Die aus Thermus aquaticus isolierte Taq-DNA-Polymerase ist eine thermostabile DNA-Polymerase, die den primerabhängigen Einbau von Nukleotiden in Duplex-DNA in 5’→3′-Richtung in Gegenwart von Mg2 + katalysiert. Es ist die standardmäßige thermostabile DNA-Polymerase, die in PCR-Anwendungen verwendet wird. Taq besitzt keine 3’→5′ Exonuklease-Aktivität, sondern 5’→3′ Exonuklease-Aktivität. Die Taq-Polymerase eignet sich für die meisten PCR-Anwendungen, für die kein High-Fidelity-Enzym erforderlich ist, z. B. zum Nachweis spezifischer DNA- oder RNA-Sequenzen.
Eine typische Polymerase-Kettenreaktion (PCR) umfasst Ziel-DNA, eine thermostabile DNA-Polymerase wie Taq-Polymerase, zwei Oligonukleotid-Primer, dNTPs, Reaktionspuffer und Magnesium. Nach dem Zusammenbau wird die Reaktion in einen Thermocycler gegeben, der die Reaktion wiederkehrenden Zyklen von Temperaturänderungen unterwirft, in denen die DNA denaturiert wird, Primer zum Ziel tempern und von der Polymerase verlängert werden, um eine Kopie des DNA-Strangs zu erzeugen. Jeder PCR-Zyklus verdoppelt theoretisch die Menge der Zielsequenz in der Reaktion, bis die Reaktionskomponenten limitierend werden oder verbraucht werden.
Bei der Endpunkt-PCR erfolgt die Analyse, nachdem alle PCR-Zyklen abgeschlossen sind und die Amplifikationsreaktion ein Plateau (oder einen Endpunkt) erreicht hat. Dies steht im Gegensatz zur Echtzeit-qPCR, bei der die PCR-Produktbildung während der Amplifikationsreaktion in Echtzeit überwacht wird. Die Endpunkt-PCR ist eine qualitative Methode. Es wird häufig für viele Zwecke verwendet, einschließlich der Bestimmung der Anwesenheit oder Abwesenheit einer spezifischen DNA-Sequenz in einer Zielprobe, des Nachweises von Krankheitserregern, der Amplifikation von Zielsequenzen für die weitere Analyse und des Nachweises spezifischer DNA-Sequenzen, um Individuen oder Zelltypen zu identifizieren.
PCR-Mastermixe enthalten alle Reaktionskomponenten für die PCR, einschließlich Taq-Polymerase, dNTPs und optimiertem Puffer. Mastermischungen vereinfachen den Versuchsaufbau und sparen Zeit, da der Anwender der Reaktion lediglich Template und Primer hinzufügen muss.