Gasteyer rozwijała komedie z Los Angeles improv – sketch comedy group The Groundlings. Zagrała małe role w Seinfeldzie (jako skazana klientka zupy Nazi), a także w serialach Party of Five, Frasier, Hope & Gloria i NYPD Blue. W 1996 Gasteyer dołączył do obsady Saturday Night Live. Wśród jej najbardziej popularnych postaci były nauczyciel muzyki w liceum Bobbie Mohan-Culp, National Public Radio Delicious Dish host Margaret Jo McCullen, Lilith Fair piosenkarka Feministyczna Cinder Calhoun, a jej wrażenia Martha Stewart i Celine Dion. W 2000 roku wraz z Chrisem Parnellem wzięła udział w castingu do roli Colina Quinna jako współscenarzysty parodii News Weekend Update, ale ostatecznie posady trafiły do Tiny Fey i Jimmy ’ ego Fallona.
Po sześciu sezonach Gasteyer opuścił SNL w 2002 roku. Następnie występowała w różnych programach telewizyjnych, filmach i produkcjach scenicznych. W 2004 Gasteyer zagrała matkę głównej bohaterki Cady Heron (Lindsay Lohan) w filmie fabularnym Mean Girls, napisanym przez SNL castmate Tinę Fey. W filmie wystąpili również inni byli członkowie obsady SNL, w tym Fey, Tim Meadows i Amy Poehler. Pojawiła się również w musicalu „Reefer Madness” (2005) jako Mae, skazana na śmierć dziewczyna Jacka i właścicielka Reefer Den.
Gasteyer wystąpił w revival The Threepenny Opera na Broadwayu jako Pani Peachum, wraz z Jimem Dalem, Alanem Cummingiem i Cyndi Lauper. Produkcja trwała od 24 marca do 25 czerwca 2006 roku.
24 czerwca 2005 roku Gasteyer wystąpił w roli Elphaby w chicagowskiej produkcji musicalu Wicked, u boku Kate Reinders jako Glinda. Produkcję rozpoczęto 13 lipca 2005 roku. Gasteyer za swój występ był nominowany do Nagrody Jeffersona. Swój ostatni występ zagrała 22 stycznia 2006 roku, zastąpiona przez swoją rezerwową Kristy Cates. Później ponownie zagrała rolę w broadwayowskiej produkcji od 10 października 2006 do 7 stycznia 2007, zastępując Edena Espinosę.
12 kwietnia 2007 roku media ogłosiły, że Gasteyer dołączył do obsady nowego musicalu, Writing Arthur, NA 2007 New Works Festival for TheatreWorks w Kalifornii, który trwał od 14 do 22 kwietnia. Gasteyer występował w Chicago w musicalu pasja Stephena Sondheima w Chicago Shakespeare Theater od 2 października 2007 do 11 listopada 2007.
została obsadzona w roli Glorii na Bisach! Letnia produkcja Damn Yankees, ale z powodu kontuzji podczas prób została zastąpiona przez Megan Lawrence. Gasteyer wziął udział w czytaniu broadwayowskiej wersji musicalu The First Wives Club.
zagrała rolę Kitty Dean w broadwayowskiej sztuce rodzina królewska, która rozpoczęła występy w Samuel J. Friedman Theatre 15 września 2009 roku, a oficjalnie została otwarta 8 października 2009 roku. Serial zakończył swoją działalność 13 grudnia 2009 roku. Gasteyer wystąpił również jako Frisco Kate Fothergill w centrach miast bis! produkcja Girl Crazy, trwająca od 19 listopada do 22 listopada 2009 roku.
wróciła do Saturday Night Live na specjalny odcinek Dnia Matki 8 maja 2010 roku, a na kolejny odcinek Dnia Matki 11 maja 2012 roku.
Gasteyer pojawiła się w ósmym sezonie Curb Your Enthusiasm jako dziewczyna Larry ’ ego Davida.
od 2011 do 2014 roku Gasteyer występowała jako Sheila Shay w serialu komediowym ABC Suburgatory, a od marca 2013 roku była rzeczniczką planu diety Weight Watchers.
W 2014 roku, korzystając z wykształcenia wokalistki, Gasteyer nagrała i wydała album I ’ m Hip, zawierający standardy jazzowe. „One Mint Julep” był jednym z wybranych, które zawierał. W 2015 roku zagrała Mimi Schwinn w nowojorskim City Center Encores! Off-broadwayowskie wznowienie musicalu A New Brain, pojawiające się również na nagraniach obsady.
w latach 2016-2017 Gasteyer miał główną rolę w kultowym przeboju TBS „ludzie Ziemi”, jako lider grupy wsparcia uprowadzonych przez kosmitów.
w październiku 2019 wydała świąteczny album Sugar &. Gasteyer pojawił się później jako uczestnik drugiego sezonu zamaskowanej piosenkarki pod postacią „drzewa”, ostatecznie kończąc rywalizację na szóstym miejscu.
w lutym 2020 roku Gasteyer zagra rolę Katherine Hastings w komedii NBC American Auto, którą napisał Justin Spitzer. We wrześniu i październiku 2020 roku użyczyła głosu czerwonej Pandzie o imieniu Nut w serialu animowanym dla dorosłych pt.