experimentell och terapeutisk medicin

introduktion

ett REALTIDSCELLÖVERVAKNINGSANALYSSYSTEM (RTCA) utvecklades tidigare för kontinuerlig övervakning av vidhäftande cellkulturer (1). Denna etikettfria ochicke-invasiv metod är baserad på mätning av den elektriskaimpedans (cellindex, CI) mellan interdigiterade regioner på basen av vävnadsodlingsplattor. CI-mätningen gerkvantitativ information om vidhäftarens biologiska statusceller. Egentligen är betydelsen av CI antalet överlevnadscellerpå ytan av E-plattan. Dessa data inkluderar cellnummer, livskraft och morfologi som en realtidsprofil (2-4). RTCAsystem är känt för tidig detektionsanordning av cellreaktion som adynamisk fenotyp mot vissa reagenser (5).

i vår tidigare studie bedömdes imatinibcytotoxicitet i oralsquamous cell carcinoma (OSCC) med användning av WST-8(5– 3-(2- metoxi – 4-nitrofenyl)- 2-(4-nitrofenyl)-2h – tetrazol – 3 – ium) analys som anendpunktsmätning (6) och sedansenare med ett RTCA-system (7).Slutpunktsmätningar med MTT (3–2,5-difenyltetrazoliumbromid) och WST-8-analyser används vanligtvis för att utvärdera cytotoxicitet. Sådana analyser begränsas emellertid av variationer i effekterna av olika anticancermedelpå olika cellinjer. Dessutom tenderar IC50-värden som beräknas genom in vitro-endpoint-analyser att vara högre än de effektiva koncentrationerna in vivo (8,9).

i vår tidigare studie var IC50-värdena som mättes av RTCA-systemet lägre än de som mättes medwst-8-analys, vilket tyder på att RTCA-systemet kan känsligt utvärdera cytotoxicitet och påverkan av imatinib på celladhesion. Det är emellertid oklart huruvida utvärdering avic50-värden för andra anticancermedel som använder Rtcasystemet skulle vara användbart eftersom det finns skillnader i cytotoxikreaktioner mellan molekylära riktade läkemedel såsom imatinib ochanticancermedel över tiden.

i denna studie måste vi välja någon typ avcelllinjer för att bestämma skillnaden i cellreaktionsprofil mot cancerreagenser i realtid med RTCA-systemet.Icke-invasiv SQUU-en cellinje och invasiv SQUU-B cellinje som etablerades från lokala återkommande tungcancer tumörer i asingle patient, valdes eftersom vi var engagerade i forskningpå metastas av SQUU-B cellinje med SQUU-a cellinje och SQUU-Bcell-linje (10-12). SAS cellinje etablerades fråndåligt differentierat humant skivepitelcancer i tungan (13). NA – cellinjen etableradessom en fibronektinproducerande cellinje (14). Vidare har det rapporterats att cytotoxiciteten hos anti-cancerreagenser i OSCC har utvärderats i SQUU-a cellinje och SQUU-B cellinje (15), SAS cellinje (16), NA cellinje (17) med hjälp av olika konventionella metoder.Därför valde vi fyra dessa cellinjer med varjekarakteristisk egenskap i den aktuella studien, som också användes i cytotoxisk analys i tidigare studie.

i denna studie fokuserade vi på en ny RTCA-enhet utvecklad för realtidsmätning och utvärderade theIC50-värden som en skala för att bedöma cytotoxiciteten avfyra anticancermedel mot i fyra OSCC-cellinjer. Detta gav oss möjlighet att få information om de variationer som observerats mellan de olika anticancerreagenser och cellinjer i realtid.

syftet med denna studie var att erhålla 50 profiler från omedelbart efter tillsats av anticancermedel med användning av ett RTCA-system. Denna studie visade fördelen med att utvärdera cytotoxiciteten hos anticancermedel med hjälp av ett RTCA-system jämfört med en endpoint-analys.

material och metoder

reagenser och material

5-Fluorouracil (5-FU) späddes till 100 mM indimetylsulfoxid (DMSO; Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, MO, USA).Doxifluridin och karboplatin späddes till 100 respektive 50 mM i destillerat vatten. Docetaxel späddes till 10 mM inetanol. Alla anticancerreagenser hämtades från Wako PureChemical Industries, Ltd., (Osaka, Japan) och lagras vid -20 C.

cellkultur

mänskliga OSCC-cellinjer SQUU-A, SQUU-B, SAS och NAwere härledda från mänskliga tungprover. SQUU-A och SQUU-B, tillhandahölls av morifuji-Wilson M (Kumamoto University,Kumamoto, Japan), grundades från lokala återkommande tonguecancer tumörer (18). SAS (13,19,20) varinköpt från riken BRC Cellbank (Tsukuba, Japan). NA (14) tillhandahölls vänligt av Dr.Jun-ichi Iwata (Kyushu University; Fukuoka, Japan). Alla cellraderhölls i Dulbeccos modifierade Örns medium (DMEM;Nacalai Tesque, Inc., Kyoto, Japan) innehållande 10% fetalt kalvserum (Biowest, Nuaille, Frankrike) vid 37 C i en fuktad atmosfär med5% CO2.

mätning av OSCC – cellproliferationgenom RTCA – cytotoxicitetsanalysen

ci förvärvades av Icelligence-systemet (ACEABiosciences, Inc., San Diego, CA, USA) som RTCA-systemet. Allmonitoring utfördes vid 37 CCC med reglerat CO2-innehåll (5%). E-plattor (odlingsplattor för iCELLigence-systemet)innehållande 200 CCL odlingsmedium per brunn jämvikts till 37 ccoch CI sattes till noll under dessa förhållanden. Celler (2 104 celler/brunnceller om inte annat anges) tillsattes i 560 odlingsmedium för odlingsmedium anticancermedel tillsattes vid 24 timmar efter sådd av cellerna. CI övervakades i realtid för 96 timmar eftercellsådd. IC50-värdena beräknades av RTCAData analysprogramvara version 1.0 (ACEA Biosciences, Inc.).

åtta poäng koncentration av fyra anticancerreagenter fastställdes baserat på Cmax-värden i tidigare studie(21-25). Dessutom fastställdes tidpunkterunder 72 timmar inklusive 24 timmar och 48 timmar, vilka var allmän metod för att utvärdera cytotoxicitet i slutpunktsanalys.

kurvanpassning av IC50data

vi använde följande sigmoidal dos-responseformula för att beräkna IC50-värdena: Y=låg CI + (HighCI-låg CI)/{1+10 ^ (Log IC50-X)}, där ’låg CI ’representerar minsta CI-värden,’ hög CI ’ representerar maximumcell-indexvärdena, Y är cellindexet och X är log ofconcentration (M).

mätning av OSCC – cellproliferationgenom WST-8-analysen

Efter den initiala sådd och odling av OSCC-celler avlägsnades odlingsmediet och ersattes med anticanceragentinnehållande medium. Efter 24, 48 och 72 h inkubation tillsattes 20 UCL WST-8 färgämne (Cell Counting Kit-8; Dojindo Corporation, Tokyo, Japan) till varje brunn. Efter 3 h lästes plattorna vid450 nm / 655 nm. Cellöverlevnadsgraden beräknades med användning avformeln nedan (7). IC50-värden beräknades genom linjär approximationsregression av procentuell överlevnad jämfört med läkemedelskoncentrationen.

cellöverlevnadsgrad (%) =(a-c)/(b-c) 100(a=absorbans vid varje koncentration av anticancerreagensen,b=absorbans vid 0 CGM av anticancerreagensen och c=absorbans av ämnet).

statistisk analys

Alla data visas som medelvärdet för standardavvikelse för tre oberoende experiment. Korrelationer mellanic50-värden erhållna med RTCA-systemet och WST-8assay utvärderades för statistisk signifikans av Spjutmantestet. Tvåstjärtade värden på P<0,05 ansågs tilldela.

resultat

effekt av cancerläkemedelskoncentrationen på OSCC – cellproliferation med hjälp av RTCA-systemet

vi utvärderade cytotoxiciteten hos fyra anticancerreagenter (5-FU, doxifluridin, karboplatin och docetaxel) i fourOSCC-cellinjer genom att övervaka CI-värdena i 96 timmar efter att cellerna såddes vid 2 104 celler / brunn på E-plattor(Fig. 1–4). CI-värdena minskade på ados-beroende sätt i alla fyra OSCC – cellinjerna. Därför, reduktion i CI-värden korrelerade med minskningen i cell number.As visas i Fig. 2, CI-värdet förinvasiv SQUU – B-cellinje var lägre än för andra OSCC cells.As visas i Fig. 3, CI-profil erhållen för SAS cellinje visade fördröjd ökning efter 48 h. Asshown i Fig. 4, hastigheten för spridning och max CI-värde i NA-cellinjen var högre än enav andra cellinjer.

realtidsmätning av deic50-profilerna av anticancermedel i OSCC-celler med hjälp av RTCA-systemet

IC50-profilerna för de fyra anticancerreagenterna i de fyra OSCC-cellinjerna bestämdes av Rtcasystemet och beräknades av den kommersiella programvaran som tillhandahölls med instrumentet (en delmängd av SQUU-B-data visas i Fig. 5). IC50-värdena varplanterad i 72 h efter tillsats av cancer mot cancer. Deic50 värden vid 24, 48 och 72 h för alla fyra cellrader sammanfattas i tabeller i–IV. som visas i Fig. 5, det var tidsfördröjning i cytotoxikreaktioner av 5-FU (Fig. 5A) anddocetaxel (Fig. 5D), and recovery ofcell proliferation was observed at about 24 h after treatments.However, cytotoxic reactions were observed immediately aftertreatment with anticancer agents such as doxifluridine (Fig. 5B) and carboplatin (Fig. 5C).

Dose-response curves in SQUU-B cell line using RTCAsystem were shown in supplemental materials (Figs. S1–S4) in order to show how to conversion thedata of Fig. 2 into Fig. 5. Medan cellviabilitetskurvor avsquu-B med användning av WST-8-analys visades också i kompletterande material (fikon. S5-S8). R2-värden vid 72 timmar efter tillsats av anticancerreagenser i WST-8-analysen var låga i fyraanticancerreagenser jämfört med en av 24 timmar och 48 timmar. resultaten visade att det är önskvärt att slutpunktsanalys utfördes vid 24 timmar eller 48 timmar för att användas som ett allmänt protokoll. I denna studie visades cellviabilitetskurvorna för WST-8-analysen isupplementala material eftersom det inte fanns någon nyhet i hur man beräknar IC50-värden med hjälp av WST-8-analys.

korrelationer mellan realtidsmätningar av IC50-värden med hjälp av RTCA-systemet ochändpunktsmätningar av IC50-värden med hjälp av WST-8-analysen i OSCC-celler

som visas i Fig. 6, IC50-värden vid 24, 48 och 72 h med två metoder varplanterade. Den horisontella axeln visar IC50-värden i realtid som mäts med RTCA-systemet, medan längdaxeln visar IC50-värden som mäts med WST-8-analysen. Apositiv korrelation observerades mellan de två typerna av analysmetod för att mäta IC50 för varje anticancermedel.Resultaten av 5-FU, doxifluridin, karboplatin och docetaxcelvar y=8,19 x+346,02 (R2=0,94, rs=0,66, *P<0,05), y=1,00 x+172,70(R2=0,91, rs=0,82, **P<0,01), y=1,90 x+206,81 (R2=0,92,rs=0,96, **p<0,01), Andy=13,53 x+0,08 (R2=0,95, rs=0,73, *p<0,05), respektive. Real-timeIC50-värdena tenderade att vara lägre än motsvarande IC50-värden.

diskussion

CI-värden beräknade av RTCA representerar också cellstatus (3). Skitstövel i fikon. 1-5, SD-värden för CI-värden var för små Tose. Till exempel alla SD-värden i Fig.1 var under 0,05. Orsaken till låga CI-värden för SQUU-B varföreslog att vidhäftningsproteinet E-cadherin spelar en väsentlig roll i metastas, med reducerade nivåer av E-cadherin som främjar cellmigration och cellinvasion (26). Orsaken till höga max CI-värden ofNA föreslogs att det har rapporterats att fibronektinaccelererad cellproliferation och vidhäftning på grund av funktionen ofNA cellinje som en fibronektin producerande cellinje (6). Således cellreaktioner av varje cellinjermot fyra anticancerreagenser var varierande. Vi kunde inte hitta orsakssambandet mellan IC50-värden och funktionen av cellinjer i denna studie. Det är emellertid viktigt att upptäcka en cellreaktion i realtid som en CI-profil för att utvärdera cytotoxiciteten hos anticancerreagens när man överväger farmaceutisk applicering på människa.

IC50-profilen för SQUU-B – cellinjen beskrevs i Fig. 5 som ärpresentativ IC50-profil eftersom det inte fanns några skillnader i IC50-profilmönster i samma cellinje incase av samma reagens, även om vi beräknade IC50-värden i alla cellinjer med fyra anticancerreagenser. Vi fann att theIC50-profilerna varierade för varje cancer mot cancer och ineach OSCC-cellinje. Som visas i Fig.5, 5-FU och docetaxel krävde mer än 24 timmar (48 timmar i figuren) för att börja utöva en cytotoxisk effekt på OSCC-cellerna,medan IC50-värdena hade återhämtat sig från cirka 24 timmar(48 timmar i figuren) efter tillsats av doxifluridin ochkarboplatin. Således föreslog vi att skillnaderna i realtidic50-profiler orsakades av anticancerreagens. Sådana observationer skulle inte ha varit möjliga utan realtidsmätning med RTCA. Realtidsövervakning av theIC50-värdena visade också att dessa värden ändrades markant över tiden. Det finns möjlighet att inte detekteraförändringar med konventionella metoder, eftersom endast en tidpunkt för IC50 efter behandling med anticancermedlet utvärderas genom en endpoint-analys.

RTCA-systemet är till skillnad från traditionella slutpunktsanalyser eftersom mätningen av impedans är icke-invasiv och kan tillhandahålla högkvalitativa, kvantitativa data om cytotoxicitet på ettkontinuerligt sätt. Som visas i Fig.6, Det fanns signifikanta positiva korrelationer mellanic50-värden erhållna med RTCA-systemet och WST-8-analys, även om det fanns vissa skillnader i absoluta värdeav CI, såsom låga CI-värden erhållna för SQUU-B-cellinjen. Dessa resultat föreslog att även en låg CI erhållen för vissa cellinjerskulle kunna utvärdera cytotoxiciteten hög känslighet i Rtcasystemet. Medan IC50-värdena i realtid var lägre änendpoint IC50-värden när IC50-värdena i realtid som erhölls med RTCA-systemet jämfördes med Endpoint IC50-värden som erhölls med WST-8-analysen.Dessa resultat tyder på att RTCA-systemet kan användas tillsensitivt utvärdera effekten av cancer mot cellproliferation och vidhäftning.

i RTCA-systemet fungerar vidhäftande cell som en isolator påelektrodens yta och ändrar det joniska mediet avelektrodlösning, vilket ökar impedansen (27). CI är således cellens funktionantal och förhållande av celler vid olika tidsintervaller. CI = 0 närdet finns ingen celladhesion (5). CIchanges som beskrivs av RTCA-systemet reflekteras dynamisk fenotyp ofcell. Dessa dynamiska övervakning av cell-läkemedelsinteraktion gör det möjligt för ossför att få en bättre förståelse för temporala effekter invitro, särskilt omedelbart efter behandling med läkemedel(28). Den kinetiska egenskapen hos thecells erbjuder insiktsfull information som inte kan förvärvas från enkonventionell enda slutpunktsanalys som WST-8-analys. Medan resultaten av WST-8-analys återspeglas metabolisk reaktion av survivalcell (29). Toxicitet med användning av WST-8-analys kan underskattas om cellmetabolisk reaktion återfanns även om dynamisk cellreaktion inträffade. Vi föreslog att dessa skillnader i princip i två metoder inducerades ahuge skillnader i IC50-värde upp till 8 gånger mellan twomethods som visas i Fig. 6a. Ourtidigare studie rapporterade att IC50 av imatinib i SQUU-Acells beräknat med RTCA-system och WST-8-analys var 4 respektive 60 respektive 60 (känslighet 15 gånger) (6,7). Andra forskningsgrupper rapporterade att IC50 av cisplatin i HK-2cells beräknade med RTCA-system och WST-8-analys var 0,76 cdr respektive 25 cdr (känslighet 33 gånger) (30,31).Dessa tidigare data stödde våra data för att visa giltighet.

det är viktigt att få mätningar frånomedelbart efter behandling med cancer mot cancer för att bedöma bådabiverkningarna av agenterna och dess önskade effekter. Det finns dock få rapporter om användbara metoder som korrelerar invitro-data med mänskliga in vivo-data. Vi ansåg detrealtidsmätning med RTCA-systemet skulle gynnautvärdering av biverkningarna av cancer mot cancer i normalceller.

tidigare rapporterade Cmax-värden på 5-FU, doxifluridin, karboplatin och docetaxel är 60 (21), 40-800 (22), 40 (23), och 2 kg (24,25), respektive, när den används för intravenös behandling hos människor. Vårdata korrelerade med humana data eftersom Cmax-värdena inkluderades i intervallet för de experimentella doserna som användes i denna studie.

RTCA-system är den nya huvudanordningen för att utvärdera cytotoxicitet, som använder impedansintensiteten hos celladhesion och inte enzymaktivitet i målceller såsom MTT-analysen. IC50-värden av anticancermedel beräknade av RTCA-systemet var signifikant korrelerade med IC50-nivåer beräknade med den konventionella endpointanalysen. Vidare erhöll RTCA-systemet mätningar automatiskt i realtidfrån omedelbart efter behandling med cancer mot cancer.

egentligen kan RTCA-systemet inte utvärdera direktbetongcytotoxicitet såsom celldöd eller apoptos och så vidare,eftersom cellindex beräknades baserat på impedans. Därför kan kombinationsanalysen mellan RTCA-system och celldödsmätning vara effektiv metod vid utvärdering av betongcellreaktion såsom celldöd eller apoptos exakt.Till exempel kan annexin V-färgning eller uttryck av caspas-3-analys för detektion av apoptos, laktatdehydrogenas (LDH) frisättningsanalys för detektion av celldöd vara effektiva metoder(32,33). Vidare kan det vara användbart att utvärdera expression av inflammatoriskt protein i normala celler fördetektion av biverkningar när Anti-cancerreagens tillsattes till de normala celler som frös på E-plattan. Dynamisk realtidsövervakning undercellkultur inklusive anticancerreagenser kan ge värdefullainsights för tidig upptäckt av terapeutisk effektivitet och sideffekt, som inte kan utvärdera i konventionella metoder i slutpunktanalys. Så, IC50-värde beräknat av RTCA-systemet kan varaanvändbar parameter för t.ex. screening ur en synvinkel av realtidsmätning i automatiserad, undvikande av kolorimetricallyproblem eller förorening. Vidare tillåter RTCA-systemet analys av hela experimentperioden och kräver inte märkningen som kan påverka cellkulturexperiment negativt.

nyheten i denna studie är att RTCA-systemet kundedetektera cytotoxicitet hög känslighet jämfört med en konventionell metod, WST-8-analys. Dessutom kunde RTCA-systemet utvärdera ett värde på 50 i realtid utan begränsning av experimentperioden under minst 72 timmar efter tillsats av anticancerreagenser.Sammanfattningsvis visade våra resultat att Rtcasystem är användbara för analys av cytotoxicitet och kan användas iframtida utveckling av kemoterapeutiska medel med användning av cancercelleroch utvärdering av deras biverkningar i normala celler. Dessutom kan ett RTCA-system användas för att utvärdera cellreaktionsprofilerna,såsom kombinerad terapi och antikropp-cell eller läkemedel-läkemedelsinteraktioner, av anticancerreagenser.

kompletterande Material

stödjande Data

bekräftelser

Ej tillämpligt.

finansiering

ingen finansiering erhölls.

tillgänglighet av data och material

de datamängder som används och / eller analyserats under föreliggande studie är tillgängliga från motsvarande författare på reasonablerequest.

författarnas bidrag

MH och MN utformade och utformade studien. MH andTN utförde experimenten och förvärvade data. MH analyserade data, förberedde siffrorna och utarbetade manuskriptet. MH, TKY andMN tolkade resultaten. MH och TKY redigerade och reviderade themanuskript. Alla författare har läst och godkänt finalenmanuskript.

Etikgodkännande och samtycke toparticipate

Ej tillämpligt.

patientens samtycke till publicering

Ej tillämpligt.

konkurrerande intressen

författarna förklarar att de inte har några konkurrensintressen.

	Xing JZ, Zhu L, Jackson Ja, Gabos S, SunXJ, Wang XB och Xu X: dynamisk övervakning av cytotoxicitet påmikroelektroniska sensorer. Chem Res Toxicol. 18:154–161. 2005.Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Xing JZ, Zhu LJ, Gabos S och Xie L:mikroelektronisk cellsensoranalys för detektering av cytotoxicitet ochförutsägelse av akut toxicitet. Toxicol In Vitro. 20:995–1004. 2006.Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Zhu J, Wang X, Xu X och Abassi YA: Dynamicand etikett-fri övervakning av naturliga killer cell cytotoxiska aktivitetmed hjälp av elektroniska cell sensor arrays. J Immunol Metoder. 309:25–33.2006. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Xi B, Yu n, Wang X, Xu X och Abassi YA:tillämpningen av cellbaserad etikettfri teknik i drogupptäckt. Biotechnol J. 3: 484-495. 2008. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	T Cyrrker Sener L, Albeniz G, Dinc b andAlbeniz I: iCELLigence realtidscellanalyssystem för undersökningcytotoxiciteten hos läkemedel till cancercellinjer. Exp Ther Med.14:1866–1870. 2017. Visa artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Morioka m, Hazekawa M, Kawakubo-YasukochiT, Nishinakagawa T, Nakamura S och Nakashima M: effekt av collagentype i eller humant fibronektin på Imatinib cytotoxicitet i oraltquamouscellkarcinom. Pharmacol Pharm. 7:255–263. 2016.Visa artikel: Google Scholar
	Hazekawa M, Morioka M, Nishinakagawa T, Kawakubo-Yasukochi T, Nakamura S och Nakashima M: Bedömning avcytotoxicitet av imatinib för oral skivepitelcancer genom areal-time cell analyssystem. eJBio. 13:56–62. 2017.
	McEneny-King A, Edginton AN och Rao PP:undersöka bindningsinteraktionerna av anti-Alzheimers läkemedeldonepezil med CYP3A4 och P-glykoprotein. Bioorg Med Chem Lett.25:297–301. 2015. Visa Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ota T, Shinotoh H, Fukushi K, Kikuchi T,Sato K, Tanaka n, Shimada H, Hirano s, Miyoshi M, Arai H, et al:Esyimation av plasma IC50 av donepezil för cerebralacetylkolinesterashämning hos patienter med Alzheimers sjukdommed positronemissionstomografi. Clin Neurophaemacol. 33:74–78.2010. Visa Artikel : Google Scholar
	Kawakubo-Yasukochi t, Morioka M, HayashiY, Nishinakagawa T, Hazekawa M, Kawano s Nakamura s och NakashimaM: SQUU-B-cellinjen sprider sina metastatiska egenskaper tononmetastatisk klon squu-A från samma patient genom exosomer.J Oral Biosci. 58:33–38. 2016. Visa artikel: Google Scholar
	Morioka M, Kawakubo-Yasukochi t, HayashiY, Hazekawa M, Nishinakagawa t, Ono K, Kawano S, Nakamura s ochnakashima M: Exosomer från orala skivepitelcancer cellinjer, SQUU-A och SQUU-B, definierar tropismen för lymfatisk spridning. JOral Biosci. 58:180–184. 2016. Visa artikel : Google Scholar
	Kawakubo-Yasukochi T, Morioka M, HazekawaM, Yasukochi A, Nishinakagawa T, Ono K, Kawano S, Nakamura s ochnakashima M: miR-200c-3p sprider invasiv kapacitet hos människa oralsquamous cell carcinoma mikromiljö. Mol Carcinog. 57:295–302.2018. Visningsartikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Takahashi K, Kanazawa H, Akiyama Y, Tazakis, Takahara M, Muto T, Tanzaawa H och Sato K: etablering ochkaraktärisering av en cellinje (SAS) från dåligt differentieradhuman skivepitelcancer i tungan. J Jpn Stomatol Soc.38:20–28. 1989.
	Yoshiya M: en fibronektinproducerande celllin etablerad från ett humant skivepitelcancer i tunganoch dess karaktärisering. Jpn J Oral Maxillofac Surg. 36:868–880.1990. Visa artikel : Google Scholar
	Tanaka H, Toyoshima T, Sonoda K, KitamuraR, Sasaguri M, Kawano s, Matsubara R, Goto Y och Nakamura S:Apoptotisk funktion av tumörassocierat antigen RCAS1 i oralsquamous cell karcinom. J Transl Med. 12:1122014. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Chien MH, Chang WM, Lee WJ, Chang YC, LaiTC, Chan DV, Sharma R, Lin YF och Hsiao M: En fas-ligand (FasL)-smält humaniserad antikropp mot tumörassocieratglykoprotein 72 uppvisar selektivt den cytotoxiska effekten motorala cancerceller med ett lågt FasL/Fas-förhållande. Mol Cancer Ther.16:1102–1113. 2017. Visa artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Takaoka s, Iwase M, Uchida M, Yoshida s,Kondo G, Watanabe H, Ohashi M, Nagumo M och Shintani S: Effekt avkombinera epidermala tillväxtfaktorreceptorhämmare och cisplatinonproliferation och apoptos av orala skivepitelcancer.celler. Int J Oncol. 30:1460–1476. 2007.
	morifuji m, Taniguchi S, Sakai H,Nakabeppu Y och Ohishi M: differentiellt uttryck av cytokeratinefter ortotopisk implantation av nyetablerade humana tonguecancer cellinjer med definierad metastatisk förmåga. Är J Pathol.156:1317–1326. 2000. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	hängde CM, Chang CC, Lin CW, Ko SY och HsuYC: Cucurbitacin E som inducerare av celldöd och apoptos i humanoral skivepitelcancer cellinje SAS. Int J Mol Sci.14:17147–17156. 2013. Visa artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Chen YW, Huang hs, Shieh YS, Ma KH, HuangSH, Hueng DY, Sytwu HK och Lin GJ: en ny förening NSC745885exerts antitumör effekt på tungan cancer Sas celler in vitro och Invivo. PLoS Ett. 9: e1047032014. Visa Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Casale F, Canaparo R, Serpe L, Muntoni E,Pepa CD, Costa M, Marirone L, Zara GP, Fornari G och Eandi M:plasmakoncentrationer av 5-fluorouracil och dess metaboliter ikoloncancerpatienter. Pharmacol Res.50:173-179. 2004. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Van Der Heyden SA, Highley MS, de BruijinEA, Tjaden UR, Reeuwijk HJ, Van Slooten H, Van Oosterom AT och MaesRA: Farmakokinetik och biotillgänglighet för oral5′-deoxy-5-fluorouridin hos cancerpatienter. Br J Clin Pharmecol.47:351–356. 1999. Visa artikel : Google Scholar
	Kern W, Braess J, Friedrichsen S, KaufmannCC, Schleyer E och Hiddemann W: karboplatin farmakokinetik inpatienter som får karboplatin och paklitaxel/docetaxel foradvanced lungcancer: påverkan av ålder och njure funktion på Områdetunder kurvan. J Cancer Res Clin Oncol. 127:64–68. 2001.Visa Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Kenmotsu H och Tanigawara Y:farmakokinetik, dynamik och toxicitet hos docetaxel: varför denjapanska dosen skiljer sig från den västra dosen. Cancer Sci.106:497–504. 2015. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Minami H, Kawada K, Sasaki Y, Igarashi T,Saeki T, Tahara M, Itoh K och Fujii H: farmakokinetik ochfarmakodynamik av protein-obundet docetaxel hos cancerpatienter.Cancer Sci. 97:235–241. 2006. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Zhao P, Guo s, tu Z, Di L, Zha X, Zhou Hand Zhang X: Gihl3 inducerar mänsklig epitelial tumörcellmigrationoch invasion via nedreglering av E-cadherin. Acta Biochim BiophysSin (Shanghai). 48:266–274. 2016. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Szulccek r, Bogaard HJ och van NieuwAmerogen GP: Elektrisk cell-substratimpedansavkänning för kvantifiering av endotelproliferation, barriärfunktion ochmotilitet. J Vis Exp. Mar 28-2014. Visningartikel: Google Scholar
	Ku m, Kang m, Suh JS och Yang J: Effekterför Sekventiell behandling av siAkt och paklitaxel på magcancercelllinjer. Int J Med Sci. 13:708–716. 2016. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Feng Z, Wang Z, Yang M, Zhou L och Bao Y:Polysaccharopeptide exerts immunoregulatory effects viaMyD88-dependent signaling pathway. Int J Biol Macromol. 82:201–207.2016. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Genc G, Kilinc V, Bedir A and Ozkaya O:Effect of creatine and pioglitazone on Hk-2 cell line cisplatinnephrotoxicity. Ren Fail. 36:1104–1107. 2014. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ng NS, Wu MJ, Myers SJ and Aldrich-WrightJR: In vitro njurcellstoxicitet hos vissa okonventionellaanticancerfenantrolinbaserade platina (II) cpmplexer. J lnorgBiochem. 179:97–106. 2018. Visa artikel : Google Scholar
	Ma K, Zhang C, huang MY, Guo YX och Hu GQ:överhörning mellan Beclin-1-beroende autofagi ochcaspas-beroende apoptos inducerad av transhinon IIA i humanosteosarkom MG-63 celler. Oncol Rep.36:1807-1818. 2016. Visa Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Augustine D, Rao RS, Anbu J and ChidambaraMurthy KN: In vitro cytotoxic and apoptotic induction effect ofearthworm coelomic fluid of Eudrilus eugeniae, Eisenia foetida, andPerionyx excavatus on human oral squamous cell carcinoma-9 cellline. Toxicol Rep. 6:347–357. 2019. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI