Medycyna Doświadczalna i terapeutyczna

wprowadzenie

System analizy monitorowania komórek w czasie rzeczywistym (RTCA) został wcześniej opracowany do ciągłego monitorowania przylegających kultur komórkowych (1). Ta wolna od etykiet i nieinwazyjna metoda opiera się na pomiarze impedancji elektrycznej (indeks komórkowy, CI) między obszarami międzywymiarowymi na podstawie płytek hodowli tkankowej. Pomiar CI dostarcza informacji o stanie biologicznym przylegających komórek. W rzeczywistości znaczenie CI to liczba komórek przetrwalnychna powierzchni płytki E. Dane te obejmują liczbę komórek, żywotność i morfologię jako profil w czasie rzeczywistym (2-4). RTCAsystem jest znany z wczesnego wykrywania reakcji komórek jako fenotyp adynamiczny wobec niektórych odczynników (5).

w naszym poprzednim badaniu cytotoksyczność imatynibu w raku oralskabłonkowym (OSCC) oceniano przy użyciu WST-8(5– 3-(2- Test metoksy – 4-nitrofenylo)-2 – (4 – nitrofenylo) – 2h-tetrazolo-3-ium) jako pomiar punktu końcowego (6), a następnie za pomocą systemu RTCA (7).Pomiary punktu końcowego metodą MTT (bromek 3–2,5-difenylotetrazolium) i WST-8 są powszechnie stosowane do oceny cytotoksyczności. Jednakże takie testy są ograniczone przez różnice w działaniu różnych środków przeciwnowotworowych na różne linie komórkowe. Ponadto wartości IC50 obliczone na podstawie testów końcowych in vitro są zwykle wyższe niż skuteczne stężenia in vivo (8,9).

w naszym poprzednim badaniu wartości IC50 mierzone przez system RTCA były niższe niż wartości mierzone przez testwst-8, co sugeruje, że system RTCA może wrażliwie Oceniać cytotoksyczność i wpływ imatynibu na rozkład komórek. Nie jest jednak jasne, czy ocena wartości IC50 innych leków przeciwnowotworowych za pomocą systemu RTCAsystem byłaby przydatna, ponieważ istnieją różnice w działaniu cytotoksycznym między molekularnymi lekami celowanymi, takimi jak imatynib i lekami przeciwnowotworowymi w czasie.

w tym badaniu musimy wybrać pewien rodzaj linii komórkowych w celu określenia różnicy reakcji komórek na odczynniki przeciwnowotworowe w czasie rzeczywistym za pomocą systemu RTCA.Wybrano nieinwazyjną linię komórkową SQUU-a oraz inwazyjną linię komórkową SQUU-B, które powstały z miejscowych nawrotowych guzów nowotworowych języka u jednego pacjenta, ponieważ zajmowaliśmy się badaniem przerzutów linii komórkowej SQUU-B przy użyciu linii komórkowej SQUU-a i linii SQUU-Bcell (10-12). Linia komórkowa SAS została ustalona zpoorly zróżnicowanego raka płaskonabłonkowego języka ludzkiego(13). Linia komórkowa NA została ustalona jako linia komórkowa produkująca fibronektynę (14). Ponadto doniesiono, że cytotoksyczność odczynników przeciwnowotworowych w OSCC została oceniona w linii komórkowej SQUU-a i linii komórkowej SQUU-B (15), linii komórkowej SAS (16), linii komórkowej NA (17) przy użyciu różnych konwencjonalnych metod.Dlatego w niniejszym badaniu wybraliśmy cztery te linie komórkowe o każdej charakterystycznej Cechie, które zostały również użyte w teście cytotoksycznym w poprzednim badaniu.

w tym badaniu skupiliśmy się na nowym urządzeniu RTCA opracowanym do pomiaru w czasie rzeczywistym i oceniliśmy wartościic50 jako skalę do oceny cytotoksyczności naszych leków przeciwnowotworowych w kierunku w czterech liniach komórkowych OSCC. To pozwoliło nam uzyskać informacje na temat zmian obserwowanych między różnymi odczynnikami przeciwnowotworowymi i liniami komórkowymi w czasie rzeczywistym.

celem niniejszego badania było uzyskanie 50 profili bezpośrednio po dodaniu leków przeciwnowotworowych za pomocą systemu RTCA. Badanie to wykazało przewagę oceny cytotoksyczności leków przeciwnowotworowych przy użyciu systemu RTCA w porównaniu z testem końcowym.

materiały i sposoby

odczynniki i materiały

5-fluorouracyl (5-FU) rozcieńczono do 100 mM indimetylosulfotlenku (DMSO; Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, MO, USA).Doksyflurydynę i karboplatynę rozcieńczono odpowiednio do 100 i 50 mM w wodzie destylowanej. Docetaksel rozcieńczono do 10 mM inetanolu. Wszystkie odczynniki przeciwnowotworowe pochodzą z Wako PureChemical Industries, Ltd., (Osaka, Japonia) i przechowywany w temperaturze -20°C.

kultura komórkowa

ludzkie linie komórkowe OSCC SQUU-a, SQUU-B, SAS i NAwere pochodzące z próbek ludzkiego języka. SQUU-a i SQUU-B, dostarczone przez Morifuji-Wilson M (Kumamoto University,Kumamoto, Japonia), powstały z miejscowych nawracających guzów nowotworowych języka (18). SAS (13,19,20) został zakupiony od Riken BRC Cell Bank (Tsukuba, Japonia). NA (14) uprzejmie przekazał Dr Jun-ichi Iwata (Kyushu University; Fukuoka, Japonia). Wszystkie linie komórkowe były utrzymywane w zmodyfikowanym medium Dulbecco 's Eagle’ s (DMEM;Nacalai Tesque, Inc., Kioto, Japonia) zawierający 10% płodowej surowicy cielęcej (Biowest, Nuaille, Francja)w temperaturze 37°C w nawilżonej atmosferze z 5% CO2.

pomiar proliferacji komórek OSCC za pomocą testu cytotoksyczności RTCA

CI uzyskano za pomocą systemu iCELLigence (ACEABiosciences, Inc., San Diego, CA, USA)jako system RTCA. Wszystkiemonitorowanie przeprowadzono w temperaturze 37°C z regulowaną zawartością CO2 (5%). Płytki E (płytki hodowlane dla systemu iCELLigence)zawierające 200 µl pożywki hodowlanej na studzienkę równoważono do 37°C, a CI ustawiono na zero w tych warunkach. Komórki (2×104 komórki/studzienkę, o ile nie określono inaczej) dodawano w 560 µl pożywki hodowlanej środki przeciwnowotworowe dodawano po 24 godzinach od karmienia komórek. CI monitorowano w czasie rzeczywistym przez 96 godzin po wysiewie komórek. Wartości IC50 zostały obliczone przez oprogramowanie analityczne RTCAData w wersji 1.0 (ACEA Biosciences, Inc.).

w poprzednim badaniu(21-25) stężenia czterech leków przeciwnowotworowych ustalono na podstawie wartości Cmax. Ponadto wyznaczono punkty czasowe trwające 72 godz., w tym 24 godz. i 48 godz., które były ogólną metodą oceny cytotoksyczności w teście punktów końcowych.

dopasowanie krzywej IC50data

do obliczenia wartości IC50 wykorzystaliśmy następującą sigmoidalną formułę odpowiedzi na dawkę: Y=Low CI + (HighCI-Low CI) / {1+10 ^ (Log IC50-X)}, gdzie 'Low CI 'reprezentuje minimalne wartości CI,’ High CI ’ oznacza maksymalne wartości indeksu komórki, Y jest indeksem komórki, a X jest logiem koncentracji (M).

pomiar proliferacji komórek OSCC w teście WST-8

po początkowym wysiewie i hodowli komórek OSCC podłoże hodowlane usunięto i zastąpiono podłożem zawierającym antyanceragent. Po 24, 48 i 72 godzinach inkubacji do każdej studzienki dodano 20 µl barwnika WST-8 (Cell Counting Kit-8; Dojindo Corporation, Tokio, Japonia). Po 3 godzinach odczytywano płytki przy 450 nm / 655 nm. Współczynnik przeżywalności komórek obliczono za pomocą poniższej formuli (7). Wartości IC50 obliczono przez liniową regresję aproksymacyjną przeżycia percentage w porównaniu ze stężeniem leku.

współczynnik przeżycia komórki (%)=(A-c)/(b-c) ×100(a=absorbancja przy każdym stężeniu odczynnika przeciwnowotworowego,b=absorbancja przy 0 µM odczynnika przeciwnowotworowego i c=absorbancja ślepej próby).

Analiza statystyczna

wszystkie dane są pokazane jako średnia ± odchylenie standardowe(SD) trzech niezależnych eksperymentów. Korelacje pomiędzy wartościami 50 uzyskanymi za pomocą systemu RTCA i testu WST-8 zostały ocenione pod kątem istotności statystycznej przez Spearmantest. Dwie wartości p<0,05 zostały uznane za przypisane.

wyniki

wpływ środka przeciwnowotworowego na proliferację komórek OSCC za pomocą systemu RTCA

oceniliśmy cytotoksyczność czterech leków przeciwnowotworowych (5-FU, doksyflurydyny, karboplatyny i docetakselu) w liniach komórkowych fourOSCC, monitorując wartości CI przez 96 godzin po wysiewie komórek w 2×104 komórki / studzienkę na płytkach E(Fig. 1–4). Wartości CI zmniejszano w sposób zależny od adozy we wszystkich czterech liniach komórkowych OSCC. W związku z tym zmniejszenie wartości CI koreluje ze zmniejszeniem liczby komórek number.As pokazany na Rys. 2, wartość CI dlainwazyjnej linii komórek SQUU-B była niższa niż w przypadku innych OSCC cells.As pokazany na Rys. 3, profil CI obsługiwany dla linii komórkowej SAS wykazał opóźniony wzrost po 48 godzinach. 4, szybkość proliferacji i maksymalna wartość CI w linii komórkowej NA były wyższe niż jedna z innych linii komórkowych.

pomiar w czasie rzeczywistym profili IC50 leków przeciwnowotworowych w komórkach OSCC z wykorzystaniem systemu RTCA

profile IC50 czterech leków przeciwnowotworowych w czterech liniach komórkowych OSCC oznaczono za pomocą systemu RTCAsystem i obliczono za pomocą komercyjnego oprogramowania dostarczonego z instrumentem (podzbiór danych SQUU-B przedstawiono na Fig. 5). Wartości IC50 były blokowane przez 72 godziny po dodaniu leków przeciwnowotworowych. Wartości IC50 w 24, 48 i 72 h dla wszystkich czterech linii komórkowych są podsumowane w tabelach I-IV. Jak pokazano na Fig. 5, nie było opóźnienia w cytotoksycznychreakcjach 5-FU (Fig. 5A) anddocetaxel (Fig. 5D), and recovery ofcell proliferation was observed at about 24 h after treatments.However, cytotoxic reactions were observed immediately aftertreatment with anticancer agents such as doxifluridine (Fig. 5B) and carboplatin (Fig. 5C).

Dose-response curves in SQUU-B cell line using RTCAsystem were shown in supplemental materials (Figs. S1–S4) in order to show how to conversion thedata of Fig. 2 into Fig. 5. Podczas gdy krzywe żywotności komórek squu-B przy użyciu testu WST-8 pokazano również w materiałach uzupełniających (Fig. S5–S8). Wartości R2 po 72 h po podaniu odczynników przeciwnowotworowych w teście WST-8 były niskie w czterech odczynnikach przeciwnowotworowych w porównaniu z jednym z 24 h i 48 h. wyniki te wykazały, że pożądane jest, aby test w punkcie końcowym był przeprowadzany po 24 h lub 48 h W celu zastosowania jako ogólny protokół. W tym badaniu wykazano krzywe żywotności komórek testu WST-8 w materiałach uzupełniających, ponieważ nie było nowości w sposobie obliczania wartości IC50 przy użyciu testu WST-8.

korelacje pomiędzy pomiarami w czasie rzeczywistym wartości IC50 przy użyciu systemu RTCA i pomiarami punktu końcowego wartości IC50 przy użyciu testu WST-8 w komórkach OSCC

, jak pokazano na Fig. 6, wartości IC50 w 24, 48 i 72 h przy użyciu dwóch metod zostały usunięte. Oś pozioma pokazuje wartości IC50 mierzone w czasie rzeczywistym za pomocą systemu RTCA, natomiast oś podłużna pokazuje wartości IC50 punktu końcowego mierzone za pomocą testu WST-8. Zaobserwowano dodatnią korelację pomiędzy dwoma typami metod oznaczania IC50 dla każdego leku przeciwnowotworowego.Wyniki 5-FU, doksyflurydyny, karboplatyny i docetakselu y=8,19 x+346,02 (R2=0,94, rs=0,66, *p<0,05), y=1,00 x+172,70(R2=0,91, rs=0,82, **p<0.01), y=1.90 x+206.81 (R2=0.92,RS=0.96, **P<0.01), Andy=13.53 x+0.08 (R2=0.95, RS=0.73, *p<0, 05), odpowiednio. Wartości real-timeIC50 były zwykle niższe niż odpowiadające im wartości IC50.

dyskusja

wartości CI obliczone przez RTCA również określają status komórki (3). W figach. 1-5, wartości SD wartości CI były zbyt małe doee. Na przykład wszystkie wartości SD na Rys.1 było poniżej 0,05. Powodem niskich wartości CI SQUU-B było to, że białko adhezyjne e-cadherin odgrywa zasadniczą rolę w przerzutach, przy zmniejszonym poziomie E-cadheriny promującej migrację komórek i inwazję komórek (26). Sugerowano, że powodem wysokich maksymalnych wartości CI ofNA było doniesienie o przyspieszonej proliferacji i adhezji komórek fibronektyny ze względu na cechę linii komórkowej naa jako linii komórkowej produkującej fibronektynę (6). Tak więc reakcje komórkowe każdej linii komórkowejnastępnie cztery odczynniki przeciwnowotworowe były zmienne. W tym badaniu nie mogliśmy znaleźć Związku przyczynowego między wartościami IC50 a właściwością linii komórkowych. Jednakże ważne jest, aby wykryć reakcję komórkową w czasie rzeczywistym jako profil CI w celu oceny cytotoksyczności odczynnika przeciwnowotworowego przy rozważaniu farmaceutycznego zastosowania na człowieka.

profil IC50 linii komórek SQUU-B został opisany na Fig. 5 jako reprezentacyjny profil IC50, ponieważ nie było różnic we wzorze profilu IC50 w tej samej linii komórkowej okrywającej ten sam odczynnik, chociaż obliczyliśmy wartości IC50 w całej linii komórkowej przy użyciu czterech odczynników przeciwnowotworowych. Odkryliśmy, że profile IC50 różnią się dla każdego środka przeciwnowotworowego i każdej linii komórkowej OSCC. Jak pokazano na Fig.5, 5-FU i docetaksel wymagały więcej niż 24 godzin (48 godzin na rysunku), aby zacząć wywierać działanie cytotoksyczne na komórki OSCC, podczas gdy wartości IC50 po dodaniu doksyflurydyny i karboplatyny uległy poprawie po około 24 godzinach(48 godzin na rysunku). W związku z tym zasugerowaliśmy, że różnice w profilach real-timeIC50 były spowodowane przez odczynnik przeciwnowotworowy. Takie usługi nie byłyby możliwe bez pomiaru w czasie rzeczywistym za pomocą RTCA. Monitorowanie w czasie rzeczywistym wartościic50 ujawniło również, że wartości te zmieniały się w miarę upływu czasu. Istnieje możliwość nie wykrycia zmian za pomocą konwencjonalnych metod, ponieważ tylko jeden punkt czasowy IC50 po leczeniu lekiem przeciwnowotworowym jest oceniany za pomocą testu końcowego.

System RTCA różni się od tradycyjnych testów punktowych, ponieważ pomiar impedancji jest nieinwazyjny i może dostarczyć wysokiej jakości danych ilościowych dotyczących cytotoksyczności w sposób ciągły. Jak pokazano na Fig.6, stwierdzono znaczące dodatnie korelacje pomiędzy wartościami 50 uzyskanymi za pomocą systemu RTCA i testu WST-8, mimo że istniały pewne różnice w wartościach bezwzględnych CI, takie jak niskie wartości CI uzyskane dla linii komórek SQUU-B. Wyniki te sugerowały, że nawet niski CI uzyskany dla niektórych linii komórkowych byłby w stanie ocenić wysoką czułość cytotoksyczności w systemie RTCAsystem. Podczas gdy wartości IC50 w czasie rzeczywistym były niższe niż wartości IC50 w czasie rzeczywistym, gdy wartości IC50 w czasie rzeczywistym uzyskane za pomocą systemu RTCA porównywano z wartościami IC50 w czasie rzeczywistym uzyskanymi za pomocą testu WST-8.Wyniki te sugerują, że system RTCA może być zastosowanywrażliwej oceny wpływu leków przeciwnowotworowych na proliferację komórek i adhezję.

w systemie RTCA przylegająca komórka działa jako izolator na powierzchni elektrody i zmienia czynnik jonowy roztworu elektrody, zwiększając impedancję (27). Zatem CI jest funkcją liczby komórek i stosunku komórek w różnych odstępach czasu. CI=0, gdy nie ma adhezji komórek (5). CIchanges opisywane przez system RTCA odzwierciedlają dynamiczny fenotyp komórki. Te dynamiczne monitorowanie interakcji komórka-lek umożliwia lepsze zrozumienie efektów czasowych invitro, zwłaszcza bezpośrednio po leczeniu lekiem(28). Kinetyczna cecha komórek oferuje wnikliwe informacje, których nie można uzyskać z konwencjonalnego testu pojedynczego punktu końcowego, takiego jak test WST-8. Podczas gdy wyniki testu WST-8 odzwierciedlają reakcję metaboliczną survivalcell (29). Toksyczność przy użyciu testu WST-8 może być niedoszacowana, jeśli reakcja metaboliczna komórki została spowodowana, chociaż wystąpiła dynamiczna reakcja komórkowa. Sugerowaliĺ „my, Ĺźe te răłĺźnice zasadniczej dwĂłch metod byĹ’ y indukowane ogromnymi răłĺźnicami wartoĹ „ci IC50 do 8 razy pomiÄ ™ dzy dwĂłch moĹźliwoĹ” ciami, jak pokazano na Fig. 6A. w poprzednim badaniu stwierdzono, że IC50 imatynibu w komórkach SQUU-acells obliczonych za pomocą systemu RTCA i testu WST-8 wynosiło odpowiednio 4 µM i 60 µm (czułość 15 razy) (6,7). Inne grupy badawcze donosiły, że IC50 cisplatyny w komórkach HK-2 obliczonych za pomocą systemu RTCA i testu WST-8 wynosiło odpowiednio 0,76 µM i 25 µm (czułość 33 razy) (30,31).Te poprzednie dane wspierały nasze dane, aby pokazać Ważność.

ważne jest, aby uzyskać pomiary Odp.natychmiast po leczeniu środkami przeciwnowotworowymi, aby ocenić zarówno skutki uboczne środków, jak i ich pożądane efekty. Istnieje jednak niewiele doniesień o przydatnych metodach, które korelują dane invitro z danymi in vivo u ludzi. Uznaliśmy, że pomiar czasu rzeczywistego za pomocą systemu RTCA korzystnie wpłynie na ocenę skutków ubocznych leków przeciwnowotworowych w normalkomórkach.

wartości Cmax 5-FU, doksyflurydyny, karboplatyny i docetakselu są następujące: 60 (21), 40-800 (22), 40 (23), i 2 µM (24,25),odpowiednio, gdy są stosowane w leczeniu dożylnym u ludzi. Nasze dane były skorelowane z danymi pochodzącymi z badań na ludziach, ponieważ wartości Cmax były włączone do zakresu dawek eksperymentalnych stosowanych w tym badaniu.

systemy RTCA są nowym głównym urządzeniem do oceny cytotoksyczności, które wykorzystują intensywność impedancji komórek, a nie aktywność enzymów w komórkach docelowych, takich jak test MTT. Wartości IC50 dla leków przeciwnowotworowych obliczone przez system RTCA były istotnie skorelowane z poziomami IC50 obliczonymi za pomocą konwencjonalnego testu punktu końcowego. Ponadto system RTCA uzyskiwał pomiary automatycznie w czasie rzeczywistym bezpośrednio po leczeniu środkami przeciwnowotworowymi.

w rzeczywistości system RTCA nie może ocenić bezpośredniej cytotoksyczności, takiej jak śmierć komórki lub apoptoza i tak dalej,ponieważ indeks komórek obliczono na podstawie impedancji. Dlatego też, połączenie testu pomiędzy systemem RTCA i miernikiem śmierci komórki może być skuteczną metodą w przypadku oceny reakcji betonowych komórek, takich jak śmierć komórki lub apoptoza.Na przykład, barwienie aneksem V lub ekspresja testu kaspazy-3 w celu wykrycia apoptozy skuteczne mogą być testy uwalniania dehydrogenazy mleczanowej (LDH) do wykrywania śmierci komórki(32,33). Ponadto, przydatna może być ocena ekspresji białka zapalnego w normalnych komórkach w celu wykrycia efektu ubocznego, gdy odczynnik przeciwnowotworowy został dodany do normalnych komórek wysiewanych na płytce E. Dynamiczne monitorowanie w czasie rzeczywistym podczas hodowli komórek, w tym odczynników przeciwnowotworowych, może dostarczyć cennych informacji do wczesnego wykrywania skuteczności terapeutycznej i efektu ubocznego, których nie można ocenić w konwencjonalnych metodach w próbie końcowej. Tak więc wartość IC50 obliczona przez system RTCA może być dobrym parametrem, takim jak przesiewanie z punktu widzenia pomiaru czasu rzeczywistego w zautomatyzowanym, unikanie problemów kolorymetrycznych lub zanieczyszczenia. Ponadto system RTCA umożliwia analizę całego okresu eksperymentu i nie wymaga znakowania, które może negatywnie wpłynąć na wyniki hodowli komórkowej.

nowością tego badania jest to, że system RTCA mógł wykryć wysoką czułość cytotoksyczności w porównaniu z konwencjonalnym testem WST-8. Ponadto system RTCA mógł oceniać wartość 50 preciously w czasie rzeczywistym bez ograniczenia okresu eksperymentalnego przez co najmniej 72 h po dodaniu odczynników przeciwnowotworowych.

podsumowując, nasze wyniki wykazały, że systemy RTCAsystems są przydatne do oznaczania cytotoksyczności i mogą być stosowane w przyszłości w rozwoju chemioterapeutyków wykorzystujących komórki nowotworowe i ocenie ich skutków ubocznych w normalnych komórkach. Dodatkowo, system RTCA może być stosowany do oceny profili reakcji komórek, takich jak terapia skojarzona i interakcja przeciwciało-komórka lub lek-lek, odczynników przeciwnowotworowych.

materiał uzupełniający

dane pomocnicze

podziękowania

Nie dotyczy.

dofinansowanie

nie otrzymano dofinansowania.

dostępność danych i materiałów

zestawy danych wykorzystywane i / lub analizowane w trakcie prezentacjistudio są dostępne od odpowiedniego autora na reasonablerequest.

wkład autorów

MH i MN stworzyły i zaprojektowały opracowanie. MH i tn przeprowadziły eksperymenty i pozyskały dane. MH przeanalizował dane, przygotował rysunki i sporządził rękopis. MH, TKY i mn zinterpretowały wyniki. MH i TKY zredagowały i poprawiły skrypt. Wszyscy autorzy przeczytali i zaakceptowali finalmanuscript.

akceptacja etyczna i zgoda na publikację

Nie dotyczy.

zgoda pacjenta na publikację

Nie dotyczy.

konkurencyjne zainteresowania

autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych zainteresowań.

	Xing JZ, Zhu L, Jackson JA, Gabos S, SunXJ, Wang xb i Xu X: dynamiczne monitorowanie cytotoksyczności na czujnikach mikroelektronicznych. Chem Res Toxicol. 18:154–161. 2005.Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Xing JZ, Zhu LJ, Gabos s i Xie L:test czujników mikroelektronicznych do wykrywania cytotoksyczności i wykrywania ostrej toksyczności. Toxicol In Vitro. 20:995–1004. 2006.Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed / NCBI
	J Metody Immunol. 309:25–33.2006. Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Xi B, YU N, Wang X, Xu X and Abassi Ya:the application of cell-based label-free technology in drugdiscovery. Biotechnol J. 3: 484-495. 2008. Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Türker Sener L, Albeniz G, Dinc B andAlbeniz I: iCELLigence real-time cell analysis system for examiningthe cytotoxicity of drugs to cancer cell lines. Termin Ważności (Exp)14:1866–1870. 2017. Zobacz artykuł : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Morioka m, Hazekawa m, Kawakubo-YasukochiT, Nishinakagawa T, Nakamura S I Nakashima m: wpływ collagentype I lub ludzkiej fibronektyny na cytotoksyczność imatynibu w raku oralskomabinowym. Pharmacol Pharm. 7:255–263. 2016.Zobacz artykuł: Google Scholar
	Hazekawa M, Morioka M, Nishinakagawa T,Kawakubo – Yasukochi T, Nakamura S I Nakashima m: Ocena cytotoksyczności imatynibu w przypadku raka płaskonabłonkowego jamy ustnej za pomocą systemu analizy areal-time cell analysis. eJBio. 13:56–62. 2017.
	McEneny-King a, Edginton AN i Rao PP:badanie interakcji wiązania leku przeciw Alzheimerowi z CYP3A4 i glikoproteiną P. Bioorg Med Chem Lett.25:297–301. 2015. Zobacz Artykuł: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ota T, Shinotoh H, Fukushi K, Kikuchi T,Sato K, Tanaka N, Shimada H, Hirano S, Miyoshi m, Arai h, et al:Esyimation of plasma IC50 of donepezil for hamowanie cerebralacetylocholinoesterazy u pacjentów z chorobą Alzheimera przy użyciu pozytonowej tomografii emisyjnej. Clin Neurofaemacol. 33:74–78.2010. Zobacz Artykuł : Google Scholar
	Kawakubo-Yasukochi T, Morioka M, HayashiY, Nishinakagawa T, Hazekawa m, Kawano s Nakamura S I NakashimaM: linia komórek SQUU-B rozprzestrzenia swoje właściwości metastatyczne klon TONONMETASTATYCZNY SQUU-a z tego samego pacjent przez exosomy.J Oral Biosci. 58:33–38. 2016. Zobacz artykuł: Google Scholar
	Morioka M, Kawakubo-Yasukochi T, HayashiY, Hazekawa M, Nishinakagawa T, Ono K, Kawano S, Nakamura s andNakashima m: Exosomy z linii komórek raka płaskonabłonkowego jamy ustnej, SQUU-a i SQUU-B, definiują tropizm rozprzestrzeniania się limfatycznego. JOral Biosci. 58:180–184. 2016. Zobacz artykuł : Google Scholar
	Kawakubo-Yasukochi T, Morioka M, HazekawaM, Yasukochi a, Nishinakagawa T, Ono K, Kawano s, Nakamura s andNakashima m: Mir-200C-3p oralsquamous cell carcinoma microenvironment. Mol Carcinog. 57:295–302.2018. Zobaczartykuł: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Takahashi K, Kanazawa H, Akiyama Y, TazakiS, Takahara m, Muto T, Tanzaawa H and Sato K: Establishment andcharacterization of a cell line (SAS) from wellowly differentiated Human squamous cell carcinoma of the tongue. J Jpn Stomatol Soc.38:20–28. 1989.
	Yoshiya m: linia komórkowa produkująca fibronektynę powstała z ludzkiego raka płaskonabłonkowego języka i jej charakterystyka. JPN J Oral Maxillofac Surg. 36:868–880.1990. Zobacz artykuł:Google Scholar
	Tanaka H, Toyoshima T, Sonoda K, KitamuraR, Sasaguri M, Kawano S, Matsubara R, Goto Y i Nakamura s: Apoptotyczna funkcja antygenu związanego z guzem rcas1 w raku oralskomabularnym. J Transl Med. 12:1122014. Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Chien MH, Chang WM, Lee WJ, Chang YC, LaiTC, Chan DV, Sharma R, Lin YF i Hsiao M: Ligand Fas (FasL)-skondensowane humanizowane przeciwciało przeciwko glikoproteinie 72 związanej z guzem selektywnie wykazuje działanie cytotoksyczne przeciwko komórkom nowotworowym o niskim stosunku FasL/Fas. Mol Rak Ther.16:1102–1113. 2017. Zobacz artykuł : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Takaoka s, Iwase m, Uchida M, Yoshida S,Kondo G, Watanabe H, Ohashi m, Nagumo m i Shintani S: efekt połączenia inhibitorów receptora naskórkowego czynnika wzrostu oraz proliferacji cisplatynonu i apoptozy oralnych płaskonabłonkowych komórek rakowych. Int J Oncol. 30:1460–1476. 2007.
	Morifuji m, Taniguchi S, Sakai H,Nakabeppu Y i Ohishi m: różnicowa ekspresja cytokeratin po ortotopowym wszczepieniu nowo utworzonych linii komórek raka języka ludzkiego o określonej zdolności przerzutowej. Am J Pathol.156:1317–1326. 2000. Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Hung CM, Chang CC, Lin CW, Ko sy i HsuYC: Dyniurbitacyna e jako induktor śmierci komórkowej i apoptozy w linii komórkowej raka płaskonabłonkowego człowieka SAS. Int J Mol Sci.14:17147–17156. 2013. Zobacz artykuł : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Chen YW, Huang HS, Shieh YS, Ma Kh, HuangSH, Hueng DY, Sytwu HK i Lin Gj: a novel compound nsc745885exerts Anti-tumor effect on tongue Cancer SAS cells in vitro i Invivo. PLoS 1. 9: e1047032014. Zobacz Artykuł: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Casale F, Canaparo R, Serpe L, Muntoni E,Pepa CD, Costa m, Marirone L, Zara GP, Fornari G i Eandi m:stężenia 5-fluorouracylu i jego metabolitów w osoczu pacjentów z rakiem jelita grubego. Pharmacol Res. 50: 173-179. 2004. Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Van Der Heyden SA, Highley MS, De BruijinEA, Tjaden UR, Reeuwijk HJ, Van Slooten H, Van Oosterom AT I MaesRA: Farmakokinetyka i biodostępność oral5 ’ -deoksy-5-fluorourydyny u pacjentów z chorobą nowotworową. Br J Clin Pharmecol.47:351–356. 1999. Zobacz artykuł: Google Scholar
	Kern w, Braess J, Friedrichsen S, KaufmannCC, Schleyer E i Hiddemann w: farmakokinetyka karboplatyny u pacjentów otrzymujących karboplatynę i paklitaksel/docetaksel w leczeniu raka płuc: wpływ wieku i czynności nerek na obszar po krzywej. J Cancer Res Clin Oncol. 127:64–68. 2001.Zobacz Artykuł: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Kenmotsu H I Tanigawara y:farmakokinetyka, dynamika i toksyczność docetakselu: dlaczego dawka Japonii różni się od dawki Zachodniej. Rak Sci.106:497–504. 2015. Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Minami H, Kawada K, Sasaki Y, Igarashi T,Saeki T, Tahara M, Itoh K i Fujii H: farmakokinetyka i farmakodynamika niezwiązanego z białkiem docetakselu u pacjentów z rakiem.Rak Sci. 97:235–241. 2006. Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Zhao P, Guo s, tu z, Di L, Zha X, Zhou Hand Zhang X: Gihl3 indukuje migrację komórek nowotworowych ludzkiego nabłonka i inwazję poprzez obniżenie regulacji e-cadherin. Acta Biochim BiophysSin (Szanghaj). 48:266–274. 2016. Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Szulccek R, Bogaard HJ i van NIEUWAMEROGEN GP: Impedancja komórkowo-substrat elektryczny wykrywanie quantification śródbłonka proliferacji, funkcji bariery, andmotility. J Vis Exp. 28-03-2014 Zobaczartykuł: Google Scholar
	Ku m, Kang m, Suh JS i Yang J: efekty sekwencyjnego leczenia siAkt i paklitakselu w leczeniu raka żołądka. Int J Med Sci. 13:708–716. 2016. Zobacz artykuł: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Feng z, Wang z, Yang M, Zhou L i Bao Y:Polysaccharopeptide exerts immunoregulatory effects viaMyD88-dependent signaling pathway. Int J Biol Macromol. 82:201–207.2016. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Genc G, Kilinc V, Bedir A and Ozkaya O:Effect of creatine and pioglitazone on Hk-2 cell line cisplatinnephrotoxicity. Ren Fail. 36:1104–1107. 2014. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ng NS, Wu MJ, Myers SJ and Aldrich-WrightJR: Toksyczność komórek nerkowych in vitro niektórych niekonwencjonalnych cpmpleksów platyny (II) na bazie fenantroliny. J lnorgBiochem. 179:97–106. 2018. Zobacz artykuł: Google Scholar
	Ma K, Zhang C, huang MY, Guo YX i Hu gq:rozmowa krzyżowa między autofagią zależną od Beclin-1 i apoptozą zależną od transhinonu IIA w komórkach HUMANOSTEOSARCOMA MG-63. Oncol Rep. 36: 1807-1818. 2016. Zobacz Artykuł: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Augustine D, Rao RS, Anbu J and ChidambaraMurthy KN: In vitro cytotoxic and apoptotic induction effect ofearthworm coelomic fluid of Eudrilus eugeniae, Eisenia foetida, andPerionyx excavatus on human oral squamous cell carcinoma-9 cellline. Toxicol Rep. 6:347–357. 2019. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI