La doppia reciproco equazione si ottiene prendendo il reciproco di entrambi i lati dell’equazione di Michaelis-Menten. Il grafico a doppio reciproco (noto anche come Lineweaver-Burk) viene creato tracciando la velocità iniziale inversa (1/V0) in funzione dell’inverso della concentrazione del substrato (1/). Il Vmax può essere determinato con precisione e quindi KM può anche essere determinato con precisione perché si forma una linea retta. La pendenza della linea risultante è KM / Vmax, l’intercetta y è 1/Vmax e l’intercetta x è -1/KM. Usando l’equazione di Michaelis-Menten, il Vmax è un asintoto e può quindi essere solo approssimato e di conseguenza, il KM, che è Vmax / 2, non può essere determinato con precisione. Questa trama è un modo utile per determinare diversi inibitori come competitivi, non competitivi e non competitivi.
Per gli inibitori competitivi, l’inibitore compete con la molecola di substrato per legarsi al sito di legame. Di conseguenza, il KM aumenterà senza modificare il valore Vmax. Ciò significa che i due grafici avranno la stessa intercetta y come mostrato di seguito. Tuttavia la nuova x-intercept potrebbe essere piuttosto sfuggente. Per questo tipo di inibitori, è necessaria una maggiore concentrazione del substrato per occupare metà dei siti attivi. Pertanto KM2 sarà più grande di KM1. Ciò si traduce in un valore reciproco più elevato di KM1 rispetto a quello di KM2. Tuttavia l’intercetta x ha il segno negativo di fronte ad essa, quindi sul grafico deve spostarsi a destra rispetto all’intercetta precedente. Per mostrare questo sulla trama doppia reciproca, la pendenza aumenterà per mostrare la forza dell’inibitore competitivo vincolante. Mentre la pendenza aumenta con la presenza dell’inibitore, l’intercetta y rimane la stessa in presenza e assenza dell’inibitore.
Per gli inibitori non competitivi, l’inibitore si legherà solo a un complesso enzima-substrato; pertanto, non è in concorrenza con il substrato per il sito di legame. Di conseguenza, sia i valori KM che Vmax diminuiscono. Di conseguenza, il valore reciproco del nuovo Vmax dovrebbe essere in una posizione più alta sull’asse, poiché una frazione diventa più grande quando il denominatore diventa più piccolo. Il nuovo valore reciproco di KM si sposterà a sinistra e la spiegazione dovrebbe essere simile a quella dell’inibitore competitivo. Per mostrare questo su un doppio diagramma reciproco, la pendenza rimarrà la stessa come se l’enzima non fosse legato all’inibitore, ma l’intercetta dell’asse x diminuirà. Il doppio diagramma reciproco per l’enzima con e senza l’inibitore non competitivo sarà due linee parallele.
Per gli inibitori non competitivi, l’inibitore può legarsi all’enzima prima che il substrato possa legarsi al sito di legame. Non deve aspettare che l’enzima diventi un complesso enzima-substrato per legarsi all’enzima. L’inibizione causerà una diminuzione del valore Vmax mentre il KM non è influenzato. Ciò significa che il valore di -1/KM rimane lo stesso per le due linee, mentre il nuovo valore di 1/Vmax è più alto rispetto al precedente. Per mostrare questo su un doppio grafico reciproco, la diminuzione di Vmax aumenterà l’intercetta y con una pendenza maggiore.