koehenkilöt
kolmekymmentäyksi tervettä, resistenssikoulutettua urosta (22, 1 ± 5, 0 vuotta, 180 ± 0, 1 cm, 86, 1 ± 13, 0 kg, 18, 1 ± 6, 4% kehon rasvaprosenttia) ilmoitettiin laitoksen hyväksymästä tutkimusprotokollasta.tarkastuslautakunta Baylorin yliopistossa ennen osallistumista. Koulutustilanne raportoitiin itse, ja henkilöt, joilta puuttui vähintään vuoden kokemus ennen opiskelua, suljettiin pois. Lisäksi tutkimushenkilöt suljettiin tutkimuksen ulkopuolelle, jos heillä 1) oli anamneesissa metabolista, hypertensiota, hepatorenaalia, tuki-ja liikuntaelinten sairauksia, autoimmuunisairauksia tai neurologisia sairauksia, 2) he käyttivät parhaillaan kilpirauhaslääkkeitä, antihyperlipideemisiä, hypoglykeemisiä, verenpainelääkkeitä tai androgeenisiä lääkkeitä ja 3) olivat ottaneet ravintolisiä, jotka voivat vaikuttaa lihasmassaan ja/tai anabolisiin/katabolisiin hormonitasoihin kolmen kuukauden kuluessa tutkimuksen aloittamisesta.
Lähtötasotestaus
Tutkimuskelpoiset koehenkilöt perehdytettiin tutkimussuunnitelmaan suullisen ja kirjallisen selvityksen avulla. Koehenkilöt allekirjoittivat tietoon perustuvan suostumuksen ja suorittivat henkilökohtaiset ja sairauskertomukset ja suorittivat samalla Wingaten anaerobisen kapasiteettitestin ennen perustason testausta. Tutkittavia kehotettiin pidättäytymään rasittavasta liikunnasta 48 tunnin ajan ja paastoamisesta 10 tunnin ajan ennen lähtötason testausta (eli päivä 0), joka tapahtui 3-4 päivän kuluttua perehdyttämisestä, jotta ravinnon saanti voidaan kirjata. Tässä tutkimuksessa käytettiin kaksoissokkoutettua, lumekontrolloitua rinnakkaista tutkimusmallia, jossa koehenkilöt yhdistettiin tasaisesti ryppäisiin iän ja kehon massan mukaan.
Koeprotokolla
päivien 0, 25 ja 50 aikana kukin koehenkilö raportoitiin laboratorioon 10 tunnin paaston jälkeen. Korkeus mitattiin normaalilla antropometrialla ja kokonaispaino mitattiin kalibroidulla Healthometer digital strain gauge electronic scale-mittarilla (Bridgeview, IL) tarkkuudella ± 0,02 kg. Kehon koostumus määritettiin kalibroidulla Hologic Discovery W dual-energy x-ray absorptiometer (DXA) – laitteella (Hologic Inc., Bedford, MA), kun taas verenpaine ja leposyke määritettiin normaaleilla menetelmillä. Tämän jälkeen koehenkilöt luovuttivat noin 25 ml paastoverta käyttäen tavanomaisia laskimokanyylitekniikoita hematologisessa, kliinisessä kemiassa ja myöhemmin sytokiini-ja hormonianalyysissä. Kaksi 10 ml: n seerumierotusvacutainer-putkea ja yksi 5 ml: n K3 EDTA-vacutainer-putkea työnnettiin vacutainer-pitimeen veren keruuta varten peräkkäin käyttäen useita näytteiden flebotomiatekniikoita. Kokoverestä analysoitiin välittömästi täydellinen verenkuva, kun taas seerumin tyhjäkäyntiputkia sentrifugoitiin huoneenlämmössä 15 minuutin ajan 1 500 grammassa, seerumin supernatantti siirrettiin mikrosentrifugiputkiin ja seeruminäytteet säilytettiin -20°C: ssa myöhempiä hormonaalista ja metaboliittianalyysejä varten. Vain päivinä 0 ja 50 koehenkilöt luovuttivat noin 60 mg vastus lateralis-luurankolihasta käyttäen Bergstromin biopsiatekniikkaa. Ylä-ja alavartalon lujuus arvioitiin tavanomaisilla 1RM-testimenetelmillä penkkipunnerruksella ja 35° lonkkakelkalla (Nebula, Versailles, OH). Laboratoriossamme tehtyjen kestävyystestien luotettavuus on osoittautunut erittäin luotettavaksi penkkipunnerruksessa (r = 0,94) ja jalkaprässissä (r = 0,91). Lonkkakelkan 1RM määrityksen jälkeen koehenkilöt lepäsivät 10 minuuttia ennen kuin he suorittivat 30 sekunnin Wingate-anaerobisen kapasiteettitestin tietokoneistetulla pyöräilyergometrillä (Lode Excalibur, Lode, Groningen, Alankomaat), jossa he arvioivat alavartalon anaerobista tehoa. Tässä testissä jokainen koehenkilö pyrähti pyöräergometrillä 30 sekunnin ajan normaalilla työmäärällä 0,075 kg * kg-1 paino. Laboratoriossamme suoritetut uusintatestit absoluuttisen huipputehon ja keskitehon luotettavuudesta ovat tuottaneet myös korkeat luotettavuusarvot (r = 0,69 ja R = 0.95, vastaavasti P < 0, 05).
perkutaaniset lihasbiopsiat
lihasbiopsiat otettiin päivinä 0 ja 50 ennen kaikkia voimatestejä, jotta liikunnan aiheuttamat mahdolliset myofibrillaarihäiriöt vältettäisiin . Koehenkilöitä neuvottiin pidättäytymään liikunnasta 48 tuntia ennen jokaista lihasbiopsiaa. Lihas irrotettiin valtaisan jalan polvilumpion ja suoliluun harjanteen puolivälissä olevasta vastuksen lateraaliosasta 5 mm: n koepala-neulalla, johon oli lisätty imua . Lyhyesti 1, 5 ml 1.0% Lidokaiini HCl pistettiin ihon alle ennen pienen pilottiviillon tekemistä. Kaksoispilkulla ja imulla näytteestä poistettiin ensin kaikki näkyvä rasva ja sidekudos ennen kuin se leimahti nestemäiseen typpeen jäätyneenä. Kaikki näytteet säilytettiin tämän jälkeen -80°C: ssa myöhempiin analyyseihin saakka.
Supplementation protocol and dietary monitoring
kaksoissokkoutetusti koehenkilöt nauttivat neljää 250 mg: n kapselia, jotka sisälsivät maissiöljyä lumelääkettä tai AA: ta (X-Factor, Molecular Nutrition, Jupiter, FL) 50 päivän aikana perustason testauksesta. Lisäravinteet valmistettiin kapseleina ja pakattiin geneerisiin pulloihin Molecular Nutrition-menetelmällä. Vaatimustenmukaisuutta seurattiin antamalla tutkittavien palauttaa tyhjiä täydennyspulloja 25 ja 50 päivän kuluttua täydennyksestä. Aiempien ohjeiden mukaisesti ja sen varmistamiseksi, että energian ja proteiinin saanti oli riittävä lihasten liikakasvun helpottamiseksi, kaikkia koehenkilöitä neuvottiin lisäämään kalorien saantia noin 500 kcal·day-1, säilyttäen samalla arvioidun proteiinin saannin 2 g·kg-1·day-1 verrattuna lähtötason ravintoanalyysiin . Koehenkilöille toimitettiin kaupallisesti saatavilla oleva ateriankorvikejauhe (Lean Body, Labrada Nutrition, Houston, TX), joka sisälsi noin 290 kilokaloria, 24 g hiilihydraattia, 45 g proteiinia ja 1 g rasvaa annosta kohti, jotta yllä mainitut Energia-ja proteiinitarpeet saatiin mukautettua. Lähtötason proteiininsaannista riippuen koehenkilöitä kehotettiin nielemään 1-2 pakettia ateriankorviketta aamulla ja / tai välittömästi jokaisen harjoituksen jälkeen . Lisäksi tutkittavia kehotettiin välttämään säännöllistä kulutusta elintarvikkeita tiedetään olevan korkea ω-3 rasvahappoja kuten kalaöljy, pellavansiemenöljy, kylmän veden kala, oliiviöljy, seesamiöljy, maapähkinävoi, N-asetyyli-kysteiini, konjugoitu linolihappo, sekä anti-inflammatoriset lääkkeet kuten parasetamoli, ibuprofeeni, aspiriini ja muut steroideihin kuulumattomat tulehduskipulääkkeet . Ravinnon ja linolihapon saanti (18:2, ω-6), linoleeninen (18:3, ω-3), ja AA saanti seurattiin 4 päivän ruokavalion muistuttaa päivinä 0, 25 ja 50 ja arvioitiin käyttäen Food Processor III Nutrition Software (ESHA Nutrition Research, Salem, tai).
Resistance-training protocol
50 päivän jakson aikana koehenkilöt suorittivat 4 päivää·viikko-1 split-body, linear periodization resistance-training-ohjelman. Ylävartalon hissit sisälsivät penkkipunnerruksen, lat-vedon, hartiaprässin, istuinrivit, olkapään kohautukset, rinta-kärpäset, hauiskiharat ja triceps-alamäet, kun taas alavartalon nostot sisälsivät jalkaprässin, selän ojennuksen, askel ylöspäin, jalkaprässin, jalkaprässin, kantapään korotukset ja vatsan rutistukset kahdesti viikossa. Koehenkilöt suorittivat 3 sarjaa 10 toistoa niin paljon painoa kuin he pystyivät nostamaan per sarja (eli 60-80% 1RM: stä). Lepoajat harjoitusten välillä eivät ylittäneet 3 minuuttia, kun taas loput sarjojen välillä eivät ylittäneet 2 minuuttia. Koulutus suoritettiin yliopiston student life center, dokumentoitu koulutus lokit, ja allekirjoittanut nimetyn henkilöstön jäsenet tarkistaa vaatimustenmukaisuuden ja seurata edistymistä. Tämä protokolla on osoitettu aiemmassa tutkimuksessa edistää merkittäviä voittoja lihasvoimaa, lihasten kestävyyttä, ja rasvaton massa .
seerumi-ja kokoverianalyysejä
seerumi-ja kokoverinäytteitä käytettiin kliinisen turvallisuuden arvioimiseen lisäysprotokollan aikana. Serum samples were assayed for comprehensive metabolic panels including glucose, total protein, blood urea nitrogen (BUN), creatinine, BUN/creatinine ratio, uric acid, aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), creatine kinase (CK), lactate dehydrogenase (LDH), gamma-glutamyl transpeptidase (GGT), albumin, globulin, sodium, chloride, calcium, carbon dioxide, total bilirubin, alkaline phosphatase (ALP), triglycerides, cholesterol, HDL and LDL using a Dade Dimension XL clinical chemistry system (Dade Behring Inc., Newark, DE). Täydelliset verisolumäärät, mukaan lukien punasolumäärät, hemoglobiini, hematokriitti, keskimääräinen solutilavuus, keskimääräinen solumäärä, keskimääräinen solumäärä, keskimääräinen solumäärä, punasolujen jakautumisen leveys, valkosolujen määrät, neutrofiilit, lymfosyytit, monosyytit, eosinofiilit ja basofiilit analysoitiin virtaussytometrialla käyttäen Cell-DYN 1800 (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL). Testitulosten luotettavuus (sisällä ja välillä) oli 2-6 prosenttia yksittäisissä testeissä, joissa keskimääräinen variaatiokerroin (C V ) oli 3,0 prosenttia. Näytteet otettiin kahtena kappaleena tulosten todentamiseksi, jos havaitut arvot olivat kontrollien ulkopuolisia arvoja ja/tai kliinisiä normeja standardimenetelmien mukaisesti.
myöhemmistä seeruminäytteistä määritettiin myöhemmin kortisoli (CORT), vapaa testosteroni (fTEST), kokonaistestosteroni (ttest), interleukiini-6 (IL-6), prostaglandiini E2 (PGE2) ja prostaglandiini F2a (pgf2a). Pgf2a: n, PGE2: n ja IL-6: n (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI) sekä Cortin, ftestin ja ttestin (Diagnostic Systems Laboratories, Webster, TX) seerumipitoisuuksien analysointiin käytettiin commerical enzyme immunoabsorbent-määrityksiä. Näiden YVA-pohjaisten määritysten C V vaihteli välillä 3,0-5,0%.
kokonaisrna-eristäminen
solujen KOKONAISRNA uutettiin biopsianäytteiden homogenaatista Tri-reagenssin sisältämällä monofaasisella fenoli-ja guanidiini-isotiosyanaattiliuoksella (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) . Kunkin näytteen RNA: n kokonaispitoisuudet määritettiin spektrofotometrisesti optisella tiheydellä 260 nm (OD260) ja lopullinen pitoisuus säädettiin 200 ng·µl-1: een laimentamalla raa ’ at kokonaisrna-uutteet DEPC-käsitellyksi nukleaasittomaksi H2o: ksi. Tämän toimenpiteen on osoitettu tuottavan hajoamatonta RNA: ta, jossa ei ole DNA: ta ja proteiineja, kuten huomattavat 28S-ja 18S-ribosomaaliset RNA-ryhmät osoittavat, sekä OD260/OD280-suhteen olevan noin 2, 0 . RNA-näytteitä säilytettiin -80°C: ssa myöhempiin analyyseihin saakka.
Käänteinen transkriptio ja klooninen DNA-synteesi
solun KOKONAISRNA: n standardoidut liuokset transcriptioitiin käänteisesti kloonisen DNA: n (cDNA) syntetisoimiseksi, kuten aiemmin on kuvattu . Lyhyesti sanottuna käänteistä transkriptioreaktioseosta inkuboitiin 42°C: ssa 40 minuutin ajan, kuumennettiin 85°C: seen 5 minuutin ajan ja sitten jäähdytettiin jäällä, jolloin saatiin cDNA-tuote. CDNA-mallipohjan aloituspitoisuudet standardoitiin 200 ng·µl-1: een ennen reaaliaikaista polymeraasiketjureaktiota (RT-PCR) amplifioimalla alkeelliset cDNA-syntetisoidut tuotteet spektrofotometrisesti 260 nm: n aallonpituudella ja laimentamalla ne nukleaasittomassa H2O: ssa. standardoidut cDNA-liuokset jäädytettiin -80°C: ssa, kunnes reaaliaikainen RT-PCR tehtiin.
RT-PCR
Anti-sense-ja sense-oligonukleotidi-pohjustusparit rakennettiin kaupallisesti saatavilla olevilla Beacon Designer-ohjelmistoilla (Bio-Rad, Hercules, CA) Genbankin nukleotiditietokannassa julkaistuista tunnetuista mRNA-sekvensseistä ja kaupallisesti syntetisoitiin (Integrated DNA Technologies, Coralville, IA). Kolmen aikuisen MHC-isoentsyymin (tyyppi I, IIa ja IIx) eristämiseen käytettiin seuraavia 5 ’sense – ja 3′ anti-sense-oligonukleotidialkuperää: tyyppi I MHC mRNA (5′ primer: emäkset 776-796, 3′ primer: emäkset 1398-1378, GenEMBL AC X06976), Tyyppi IIa MHC mRNA (5′ primer): bases 1785-1805, 3′ primer: bases 2440-2420, GenEMBL AC AF111784), Type IIx MHC mRNA (5′ primer: bases 1138-1158, 3’ primer: bases 1746-1726, GenEMBL AC AF111785). Nämä alukkeet vahvistavat 141, 145 ja 148 emäsparin kappaleita vastaavasti tyypin I, IIa, IIx MHC osalta. β-aktiinia käytettiin ulkoisena vertailustandardina mRNA: n määrän suhteellisen muutoksen havaitsemiseen , koska sitä pidetään konstitutiivisesti ilmaistuna kodinhoitogeeninä, nämä β-aktiinialukkeet vahvistavat 135 emäsparin PCR-fragmenttia. Kumpaankin neljään MHC-tyypin I,- IIa ja-IIx sekä β-aktiinin PCR-reaktioon lisättiin kaksisataa ng cDNA: ta. Kukin PCR-reaktio sisälsi seuraavat seokset: 2 µl cDNA-mallia lisättiin 12,5 µl 2× SYBR-vihreää Supermixiä (Bio-Rad, Hercules, CA) , 1,5 µl sense-ja anti-sense-alukkeita ja 7,5 µl nukleaasitonta dH2O: ta]. Jokainen PCR-reaktio vahvistettiin lämpösyklillä (Bio Rad, Hercules, CA) ja vahvistussekvenssiin kuului denaturointivaihe 95°C: ssa 30 sekunnin ajan, primer-hehkutus 55°C: ssa 30 sekunnin ajan ja laajennus 72°C: ssa 60 sekunnin ajan . RT-PCR tehtiin 40 syklin aikana, ja SYBR-vihreän fluoroforin emittoima fluoresenssi mitattiin jokaisen syklin jälkeen. Fluoresenssipäästö johtuu SYBR Greenin integroitumisesta PCR-reaktion aikana syntyneeseen kaksijuosteiseen cDNA: han. Kaikki CT-arvot arvioitiin monistamisen lineaarisessa osassa ja monistamisen jälkeen tehtiin DNA: n sulamiskäyräanalyysi sen varmistamiseksi, että yksittäiset geenituotteet monistuivat ilman primer-dimeerejä. Kaiken mRNA: n kvantifiointi ilmaistiin suhteessa β-aktiinin ilmentymiseen. TT – arvojen suhdelukujen vertailussa verrattiin basaaligeenin ilmentymisen muutoksia AA-ja PLA-ryhmien välillä. Agaroosigeelielektroforeesi, jossa käytettiin 25 µl: n alikiintiöitä viimeistellyistä PCR-reaktioseoksista, suoritettiin 1.5% agaroosigeelit, joissa käytetään 1× Tris-boorihappo-EDTA (TBE)-puskuria ja jotka on valaistu UV-transilluminaattorilla (Chemi-Doc XRS, Bio-Rad, Hercules, CA) mRNA-kohteen positiivisen vahvistuksen varmistamiseksi (tietoja ei näy) . MHC I: n C V oli vastaavasti 2,06%, IIA: n 3,18% ja IIx: n 2,73%.
kokonaislihasproteiinimääritys
kokonaisproteiinimäärä, joka oli jäljellä kokonaisrna-eristysmenetelmästä, eristettiin isopropanolilla, etanolilla ja 0, 3 M guanidiinihydrokloridilla. Myofibrillaariproteiinia eristettiin 0: lla.1% natriumdodekyylisulfaattia (SDS), ennen kuin proteiinipitoisuus on määritetty spektrofotometrisesti käyttäen Bradfordin määritystä aallonpituudella 595 nm. Standardikäyrä luotiin käyttämällä (r2 = 0, 98, p < 0, 001) naudan seerumialbumiinia standardina ja suhteutettuna lihaksen märkäpainoon . Tämän jälkeen kukin proteiininäyte laimennettiin 50 µg: aan proteiinia 30 µl: aa SDS-puskuria kohti myöhempää immunoblottausta varten. Myofibrillaariproteiinin CV oli 2,03% .
MHC-proteiinin isoformimääritys
MHC-proteiinin isoformien koostumus kussakin lihashomogenaattinäytteessä määritettiin automatisoidulla SDS-sivulla Experion Pro260-sirujen (Bio-Rad, Hercules, CA) avulla. Noin 6 µl alikiintiöitä kustakin näytteestä pipetoitiin kuhunkin näytekuoppaan mikrosirulla. Jokainen tuntematon näyte valmistettiin 4 µl kunkin koehenkilön proteiinilaimennoksesta (tai 4 µl molekyylipainotikkaista), 2 µl näytepuskuria β-merkaptoetanolilla ja 84 µl de-ionisoitua vettä. Gazithin ja kollegoiden havaintojen perusteella kaikkien kolmen MHC-isoentsyymin odotettiin vaeltavan 200-210 kilodaultonin alueella polyakryyliamidigeelin sisällä suhteessa molekyylipainoportaisiin. Geelit visualisoitiin digitaalisesti Experion-ohjelmistolla (Bio-Rad, Hercules, CA) ja MHC-pitoisuudet kussakin näytteessä arvioitiin vertaamalla kunkin MHC-isoformin mielivaltaista tiheyttä molekyylipainomarkkereiden mielivaltaisiin tiheyksiin, joiden pitoisuudet tunnetaan. Proteiiniryhmien C V ≥10 kD oli ≤1, 1%.
proteiini-immunoblottaus
pgf2a (FP)-ja PGE2 (EP3)-reseptorimääritys suoritettiin huoneenlämmössä uuttamalla kokonaislihasproteiini homogenaatista ja 50 µg kokonaisproteiinia slot-blottaamalla nitroselluloosakalvoille käyttäen Bio-Dot-proteiiniblottausjärjestelmää (Bio-Rad, Hercules, CA). Blokattuja kalvoja inkuboitiin blokkiliuoksella 1 tunti orbital rockerissa, dekantoitiin ja kalvoja inkuboitiin TTBS-pesuliuoksella 5 minuuttia yhteensä kolmen pesun ajan. Kalvoja inkuboitiin spesifisillä anti-FP-reseptoreilla ja anti-EP3-reseptoripolyklonaalisilla vasta-aineilla (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI), laimennettuna 4 µg·ml-1: een, 1-2 tunnin ajan orbitaalirokkarilla. Primaariset vasta-aineliuokset dekantoitiin ja kalvot pestiin ttbs-liuoksella 5 minuutin ajan orbital rockerissa yhteensä kolmen pesun ajan. TTBS-pesuliuos dekantoitiin ja kalvoja inkuboitiin sekundäärisellä biotinyloidulla vuohien vastakaniini-vasta-aineliuoksella (Bio-Rad, Hercules, CA) 1 tunnin ajan orbital rockerissa. Sekundaaribiotinyloitu vuohen anti-kani-vasta-aineliuos dekantoitiin ja kalvoja inkuboitiin TTBS-pesuliuoksessa yhteensä kolme pesua 5 minuutin välein. Kalvoja inkuboitiin streptavidiini-biotinyloidulla alkalisella fosfataasikompleksiliuoksella (Bio-Rad, Hercules, CA) 1 tunnin ajan orbital rockerissa. Lopuksi streptavidiini-biotinyloitu alkalinen fosfataasikompleksiliuos dekantoitiin ja kalvot pestiin kolme kertaa ttbs-liuoksella 5 minuutin kuluttua pesua kohti orbitaalivahvistimessa. Värikehitysratkaisu, joka sisältää bcip/NBT (Bio-Rad, Hercules, CA) lisättiin ja värikehitystä seurattiin 30-60 minuutin ajan. Värikehitys pysäytettiin inkuboimalla kalvoa tuplatislatussa H2O: ssa 10 minuutin ajan orbitaalirokkarilla. Solukalvot digitoitiin densitometrian avulla käyttäen Chemi-Doc XRS-kuvantamisjärjestelmää (Bio-Rad, Hercules, CA) ja kaistatiheys ilmaistiin integroiduissa tiheysyksiköissä suhteessa lihasten painoon.
tilastollinen analyysi
tilastolliset analyysit tehtiin käyttäen SPSS: ää (versio 14.0, SPSS Inc., Chicago, IL). Kokoveri -, seerumi -, suorituskyky-ja kehonkoostumusmuuttujat analysoitiin käyttäen 2 × 3 (ryhmä × testaussessio) varianssianalyysiä (ANOVA) toistuvilla toimenpiteillä univariate-testeillä. MHC-proteiinin, FP: n ja EP3-reseptorin proteiinitasot analysoitiin erillisellä 2 × 2 (ryhmä × testaussessio) ANOVA-menetelmällä toistuvilla toimenpiteillä. Lisäksi, jos ryhmällä oli merkittävä päävaikutus, kullekin ryhmälle tehtiin yksisuuntaisia Anovia, joilla toistettiin testisessioita testien välisten erojen arvioimiseksi. Riippumattomia t-testejä käytettiin MHC mRNA-lausekkeen muutosten analysointiin 50 päivän täydennyksen jälkeen. Raakapisteanalyysin lisäksi tehtiin Delta-pisteanalyysi (eli päivän 0 arvot, jotka on vähennetty päivistä 25 ja/tai 50) muuttujille, joissa esiintyi ylimääräisiä vaihteluja ryhmien välillä päivänä 0. Kuten raw-pisteissä mainittiin, 2 × 3 (ryhmä × testaussessio) varianssin (ANOVA) analysointia toistuvilla mittauksilla univariate-testeillä käytettiin analysoimaan Delta-pisteitä kehonkoostumukselle, suorituskykymuuttujille ja hormonipitoisuuksille, kun taas 2 × 2 toistuvaa mittausta ANOVA käytettiin analysoimaan kaikki lihaksensisäiset Delta-pisteet. Tilanteissa, joissa ryhmien sisällä ei voitu olettaa olevan yhtä suuria variansseja, käytettiin Hunyhs-Feldt epsilon-korjauskerrointa sopeutumaan ryhmän F-suhdelukuihin. Olosuhteissa, joissa tilastolliset kehityssuuntaukset näyttivät olevan olemassa (eli P = 0,05-0.10), vaikutuskoot raportoitiin myös osittaisena Eta-neliönä (np2). Osittaisten Eta: n potenssiin määritettyjen efektikokojen määritettiin olevan heikkoja (NP2 ≤ 0, 01), keskikokoisia (np2 = 0, 06), vahvoja = (np2 = 0, 14) kuten aiemmin on kuvattu . Merkitsevyys kaikille tilastollisille analyyseille määritettiin alfatasolla 0,05. On huomattava, että suunnittelun priori-tehoanalyysi osoitti, että n-koko 15 osallistujaa hoitoa kohti tuottaisi suuren tehon (> 0,8), kun kriteerinä on muuttuva delta-arvo 0,75-1,25. On myös huomattava, että post hoc-poikkeamien analysointi laatikkoaloilla tehtiin olosuhteissa, joissa esiintyi merkittäviä ryhmä × aika-vuorovaikutuksia sen varmistamiseksi, että poikkeamia ei ollut. Kaikki tiedot ilmoitetaan keskiarvona ± keskihajonta (SD).