La polimerasa de ADN Taq, aislada de Thermus aquaticus, es una polimerasa de ADN termoestable que cataliza la incorporación dependiente de cebador de nucleótidos en ADN dúplex en la dirección 5’→3′ en presencia de Mg2+. Es la polimerasa de ADN termoestable estándar utilizada en aplicaciones de PCR. Taq no posee actividad de exonucleasa de 3 ‘→5 ‘pero tiene actividad de exonucleasa de 5 ‘→3’. La polimerasa Taq es adecuada para la mayoría de las aplicaciones de PCR que no requieren una enzima de alta fidelidad, como la detección de secuencias específicas de ADN o ARN.
Una reacción en cadena de polimerasa (PCR) típica incluye ADN diana, una polimerasa de ADN termoestable como la polimerasa Taq, dos cebadores de oligonucleótidos, dNTPs, tampón de reacción y magnesio. Una vez ensamblada, la reacción se coloca en un termociclador, que somete la reacción a ciclos recurrentes de cambios de temperatura durante los cuales el ADN se desnaturaliza, los cebadores se recubren al objetivo y son extendidos por la polimerasa para crear una copia de la cadena de ADN. Cada ciclo de PCR duplica teóricamente la cantidad de secuencia objetivo en la reacción hasta que los componentes de la reacción se vuelven limitantes o se consumen.
En la PCR del punto final, el análisis se produce después de que se completen todos los ciclos de PCR y la reacción de amplificación haya alcanzado una meseta (o punto final). Esto contrasta con qPCR en tiempo real, donde la formación de productos de PCR se supervisa en tiempo real a medida que se produce la reacción de amplificación. La PCR de punto final es un método cualitativo. Es ampliamente utilizado para muchos propósitos, incluida la determinación de la presencia o ausencia de una secuencia de ADN específica en una muestra objetivo, la detección de patógenos, la amplificación de secuencias objetivo para un análisis posterior y la detección de secuencias de ADN específicas para identificar individuos o tipos de células.
Las mezclas maestras de PCR contienen todos los componentes de reacción para PCR, incluyendo polimerasa Taq, dNTPs y tampón optimizado. Las mezclas maestras simplifican la configuración experimental y ahorran tiempo, ya que el usuario simplemente necesita agregar plantillas y cebadores a la reacción.