Strukturell biokemi/enzym/Dubbel-ömsesidig plot: Lineweaver Burk plote

Lineweaver-Burke plot

den dubbla ömsesidiga ekvationen erhålls genom att ta det ömsesidiga av båda sidor av Michaelis-Menten ekvationen. Den dubbla ömsesidiga (även känd som Lineweaver-Burk) plot skapas genom att plotta den inversa initialhastigheten (1/V0) som en funktion av den inversa av substratkoncentrationen (1/). Vmax kan bestämmas exakt och därmed kan KM också bestämmas med noggrannhet eftersom en rak linje bildas. Lutningen på den resulterande linjen är KM/Vmax, y-avlyssningen är 1/Vmax och x-avlyssningen är -1 / KM. Med hjälp av Michaelis-Menten-ekvationen är Vmax en asymptot och kan således endast approximeras och som ett resultat kan KM, som är Vmax/2, inte bestämmas exakt. Denna plot är ett användbart sätt att bestämma olika hämmare såsom konkurrenskraftiga, okompetitiva och icke-konkurrenskraftiga.

Competitive Inhibitor

för konkurrerande hämmare konkurrerar inhibitorn med substratmolekylen för att binda till bindningsstället. Följaktligen kommer KM att öka utan att ändra Vmax-värdet. Detta innebär att de två graferna kommer att ha samma y-intercept som visas nedan. Men den nya x-intercept kan vara ganska svårfångad. För denna typ av hämmare behövs en högre koncentration av substratet för att få hälften av de aktiva platserna upptagna. Därför kommer KM2 att vara större än KM1. Detta översätts till ett högre ömsesidigt värde på KM1 än för KM2. X-interceptet har emellertid det negativa tecknet framför det, så på grafen måste det flytta till höger i förhållande till föregående avlyssning. För att visa detta på den dubbla ömsesidiga tomten kommer lutningen att öka för att visa styrkan hos den bindande konkurrenshämmaren. Medan lutningen ökar med närvaron av inhibitorn förblir y-avlyssningen densamma i närvaro och frånvaro av inhibitorn.

för okompetitiva hämmare kommer inhibitorn endast att binda till ett enzym-substratkomplex; därför konkurrerar den inte med substratet för bindningsstället. Följaktligen minskar både KM-och Vmax-värdena. Följaktligen bör det ömsesidiga värdet av den nya Vmax vara i en högre position på axeln, eftersom en fraktion blir större när nämnaren blir mindre. Det nya ömsesidiga värdet på KM kommer att flyttas till vänster och förklaringen bör likna den för konkurrenshämmare. För att visa detta på en dubbel ömsesidig tomt, kommer lutningen att förbli densamma som om enzymet inte var bundet till hämmaren, men X-axelns avlyssning kommer att minska. Den dubbla ömsesidiga tomten för enzym med och utan okompetitiv hämmare kommer att vara två parallella linjer.

för icke-konkurrerande hämmare kan hämmaren binda till enzymet innan substratet kan binda till bindningsstället. Det behöver inte vänta på att enzymet blir ett enzym-substratkomplex för att binda till enzymet. Hämningen kommer att orsaka en minskning av Vmax-värdet medan KM inte påverkas. Detta innebär att värdet på -1 / KM förblir detsamma för de två linjerna, medan det nya värdet på 1/Vmax är högre i förhållande till det föregående. För att visa detta på en dubbel ömsesidig tomt kommer minskningen av Vmax att öka y-avlyssningen med en större sluttning.

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras. Obligatoriska fält är märkta *