L’équation double-réciproque est obtenue en prenant l’équation réciproque des deux côtés de l’équation de Michaelis-Menten. Le tracé double-réciproque (également connu sous le nom de tracé Lineweaver-Burk) est créé en traçant la vitesse initiale inverse (1/V0) en fonction de l’inverse de la concentration en substrat (1/). Le Vmax peut être déterminé avec précision et ainsi KM peut également être déterminé avec précision car une ligne droite est formée. La pente de la ligne résultante est KM / Vmax, l’interception y est 1 / Vmax et l’interception x est -1 / KM. En utilisant l’équation de Michaelis-Menten, le Vmax est une asymptote et ne peut donc être qu’approximé et par conséquent, le KM, qui est Vmax / 2, ne peut pas être déterminé avec précision. Ce tracé est un moyen utile de déterminer différents inhibiteurs tels que compétitifs, non compétitifs et non compétitifs.
Pour les inhibiteurs compétitifs, l’inhibiteur entre en compétition avec la molécule de substrat pour se lier au site de liaison. Par conséquent, le KM augmentera sans modifier la valeur Vmax. Cela signifie que les deux graphiques auront la même ordonnée à l’origine comme indiqué ci-dessous. Cependant, la nouvelle interception x peut être assez insaisissable. Pour ce type d’inhibiteurs, une concentration plus élevée du substrat est nécessaire pour occuper la moitié des sites actifs. Par conséquent, KM2 sera plus grand que KM1. Cela se traduit par une valeur réciproque de KM1 plus élevée que celle de KM2. Cependant, l’interception x a le signe négatif devant elle, donc sur le graphique, elle doit se déplacer vers la droite par rapport à l’interception précédente. Pour le montrer sur le double tracé réciproque, la pente augmentera pour montrer la force de l’inhibiteur compétitif de liaison. Alors que la pente augmente avec la présence de l’inhibiteur, l’interception y reste la même en présence et en absence de l’inhibiteur.
Pour les inhibiteurs non compétitifs, l’inhibiteur ne se liera qu’à un complexe enzyme-substrat; par conséquent, il ne concurrence pas le substrat pour le site de liaison. Par conséquent, les valeurs KM et Vmax diminuent. Par conséquent, la valeur réciproque de la nouvelle Vmax devrait être à une position plus élevée sur l’axe, car une fraction devient plus grande lorsque le dénominateur devient plus petit. La nouvelle valeur réciproque de KM se déplacera vers la gauche et l’explication devrait être similaire à celle de l’inhibiteur compétitif. Pour montrer cela sur un double tracé réciproque, la pente restera la même que si l’enzyme n’était pas liée à l’inhibiteur, mais l’interception de l’axe des abscisses diminuera. Le double tracé réciproque pour l’enzyme avec et sans inhibiteur non compétitif sera deux lignes parallèles.
Pour les inhibiteurs non compétitifs, l’inhibiteur peut se lier à l’enzyme avant que le substrat ne puisse se lier au site de liaison. Il n’est pas nécessaire d’attendre que l’enzyme devienne un complexe enzyme-substrat pour se lier à l’enzyme. L’inhibition entraînera une diminution de la valeur Vmax alors que le KM n’est pas affecté. Cela signifie que la valeur de -1/KM reste la même pour les deux lignes, tandis que la nouvelle valeur de 1/Vmax est plus élevée par rapport à la précédente. Pour montrer cela sur un double tracé réciproque, la diminution de Vmax augmentera l’ordonnée à l’origine avec une pente plus grande.