Taq-DNA-polymeras, isolerat från Thermus aquaticus, är ett termostabilt DNA-polymeras som katalyserar den primerberoende inkorporeringen av nukleotider i duplex-DNA i riktningen 5’tubi 3′ i närvaro av Mg2+. Det är standard termostabil DNA-polymeras som används i PCR-applikationer. Taq har inte exonukleasaktivitet på 3’5′, men har exonukleasaktivitet på 5 ’3’. Taq-polymeras är lämpligt för de flesta PCR-applikationer som inte kräver ett HiFi-enzym, såsom detektering av specifika DNA-eller RNA-sekvenser.
en typisk polymeraskedjereaktion (PCR) innefattar mål-DNA, ett termostabilt DNA-polymeras såsom Taq-polymeras, två oligonukleotidprimrar, dNTPs, reaktionsbuffert och magnesium. En gång monterad placeras reaktionen i en termisk cykler, som utsätter reaktionen för återkommande cykler av temperaturförändringar under vilka DNA denatureras, primers glödgas till målet och förlängs av polymeraset för att skapa en kopia av DNA-strängen. Varje PCR-cykel fördubblar teoretiskt mängden målinriktad sekvens i reaktionen tills reaktionskomponenterna blir begränsande eller konsumeras.
i endpoint PCR sker analys efter att alla PCR-cykler har slutförts och förstärkningsreaktionen har nått en platå (eller slutpunkt). Detta står i kontrast till qPCR i realtid, där PCR – produktbildning övervakas i realtid när förstärkningsreaktionen inträffar. Endpoint PCR är en kvalitativ metod. Det används ofta för många ändamål, inklusive bestämning av närvaron eller frånvaron av en specifik DNA-sekvens i ett målprov, detektering av patogener, förstärkning av målsekvenser för vidare analys och detektering av specifika DNA-sekvenser för att identifiera individer eller celltyper.
PCR-Masterblandningar innehåller alla reaktionskomponenter för PCR, inklusive Taq-polymeras, dNTPs och optimerad buffert. Master mixar förenkla experimentell installation och spara tid, eftersom användaren helt enkelt behöver lägga till Mall och primers till reaktionen.