L’ADN polymérase Taq, isolée de Thermus aquaticus, est une ADN polymérase thermostable qui catalyse l’incorporation de nucléotides dépendants de l’amorce dans l’ADN duplex dans la direction 5 ‘→3′ en présence de Mg2+. C’est l’ADN polymérase thermostable standard utilisée dans les applications de PCR. Taq ne possède pas d’activité exonucléase 3’→5′ mais a une activité exonucléase 5’→3’. La Taq polymérase convient à la plupart des applications de PCR qui ne nécessitent pas d’enzyme haute fidélité, telles que la détection de séquences d’ADN ou d’ARN spécifiques.
Une réaction en chaîne par polymérase (PCR) typique comprend de l’ADN cible, une ADN polymérase thermostable telle que la Taq polymérase, deux amorces oligonucléotidiques, des DNTP, un tampon de réaction et du magnésium. Une fois assemblée, la réaction est placée dans un thermocycleur, qui soumet la réaction à des cycles récurrents de changements de température au cours desquels l’ADN est dénaturé, les amorces reculent jusqu’à la cible et sont prolongées par la polymérase pour créer une copie du brin d’ADN. Chaque cycle de PCR double théoriquement la quantité de séquence ciblée dans la réaction jusqu’à ce que les composants de la réaction deviennent limitants ou soient consommés.
Dans la PCR au point final, l’analyse se produit une fois que tous les cycles de PCR sont terminés et que la réaction d’amplification a atteint un plateau (ou un point final). Cela contraste avec le qPCR en temps réel, où la formation de produit de PCR est surveillée en temps réel lorsque la réaction d’amplification se produit. La PCR aux points finaux est une méthode qualitative. Il est largement utilisé à de nombreuses fins, notamment la détermination de la présence ou de l’absence d’une séquence d’ADN spécifique dans un échantillon cible, la détection d’agents pathogènes, l’amplification de séquences cibles pour une analyse plus approfondie et la détection de séquences d’ADN spécifiques afin d’identifier des individus ou des types de cellules.
Les mélanges maîtres PCR contiennent tous les composants de réaction pour la PCR, y compris la Taq polymérase, le DNTPS et le tampon optimisé. Les mélanges maîtres simplifient la configuration expérimentale et permettent de gagner du temps, car l’utilisateur doit simplement ajouter un modèle et des amorces à la réaction.