하기 위해서 힘의 대상으로 원점 복귀 endonucleases,Jerome 실험실을 최적화하는 유용한 납품을 위한 시스템 in vivo 및 vitro 연구이다. 그들은 사용 adeno-associated virus(AAV)전달 시스템을 타겟 마우스 trigeminal 신경을 가진 두 개의 HSV 특정 endonucleases:HSV1m5,설계를 다니엘 virion 단백질 VP5 유전자,그리고 HS1m8 는 목표를 코딩하는 유전자는 DNA 중합효소 연 촉매 소 단위. 이들 유전자 중 하나에서 돌연변이를 생성하면 바이러스 게놈의 붕괴가 발생하고 비리 온 생산을 방지 할 수 있습니다. 치료 Trex-2 의 효과를 더 높이기 위해 지시 된 돌연변이 유발을 증가시키는 것으로 밝혀진 3′-5’엔도 뉴 클레아 제를 공동 형질 전환시켰다. 시스템을 확립 한 후,실험실은 생물학적으로 관련된 세포 유형 인 뉴런에 초점을 맞춘 시험 관내 작업을 시작했습니다. 뉴런의 배양 물을 HSV1m5 또는 8 및 Trex-2 와 공동 형질 전환 한 다음 HSV 에 감염시켰다. 처리 된 배양 물은 t7 엔도 뉴 클레아 제 1 분석 및 클론 시퀀싱에 의한 hsv 의 돌연변이의 존재뿐만 아니라 바이러스 역가의 50%감소를 보였다. 일단 lytic 감염의 붕괴가 설치되면 연구원은 HSV 감염의 다른 단계에 대한 효력을 보기 시작했다. HSV 로 뉴런의 감염된 배양 물을 사용하고 다른 시간 지점에서 Trex-2 로 hsv1m5 또는 8 로 처리 한 후 연구자들은 다양한 감염 단계를 시뮬레이션 할 수 있습니다. 그들은 처리 문화에 7 일(급성상),14 일(늦은 급성/초 잠재성 단계),그리고 32 의 일(잠상)고 없이 변경과 관계없이의 바이러스 단계입니다. 이것은 hsv 가 바이러스 단계에 관계없이 엔도 뉴 클레아 제 변이 형성에 유사하게 취약하다는 것을 시사한다. 표적 부위 돌연변이의 수준은 hsv1m5 및 HSV1m8 에 대해 각각 4.5-7.6%및 1.1-6.6%범위였다. 현재,이것은 잠재 적으로 감염된 뉴런에서 엔도 뉴 클레아 제 활성을 조사한 최초의 연구입니다.
시험 관내 결과에 힘 입어 연구진은 hsv 에 감염된 마우스를 사용하여 생체 내 연구를 수행했으며 32 일 후 AAV(hsv1m5 또는 8 및 Trex-2 를 발현)주사를 맞았다. 마우스로부터의 뉴런은 바이러스 역가,바이러스 부하 및 HSV 게놈 돌연변이에 대해 aav 주사 후 30 일 동안 샘플링되었다. 이 그룹은 hsv1m5 의 경우 2/4 마우스와 hsv1m8 의 경우 3/4 마우스에서 1-2%의 돌연변이를 보였다. 그러나 이들 동물의 바이러스 부하는 대조군과 처리 된 동물간에 유사했다. 바이러스를 흘리기에 의해 지연되었 하루 처리된 동물에서 하지만 비슷한 수준에 도달 시간과 비교하지 않습니다. 시에 반영하는 결과를 Dr.Jerome 말했다,”이것은 처음 실제적인 잠재성 바이러스 감염 설립되었습니다 동물에서,그리고 다음 장애인,부분적으로라도,사용하는 고도로 복잡하고 치료입니다. 그래서 그것은 그러한 치료법을 인간의 적용에 가져 오는 중요한 단계를 나타냅니다. 주요 도전이 지금의 효능을 증가 치료,그래서 모든 것 또는 거의 모든 잠재성 바이러스를 유전적으로 사용할 수 없습니다. 우리는 조사 중인 새로운,더 효율적인 nucleases 다음과 같 CRISPR/Cas,평가하는 새로운 방법을 제공 nucleases 감염을 신경 세포 in vivo.”미래에는 이 치료로 이어질 수 있는 새로운 방법에 대해 생각하고 치료는 잠재과 같은 질병 HSV HIV 우리가 현재 볼 수로 치료할 수 있다.
이 연구를위한 자금은 국립 보건원(National Institutes Of Health)과 캐나다 재단(Canadian Foundation)에서 제공했습니다.
Aubert M,Madden EA,Loprieno M,DeSilva Feelixge HS,Stensland L,Huang ML,Greninger AL,Roychoudhury P,Niyonzima N,Nguyen T,Magaret A,Galleto R,Stone D,Jerome KR. 2016. 디자이너 endonuclease 치료에 의한 잠재 HSV 의 생체 내 중단. JCI 인사이트,1(14).