjaden UR, Reeuwijk HJ, van Slooten H, Van Oosterom AT and MaesRA: Farmacokinetiek en biologische beschikbaarheid van oral5′-deoxy-5-fluorouridine bij kankerpatiënten. Br J Clin Pharmecol.47:351–356. 1999. Bekijk artikel : Google Scholar
	Kern W, Braess J, Friedrichsen S, KaufmannCC, Schleyer E en Hiddemann W: farmacokinetiek van carboplatine bij patiënten die carboplatine en paclitaxel/docetaxel krijgen voor geavanceerde longkanker: Impact van leeftijd en nierfunctie op gebied onder de curve. J Cancer Res Clin Oncol. 127:64–68. 2001.Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Kenmotsu H en Tanigawara Y:farmacokinetiek, dynamiek en toxiciteit van docetaxel: waarom de Japanse dosis verschilt van de westerse dosis. Kanker Sci.106:497–504. 2015. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Minami h, Kawada K, Sasaki Y, Igarashi T,Saeki T, Tahara M, Itoh K and Fujii H: Pharmacokinetics andpharmacodynamics of protein-unbound docetaxel in cancer patients.Kanker Sci. 97:235–241. 2006. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Zhao P, Guo s, Tu Z, Di L, Zha X, Zhou Hand Zhang X: Gihl3 induceert migratie en invasie van humane epitheliale tumorcellen via downregulatie van e-cadherin. Acta Biochim BiophysSin (Shanghai). 48:266–274. 2016. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Szulccek R, Bogaard HJ en van NieuwAmerogen GP: Elektrische cel-substraatimpedantie die voor de kwantificering van endothelial proliferatie, barrièrefunctie, en beweeglijkheid ontdekken. J Vis Exp. 28 maart 2014. ViewArticle: Google Scholar
	Ku m, Kang M, Suh JS en Yang J: effecten voor sequentiële behandeling van siAkt en paclitaxel op maagkankerlijnen. Int J Med Sci. 13:708–716. 2016. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Feng Z, Wang Z, Yang M, Zhou L and Bao Y:Polysaccharopeptide exerts immunoregulatory effects viaMyD88-dependent signaling pathway. Int J Biol Macromol. 82:201–207.2016. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Genc G, Kilinc V, Bedir A and Ozkaya O:Effect of creatine and pioglitazone on Hk-2 cell line cisplatinnephrotoxicity. Ren Fail. 36:1104–1107. 2014. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ng NS, Wu MJ, Myers SJ and Aldrich-WrightJR: De in vitro nierceltoxiciteit van sommige onconventionalanticancer op fenantroline gebaseerde platina (II) cpmplexen. J lnorgBiochem. 179:97–106. 2018. Bekijk artikel: Google Scholar
	Ma K, Zhang C, huang MY, Guo YX and Hu GQ:kruisverwijzing tussen Beclin-1-dependent autophagy and caspase-dependent apoptose induced by transhinone IIA in humanosteosarcoom MG-63 cells. Oncol Rep. 36: 1807-1818. 2016. Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Augustine D, Rao RS, Anbu J and ChidambaraMurthy KN: In vitro cytotoxic and apoptotic induction effect ofearthworm coelomic fluid of Eudrilus eugeniae, Eisenia foetida, andPerionyx excavatus on human oral squamous cell carcinoma-9 cellline. Toxicol Rep. 6:347–357. 2019. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI