要約
母親とその最近生まれた乳児の口腔および生殖器標本におけるヒトパピローマウイルス（HPV）タイプの広いスペクトルに基づいて一致を評価した大規模な研究はほとんどない。 この情報は、妊娠前に投与されたHPVワクチンが垂直感染を予防するために有用であり得るかどうかを決定する上で重要である。 HPV DNAは、母親の30％および新生児の1.5％で陽性であった。 母体/新生児一致（HPV+/+またはHPV）は71％であった。 HPV DNA+母親の間では、幼児のわずか3％がDNA+であり、唯一の1ペアが同じHPVタイプを持っていた。 HPV女性のうち、乳児の0.8％がHPV+であった。 入院した新生児で検出されたHPV DNAは、妊娠中または出産中に乳児に伝達される現在の感染を反映しています。 母親/赤ちゃんHPV DNA+コンコーダンスペアのいずれも、妊娠前のワクチン接種が垂直伝達を防止するのに有効である可能性は低いことを示唆しているhpv
1. はじめに
ヒトパピローマウイルス（HPV）は、喉頭乳頭腫症、生殖器疣贅、および癌を引き起こすことがよく認識されています。 HPV型は、低リスク、非oncogenic、タイプ、肛門形成疣贅と喉頭乳頭腫症または高リスク、発癌性、子宮頸部、肛門形成領域、および頭頸部の癌に関連するHPV型に分類されます。 生殖器および口腔癌に関連する最も一般的なHPVタイプは、HPV-16、18、および33である。 HPV-6および-11は新生児のlaryngeal papillomatosisおよび生殖器疣と最も一般に関連付けられます。
ウイルス感染の主なモードは性的接触を介して起こるが、HPVは最初の性交前に処女女性にも見られている。 研究では、このウイルスは出産前または出産中に母親から乳児に伝染する可能性があることが示唆されています。 私たちと他の人は、新生児の口腔または生殖器粘膜へのHPV DNAの垂直伝達のリスクはまれであることを発見しました,1-5%. 対照的に、他の研究は、垂直伝達が一般的であることを示唆しており、40％〜80％である。 接種と真の感染を区別するための方法である持続性HPV DNAのいくつかの研究では、出生後37％-83％の間で維持されることが報告されているが、出生後6週間から6ヶ月で10％の有病率が24ヶ月のフォローアップで乳児で低いことが示されている。 母体HPV陽性は一貫して乳児のHPV感染の危険因子である。 ウイルス伝達のこのnonsexualモードの有病率は妊娠の前に家族計画の感染させた女性のワクチン接種の作戦そして臨床管理の重要な影響があるかもしれま したがって、送信と一致の頻度を明確にするだけでなく、HPV送信の他の潜在的なソースのために制御された環境で母親と幼児で同じHPVタイプが検出され 本研究の目的は、病院の退院前に新生児へのHPVの伝達のための母体の危険因子を評価し、母体/乳児抗体と生殖器および口腔標本からの細胞学的DNAに基づ
2. メソッド
2.1. 参加者
1997年から2000年の間に、定期的な産科検査（）中に妊娠第三期に見られていたすべての妊婦、18歳以上、アイオワ大学の病院や診療所、産科/婦人科 この研究には、正常な妊娠をした健康な女性のみが含まれていました。 母親は、複雑な妊娠、言葉の壁、精神的に同意できない、または研究病院の現場で出産する予定がない場合に除外されたため、研究の目的の対象とならな すべての参加者は、承認された人間の被験者の同意書に署名しました。 一部の女性が他の場所で配達されたか、臍帯血が配達時に利用できなかったため、募集されたすべての女性が最終分析に含めることができなかった。 研究分析に含まれていた333人の妊婦のうち、HPVの結果は、子宮頸部および口腔細胞標本を取得し、周血清学を収集することによって評価された。 333人の新生児からのサンプルは口頭および生殖区域と臍帯血からHPVの状態のためにテストするために得られました。 この研究には193人の男性と140人の女性の新生児がいました。 研究募集中に同性カップルまたは非生物学的パートナーは同定されなかった。
2.2. データ収集
母親によって大学が承認した人間の被験者の同意書に署名された後、彼らは人口統計、生殖、性的履歴、およびHPV関連病変に関する情報の自 新生児は、出生時の妊娠期間、性別、配達の種類、ボトル/授乳の好み、出生時の医学的問題、およびHPV標本が乳児から得られた配達後の時間数について、出席小児科医 母体の子宮頸部スワブおよび経口すすぎは、妊娠の第三学期中および訓練された産科医および看護師の開業医によって配達の直前に得られた。 母体血清試料は、送達プロセス中に無菌的に得られた。 退院前に、乳児は、生殖器および口腔領域をスワビングすることによってHPV DNAについて試験された。 手順は以前に説明した。 乳児の口腔および生殖器標本は、ウイルス接種のリスクを軽減するために、出生後42時間の中央値で採取したが、組織の感染はなかった。 HPV DNAを評価するために標本が収集されるまでの出生後の最小時間は24時間に設定されたが、二人の女性はその時間の前に退院することを計画していた 割礼を受けた男性では、組織の一部をHPV DNAについて試験した。 出生時に胎盤から乳児血清試料を得た。2.3.
実験室の方法。個人がHPV特異的カプシドタンパク質（ウイルス様粒子/Vlp）に対する抗体を有するかどうかを決定するために、血清学的検査を行った。
手順は他の場所で説明されています。 ＨＰＶ特異的タンパク質に由来する抗原に対する抗体の存在を、ｈｐｖ型１ ６、１ ８、３ １、および３ ３Ｖｌｐを抗原として用いたＥＬＩＳＡ試験を用いて決定し、これらをＨＰＶ高リスク型（ＨＰＶ−Ｈ Ｒ）と 低リスク型（ＨＰＶ−ＬＲ）として定義されたＨＰＶ６および１ １Ｖｌｐは、これらの分析が試験された時点では入手できなかった。 抗原のないウェルで背景反応性を測定した。 それらの吸光度は、抗原の存在下で得られた対応する値から差し引かれた。 陽性および陰性であることが知られている対照血清を各プレート上で試験した。 光学密度値が陽性と考えられたカットオフレベル計算のために、HPV抗体陰性であることが知られている通常の献血者からの10の標準血清を各プレート 平均値およびSDを各抗原について別々に計算し、カットオフ点を対照標本の平均吸光度に3SDを加えたものとして表した。
剥離した口腔細胞の評価のためのサンプル調製、PCR分析、DNAハイブリダイゼーション、およびHPVタイピング手順は、前述の標準プロトコールに基づいていた。
各PCR反応には、適切なDNAおよび細胞DNAのPCR増幅の妥当性を検証するために-グロビン遺伝子を増幅するためのプライマーが含まれていた。 すべての口腔細胞標本は-グロビン遺伝子に対して陽性であった。 細胞標本から抽出されたＤＮＡの２％（典型的には５ ０〜２ ０ ０ｎｇ）を、ＨＰＶを検出するためにＭＹ０ ９およびＭＹ１ １プライマーおよびこのタイプの検出を改善するためにＨＰＶ−５ １を増幅 PCR産物は、最初の400nt hpv増幅バンド臭化エチジウム染色1％アガロースゲル上の存在を調べた。 染色後にHPV陰性であったすべての標本のPCR産物のアリコートは、HPV DNAのより敏感な検出のための標識プローブとドットブロット法によってハイブリダイズ 膜ハイブリダイゼーション後にのみ陽性のこれらのサンプルは、MY09とGP5+プライマーとヘミネストPCR増幅を受けた。 ＤＮＡ配列決定を使用して、ＤＮＡシーケンサ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ−ＰＥ）上での色素終止によって実施された、各ＨＰＶ陽性試料中のＨＰＶ型を決定した。 塩基配列をＢＬＡＳＴプログラムを用いてＧｅｎｂａｎｋ配列と比較した。2.4.
統計分析
ロジスティック回帰オッズ比（ORs）と95％信頼区間（CIs）hpv関連疾患の性的パートナーと母体の歴史の数を調整する母親と新生児の特性に関連するHPV血清陽性率を推定するために使用されました。 一致は、母親と新生児VLPとHPV DNAの結果を利用して2×2のテーブルで一致したペアのためのMcNemarのテストを使用して検討しました。 Κ統計量は、母親と新生児血清サンプル間のHPV陽性状態の一致を測定するために使用されました。 統計的有意性はで注目された。05とすべてのテストは2面でした。 すべての分析は、SAS statistical packageを使用して行った。
3. 結果
表1は、子宮頸部および/または口腔粘膜で検出された一つ以上のHPVタイプに対して陽性の333人の健康な妊婦におけるhpv DNAの人口統計学的特 出産時の平均年齢は29歳（範囲：18-44歳）で、16％は非白人/非ヒスパニック系の人種であり、77％は高校教育よりも大きかった。 四分の三以上が21歳の前に性交を持っていた、三分の二は、現在の妊娠の前に3つ以上のパートナーを持っていた、半分以上が二つ以下の前の妊娠を持っていた、とほとんどは経口避妊薬を使用していました。 女性の25％以上がHPV関連病変の病歴を有し、5人は組織学的に確認された子宮頸癌を有していた。 新生児の大部分は男性（58％）、妊娠39週（67％）、および膣分娩（89％）によって生まれました。
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| DNA types include HPV-6, 11, 16, 18, 31, 33, 39, 51, 53, 54, 56, 58, 59, 61, 66, 69, 70, 83, 84, other/unnamed types; on HPV+ in cervical/genital and/or oral samples; for number of sexual partners and history of an HPV-related disease; -HR VLP types HPV-16, 18, 31, 33. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
表1に含まれる危険因子は、HPV DNAに基づいている。 パートナーの数と母親のHPV関連疾患の歴史の調整後、若い年齢、低い教育、パートナーの数が多い、喫煙、子宮頸部異形成、および子宮頸癌は、母体HPV DNAのリスクの増加と関連していた。 新生児のHPV DNA陽性は、性別、摂食方法、送達のタイプ、または妊娠期間に関連していなかった（データは示されていない）。 333人の女性のうち、295人（87％）の膣分娩と38人（13％）のCセクションがありました。 99DNA陽性の母親のうち、膣（）およびCセクション（）配達の割合もそれぞれ87％および13％であった。 HPV DNA伝送のために、唯一の3（1％）86膣分娩の一致し、13DNA陽性のCセクション（-値）のいずれもなかった。 血清学的伝達のために、膣配達の35％（30/86）およびCセクションの38％（5/13）は一致していた。 HPV疾患の病歴を調整した後、膣とC切片の送達を比較したORは1.1であった（0.1-23。1)dna伝達および血清学伝達のための0.9（0.3–3.0）のため。 母親における抗HPV Vlp（HPV-16、18、31、33）に対する血清陽性率と、これらの同じ4つのHPV型に対するHPV-HR DNAのリスクとの間に有意な関連はなかった（データは示さ
母親および新生児のHPV頻度およびタイプを表2に示す。 現在の感染症を検査するHPV DNAは、母親の間で30％がHPV DNA陽性であり、子宮頸部で28％、口腔粘膜で3％であり、母親の22％がHPV-HR型であったことを示した。 複数のタイプが13.5％（）で検出され、子宮頸部でのみ検出された。 母親の二つの最も一般的なHPV-HRタイプは、HPV-16（33％）とHPV-31（29％）であり、これらのタイプは、子宮頸部および口腔粘膜の両方でより頻繁であった。 あまり一般的ではないHPV-HR DNAタイプが含まれています18, 33, 39, 51, 56, 58, 59, 66, そして70 HPV-16、18、31、および33DNAの全体的な有病率は、母親で16％であった。 母親におけるHPV-LR DNAの全体的な有病率は8％であり、最も一般的なLRタイプはHPV-53（19％）、HPV-61（14％）、およびHPV-83（14％）であり、他のあまり頻繁に検出されないタイプはHPV-6, 11, 54, 69, 84, そして、いくつかの名前のないタイプ。 表はまた、現在のHPVワクチンに見られるHPV-6、11、16、18型の頻度を示す。 母体および新生児のデータは、HPV+DNA感染の約3分の1だけがこれらの4つのワクチンタイプを含むことを示した。 新生児におけるHPV DNAの有病率は1.5％であり（表2）、HPV+とHPV新生児の間のサンプル収集時間に有意差はなかった：40時間。 対41.5時間（）。 2つのHPV-HRタイプ（HPV-16および51）および1つのHPV-LRタイプ（HPV-61）：三つの新生児は、経口サンプル中のHPV DNAで検出されました。 二つの新生児HPV-LR外陰部サンプルもhpv-61の陽性であったが、割礼組織サンプルのいずれも陽性ではなかった。 新生児のHPV DNAには複数の感染は見られなかった。
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| based on number of cases; high risk types detected (HPV-16, 18, 31, 33, 39, 51, 56, 58, 59, 66, 70); 検出される低リスクタイプ（HPV-6, 11, 53, 54, 61, 69, 83, 84, 結果は結合された2つの頚部サンプルを表すのでHRおよびLRのタイプの数は頚部グループのHPVの総数に合計しません;個人はHRおよびLRのタイプを含 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
第三期での登録と配信の間の平均HPV標本収集間隔は71.4日でした。 第三期と送達標本収集期間とHPV伝達のその後のリスクとの間に有意な関連はなかった。 血清学に基づいて、HPV血清陰性対HPV血清陽性伝達の間の平均間隔は、それぞれ74日および60日であった（調整値）。 ＤＮＡ伝達に基づいて、ＨＰＶ ＤＮＡ陰性対ＨＰＶ ＤＮＡ陽性伝達の平均間隔は、それぞれ６ ３日および４ ９日であった（調整値）。 全体の平均間隔時間（血清学およびDNAの両方に基づく）は、伝送速度に有意に関連していなかった。 次に、抗HPV Vlpに対する母体試料と新生児試料の一致を検討した（表3）。
次に、抗HPV Vlpに対する母体試料と新生児試料の一致を検討した（表3）。
There was a high concordance (93%) and low discordance rate between maternal and newborn antibodies () and high agreement in HPV seropositivity (, 0.78–0.90). Type specific concordance rates were between 96%–97%.
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ＨＰＶ ＶＬＰ１ ６、１ ８、３ １、または３ ３（Ｎ３ ３ ３）について、母親と新生児との間の一致。母親と新生児の間のHPV DNA+一致率は71％（）であり、主に両方のグループにおけるHPV所見によるものであった（表4）。 母親がHPV+であった場合、乳児のリスクは増加した（OR3.6、CI：0.6–22。0）しかし、陽性新生児の数が少ないと、広いCIsが生じた。 30％のHPV+母親のうち、乳児の3％（）はHPV–母親の乳児の0.8％（）と比較してHPV+であった。 HPV+の両方であった三つの母親/赤ちゃんのペアがあったが、hpv型特異的な一致は、母親の子宮頸部と新生児の口腔粘膜におけるHPV-51のために、唯一のケース 他の２つのＨＰＶ＋母／赤ちゃん対は、ＨＰＶ−３ ９／ＨＰＶ−６ １およびＨＰＶ−９ ９／ＨＰＶ−６ １であった。 HPV-母親を持つ二つのHPV+乳児は、HPV-16とHPV-61で検出されました。 現在のHPVワクチン（HPV-16）に含まれているタイプを持っていたのは、DNA+新生児のうちの一つだけでした。 これらの所見は本質的に母親のものであった血清学の所見とは実質的に異なっていたが，ＤＮＡ所見は母親と乳児の両方で現在の感染を表していた。
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| + cervical/genital and/or oral for any HPV type. | |||||||||||||||||||||||||||
4. 議論
この大規模な疫学的研究は、血清および細胞診の両方におけるウイルスの頻度およびタイプを調べることによって、母親と新生児の間のHPVの一致を評価し、垂直伝達の危険因子を同定した。 私たちを含む以前の研究では、母親と新生児におけるHPV DNA陽性の有病率を調べることによってHPV垂直伝達を評価しており、口腔/生殖器標本の十分なDNAを用いた調査では、HPVタイプと母親と新生児の間の型特異的一致を決定している。 過去の研究では、口腔/生殖器標本からのHPV DNAの母体有病率は31％であったのに対し、異なる研究集団に基づくこの調査では同様の乳児率で2％であった。 この分析におけるhpv-16、18、31、33の血清陽性率は、全体的な母体DNA+率、31-32％に類似していたが、HPV DNA+母親の半分だけがこれらの同じ四つのHPV血清学的ハイリスク型で検出され、単一のHPV-16DNA+乳児はHPV血清陰性であった。 この発見に関連しているのは、送達のタイプと垂直伝達の速度との間に関連性がないという事実であり、したがって、膣送達は、HPV型に一致があった場
母親と新生児におけるHPV血清学的一致の分析は、主に母親が生後3-6ヶ月で新生児に免疫学的抗体を提供し、母親と新生児の間のHPV状態または型 これは確かにいくつかの例外を除いて結果であった,彼女は血清陰性をテストし、彼女の新生児が血清陽性をテストしたとき、または幼児はまだ最近HPV したがって、これは、母体Ｉｇｇの胎児獲得を検証した最初の研究である。
母体の抗HPV血清学的所見の比較は、乳児への感染の伝達の有効な尺度を提供しないので、臨床的焦点は、剥離細胞からのDNA型の一致に限定される。 HPVの検出のこのもとに血清学のマーカーとは違って個人で現在の伝染を測定する利点があります。 私たちの以前および現在の調査、および大きな（）母体/新生児サンプルを持つ他の人の調査によって支持されている、生殖器および口腔細胞で検出されたHPV DNAの垂直伝達は珍しい、5％である。 その低い有病率にもかかわらず、我々は、母親が送達前にHPVで検出された場合、または送達前にHPV関連病変を有していた場合（、1.8-4.0）、垂直感染のリスクが HPV関連疾患の既往歴のある母親は、既往歴のない女性では47％対23％の伝達率を有していた（）。 しかし、HPVワクチンタイプ（HPV-16）で検出されたのは、HPV+新生児のうちの一つだけであった。 さらに、本研究では、新生児の性器は口腔粘膜と同様に感染する可能性が高かった; 従ってHPVの縦伝達が主に口頭粘膜に影響を与えること心配（およびこうしてlaryngeal papillomatosisのための潜在性）生殖の粘膜区域への伝達についてのより大きい心配に 垂直伝達に基づく青年および若年成人における生殖器異形成および癌のリスクは、HPV関連の口腔乳頭腫症の場合と同様に重要であり得る。
他の人は垂直感染の頻度がはるかに高いことを示唆しているが、これらの知見は、不安定な頻度率を生成する小さなサンプルサイズ、および出生直後に採取された標本、特に鼻咽頭吸引物からの感染、またはPCR汚染によるものではなく、接種によるものである可能性が最も高い。 収集した標本を調製し維持し，汚染を低減するためにＰＣＲアッセイを行った建物とは別の建物でＰＣＲ調製を行った。 さらに，最も一般的に検出されるＨＰＶ型を配列決定によって調べ，いずれかの変異体の頻度が高くなく，母親／赤ちゃんの変異体が同じであることを確認した。
私たちは、大規模な患者集団におけるHPV DNA型特異的な母体/新生児の一致を検討した数少ない人の一人です。 HPVに感染した母親/赤ちゃんのペアの中で、我々は低型特異的一致、17％（1/6）、574母親/赤ちゃんのペアと20％（）この分析では、DNAシークエンシングを使用して両方の研究 対照的に、Tsengらは、Tenti（11/11：4HPV-16/18、他の不特定のタイプが一致した7）と同様に、HPV-16/18 301の母親/赤ちゃんのペア（27/27）の経口/生殖器標本でHPV-100％の一致を検出したが、後者の研究所見は、出生時に採取された新生児鼻咽頭吸引物に基づいており、新生児への母体汚染を反映している可能性が高い。 これら二つの研究は、検出されたHPV DNA型の半分だけを占めたHPV-16および-18への評価を限定した。 従ってタイプ特定の一致の縦伝達の頻度はそれ以上の調査を必要とする。
口腔粘膜で報告されている最も一般的なHPV DNA型、HPV-16、18、31、および33であり、子宮頸部で最も頻繁に同定されている最も一般的なHPV DNA型は、同じ個体、母親または新生児のVLP型とタイプ特異的一致を持っていなかったことは驚くべきことであった。 我々は、DNA陰性の母親の20％が四つのHPVタイプのいずれかのVLP血清陽性であったことがわかった。 この不和な発見の可能性のある理由は、感染（潜伏感染）を検出するための不十分なHPVコピー数、感染を伴う病変を排除した可能性のあるHPV病変の感染前治療のクリアランス、または免疫応答の欠如によるものである可能性がある。 健康な若い女性のHPV感染に関する多くの大規模な研究では、若い女性のDNAおよびVLPの血清価率が、低リスクの妊娠群のものと同等であることがわ 興味深いことに、ＨＰＶ−１ ６、１ ８、３ １、または３ ３にＤＮＡ陽性であったが、それらの特定のタイプに対する抗ＶＬＰ抗体を有さなかった女性（１ ７％）の割合が高かった。 これらの感染は、個体が抗体応答をマウントすることができないこと、最近の感染が免疫応答を産生するのに不十分な時間、または検出可能な抗体応答を産生しない低レベルのウイルス複製と関連している可能性があり、NonnenmacherおよびSchillerによっても報告されている所見である。
この研究の強みの中には、母親と新生児の間のDNAおよび血清学的HPV結果のタイプ特異的一致を評価する能力がありました。
この研究の強みの中には、母親と新生児の間のDNAおよび血清学的HPV結果 6つ未満のHPV DNA型を試験した他の研究と比較して、我々の研究はHPV DNAを配列決定し、したがってすべてのタイプについて試験した。 しかし、結論は、DNAの一致およびしたがって垂直伝達が母親/新生児の口腔および生殖器部位の間で低いことであることを残っている。 この研究の大きなサンプルサイズは、母親とその新生児におけるHPV陽性の一致を調査することを可能にした。 この大きさはまた、安定した有病率の評価だけでなく、このウイルス感染を獲得するリスクの高い乳児を同定するための潜在的な方法として、新生児のHPV感染の母親の危険因子の検査も可能にした。 低いHPV DNA陽性の母体/新生児の一致に基づいて、これは、妊娠前の家族計画中の予防的HPVワクチン接種が垂直感染の予防に有効ではないことを示唆している。 さらに重要なことに、この知見は、HPVの垂直伝播が低いため、女性が妊娠前に予防接種を受けることが有効である可能性は低いことを示唆している。この研究は、NIH NIDCR R01DE11979（EMS、LMR、THH、LPT）、NIDCR R01DE13110（EMS、LMR、THH、LPT）、および退役軍人功労審査基金（LPT、THH）からの助成金によって支援されました。