実験‑治療薬

はじめに

付着細胞培養を継続的にモニタリングするために開発されたリアルタイム細胞モニタリング分析（RTCA）システム（1）。 このラベルなしのandnon侵略的な方法はティッシュ文化版のthebaseのinterdigitated領域間のelectricalimpedance（細胞の索引、CI）の測定に基づいている。 CI測定は、付着細胞の生物学的状態に関する定量的な情報を提供する。 実際には、CIの意味は生存細胞の数ですEプレートの表面上にある。 これらのデータには、リアルタイムプロファイルとしての細胞数、生存率、および形態が含まれます（2-4）。 RTCAsystemは、いくつかの試薬に対するadynamic表現型として細胞反応の早期検出装置に知られている（5）。

我々の以前の研究では、口腔扁平上皮癌（OSCC）におけるイマチニブ細胞毒性は、WSTを用いて評価されました-8(5– 3-(2- methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazole-3-ium)アッセイをエンドポイント測定として（6）、次いでRTCAシステム（7）を用いて測定する。MTT（3–2,5-ジフェニルテトラゾリウム臭化）およびWST-8アッセイによるエンドポイント測定は、細胞毒性を評価するために使用される。 しかしながら、そのようなアッセイは、異なる抗癌剤の異なる細胞株の効果の変動によって制限される。 さらに、IN vitroエンドポイントアッセイによって計算されたIC50値は、in vivoでの有効濃度よりも高くなる傾向がある（8,9）。

我々の以前の研究では、RTCAシステムによって測定されたIC50値は、RTCAシステムが細胞毒性と細胞接着に対するイマチニブの影響を敏感に評価できる しかし、イマチニブなどの分子標的薬と抗癌剤との間には時間の経過とともに細胞傷害反応に差があるため、RTCAsystemを用いた他の抗癌剤のtheic50値の評価が有用であるかどうかは不明である。

本研究では、RTCAシステムを用いてリアルタイムで抗癌試薬に対する細胞反応プロファイルの違いを決定するために、いくつかのタイプの細胞株を選択する必要がある。Ａｓｉｎｇｌｅ患者における局所再発舌癌腫ようから樹立された非侵襲性ＳＱＵＵ-Ａ細胞株および侵襲性ＳＱＵＵ-Ｂ細胞株は，ＳＱＵＵ-Ａ細胞株およびＳＱＵＵ-Ｂｃｅｌｌ株（１ ０-１ ２）を用いてＳＱＵＵ-ｂ細胞株の転移に関する研究に従事していたため選択した。 SAS細胞株は、舌の貧弱に分化したヒト扁平上皮癌から確立された（13）。 NA細胞株は、フィブロネクチン産生細胞株として確立された（14）。 さらに、OSCCにおける抗癌試薬の細胞毒性は、SQUU-A細胞株およびSQUU-B細胞株（15）、SAS細胞株（16）、NA細胞株（17）において、様々な従来の方法を用いて評価されていることが報告されている。そのため，本研究ではそれぞれの特徴を有する四つの細胞株を選択し，これは以前の研究でも細胞傷害性アッセイに使用された。

本研究では、リアルタイム測定のために開発された新しいRTCAに焦点を当て、四つのOSCC細胞株における抗癌剤の細胞毒性を評価するための尺度としてtheic50値を評価した。 これにより，異なる抗癌剤と細胞株の間で観察された変動に関する情報をリアルタイムで得ることができた。

本研究の目的は、RTCAシステムを用いて抗癌剤を添加した直後からic50プロファイルを得ることであった。 本研究は，エンドポイントアッセイと比較してＲＴＣＡシステムを用いて抗癌剤の細胞毒性を評価することの利点を示した。

材料および方法

試薬および材料

5-フルオロウラシル（5-FU）を100mM indimethylsulfoxide（DMSO;Sigma-Aldrich Inc.）に希釈した。、セントルイス、MO、米国）。ドキシフルリジンおよびカルボプラチンを蒸留水中でそれぞれ100および50mMに希釈した。 ドセタキセルを10mM inethanolに希釈した。 全ての抗癌剤は和光純薬工業株式会社から供給された。、（大阪、日本）および-20°c.で貯えられて。

細胞培養

ヒトOSCC細胞株SQUU-A、SQUU-B、SAS、およびNAwereは、ヒト舌サンプルに由来します。 SQUU-AおよびSQUU-Bは、Morifuji-Wilson M（熊本大学、熊本、日本）によって親切に提供され、ローカル再発舌癌性腫瘍（18）から確立されました。 SAS(13,19,20)は理化学研究所BRCセルバンク(つくば,日本)から購入されました。 Na(14)は、岩田純一博士（九州大学、福岡）から親切に提供されました。 全ての細胞株は、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ；Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ． １ ０％ウシ胎仔血清（Ｂｉｏｗｅｓｔ，Ｎｕａｉｌｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で３ ７℃で含有する。ＲＴＣＡ細胞毒性アッセイによるＯＳＣ細胞増殖の測定＜／ｈ６＞＜ｐ＞ＣＩは、Ｉｃｅｌｌｉｇｅｎｃｅ ｓｙｓｔｅｍ（Ａｃｅａｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． ＲＴＣＡシステムとしてのｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃ Ａ，ＵＳＡ）。 Allmonitoringは調整されたCo2Content(5%)との37°Cで行われました。 ウェルあたり200μ lの培養培地を含むE-プレート（iCELLigence system用の培養プレート）を37℃に平衡化し、これらの条件下でCIをゼロに設定した。 細胞（特に断りのない限り2×104細胞/ウェル）を添加した560μ lの培養培地に抗癌剤を添加し、細胞を播種した後24時間で添加した。 CIは96時間のaftercellの播くことのためにリアルタイムで監視されました。 ＩＣ５ ０値は、Ｒｔｃａｄａｔａ分析ソフトウェアバージョン１.０（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．).

四つの抗がん剤の八点濃度は、以前の研究（21-25）のCmax値に基づいて設定されました。 さらに、時間点は、エンドポイントアッセイにおける細胞毒性を評価する一般的な方法であった72時間および24時間および48時間を含むsetduringした。

Ic50Dataの曲線フィッティング

我々は、IC50値を計算するために、次のシグモイド用量応答式を使用しました。Y=Low CI+(HighCI-Low CI)/{1+10^(Log IC50-X)}、ここで、’Low CI’は最小CI値を表し、’High CI’は最大セル指数値を表し、Yはセル指数であり、Xは濃度の対数(M)である。

OSCC細胞増殖の測定WST-8アッセイによる

OSCC細胞の最初の播種および培養後、培養培地を除去し、抗癌剤含有培地に置き換えた。 ２ ４、４ ８、７ ２時間のインキュベーションの後、２ ０μ ｌのＷＳＴ−８色素（Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８；同心堂株式会社、東京）を各ウェルに添加した。 3時間後、プレートを450nm/655nmで読み取った。 細胞生存率は、以下の式（７）を用いて算出した。 Ic50値は、薬物濃度に対するパーセンテージ生存率の線形近似回帰によって計算された。細胞生存率（％）＝（Ａ−ｃ）／（ｂ−ｃ）×１ ０ ０（ａ＝抗癌剤の各濃度での吸光度、ｂ＝抗癌剤の０μ Ｍでの吸光度、ｃ＝ブランクの吸光度）。＜／ｐ＞＜Ｐ＞細胞生存率（％）＝（Ａ−ｃ）／（ｂ−ｃ）×１ ０ ０（ａ＝抗癌剤の各濃度での吸光度、Ｂ＝抗癌剤の０μ Ｍでの吸光度、ｃ＝ブランクの吸光度）＜／ｐ＞＜Ｐ＞

統計分析

すべてのデータは、3つの独立した実験の平均±標準偏差（SD）として示されています。

統計分析

すべてのデータは、3つ RTCAシステムとWST-8assayを使用して得られたic50値との間の相関は、Spearmantestによって統計的有意性を評価した。 Pの両側の値<0.05は割り当て可能と見なされました。

結果

RTCAシステムを用いたOSCC細胞増殖に対する抗がん剤濃縮の効果

fourOSCC細胞株における四つの抗がん剤（5-FU、ドキシフルリジン、カルボプラチン、ドセタキセル）の細胞毒性を、細胞を2×104細胞/ウェルで播種した後の96時間のCI値をモニタリングすることにより、eプレート上のCI値をモニタリングすることにより評価した。 1–4). ＣＩ値はすべてのＯＳＣＣ細胞株においてアドース依存的に減少した。 したがって、CI値の減少は細胞の減少と相関していたnumber.As に示す。 図2に示すように、侵襲性SQUU-B細胞株のCI値は、他のOSCCのCI値よりも低かったcells.As に示す。 図3に示すように、SAS細胞株について得られたCIプロファイルは、48時間後に遅延増加を示した。 図4に示すように、NA細胞株における増殖率および最大CI値は、他の細胞株よりも高かった。

RTCAシステムを用いたOSCC細胞における抗がん剤のic50プロファイルのリアルタイム測定

四つのOSCC細胞株における四つの抗がん剤のIC50プロ 5). IC50値は、抗癌剤の添加後72時間のためにプロットされました。 すべての４つの細胞線についての２ ４、４ ８、および７ ２ｈでのＩＣ５ ０値は、表ｉ〜ＩＶに要約されている。 図5に示すように、5-FUの細胞毒性反応にタイムラグがあった（図。 5A) anddocetaxel (Fig. 5D), and recovery ofcell proliferation was observed at about 24 h after treatments.However, cytotoxic reactions were observed immediately aftertreatment with anticancer agents such as doxifluridine (Fig. 5B) and carboplatin (Fig. 5C).

Dose-response curves in SQUU-B cell line using RTCAsystem were shown in supplemental materials (Figs. S1–S4) in order to show how to conversion thedata of Fig. 2 into Fig. 5. 一方、ＷＳＴ−８アッセイを使用したＳＱＵＵ−Ｂの細胞生存率曲線も、補足材料に示された（図３Ａ、３Ｂ、４Ｂ、５Ｂ、６Ｂ、７Ｂ、８Ｂ）。 S5-S8）。 WST-8アッセイにおける追加抗癌試薬の72時間後のr2値は、24時間および48時間のいずれかと比較してfouranticancer試薬で低かった。Theseresultsは、エンドポイントアッセイが24時間または48時間で行われることが望ましいことを示した一般的なプロトコルとして使用されることが望ましいことを示した。 この研究では、WST-8アッセイを用いたIC50値の計算方法に新規性がなかったため、WST-8アッセイの細胞生存率曲線は、補給材料で示された。

RTCAシステムを用いたIC50値のリアルタイム測定と、OSCCセルにおけるWST-8assayを用いたIC50値のエンドポイント測定との相関

図に示すように。 図６に示すように、２つの方法を用いた２ ４、４ ８、および７ ２時間におけるＩＣ５ ０値をプロットした。 横軸はＲＴＣＡシステムを使用して測定されたリアルタイムＩＣ５ ０値を示し、縦軸はＷＳＴ−８アッセイを使用して測定されたエンドポイントＩＣ５ ０値を示す。 アポ陽性相関は、各抗癌剤のIC50を測定するためのassaymethodの二つのタイプの間に観察されました。５−ＦＵ、ドキシフルリジン、カルボプラチン、およびｄｏｃｅｔａｘｃｅｌの結果は、ｙ＝８.１ ９ｘ＋３ ４ ６.０ ２（Ｒ２＝０.９ ４，ｒｓ＝０.６ ６，＊Ｐ＜ｄｉｖ ｉ ｄ＝“０ ３ｃｅｃ２ ０ａｃ９”＞＜／ｄｉｖ＞０.０ ５）、ｙ＝１.０ ０ｘ＋１ ７ ２.７ ０（Ｒ２＝0.01),y=1.90x+206.81(r2=0.92,rs=0.96,**p<0.01),andy=13.53x+0.08(r2=0.95,rs=0.73,**p<0.01),y=1.90x+206.81(r2=0.92,rs=0.96,**p<0.01),andy=13.53x+0.08(r2=0.95,rs=0.73,*p<0.01),andy=13.53x+0.08(r2=div>0.05)、それぞれ。 リアルタイムic50値は、対応するエンドポイントIC50値よりも低い傾向がありました。RTCAによって計算されたCI値もセルの状態を表しています（3）。 に対応しています。 図1-5に示すように、CI値のSD値はseeに小さすぎた。 例えば、図１のＳＤ値は全て、図１のＳＤ値である。1は0.05以下であった。 SQUU-Bの低いCI値の理由は、接着タンパク質E-カドヘリンは、E-カドヘリンpromotingcell移行と細胞浸潤（のレベルが低下して、転移にessentialroleを果たしていることを示唆した26）。 最大CI値の高いofNAの理由は、フィブロネクチン産生細胞株としてのofNA細胞株の特徴により、フィブロネクチンが細胞増殖と接着を促進することが報告されていることが示唆された（6）。 したがって，各細胞株の細胞反応は四つの抗癌剤に対して可変であった。 この研究では、IC50値と細胞株の特徴との間の因果関係を見つけることができませんでした。 しかし，ヒトへの医薬品応用を考える際には，抗癌剤の細胞毒性を評価するためには，ＣＩプロファイルとしてリアルタイムで細胞反応を検出することが重要である。ＳＣＵＵ−Ｂ細胞株のＩＣ５ ０プロファイルを図１ ０に記載した。＜／ｐ＞＜ｐ＞ＳＣＵＵ−Ｂ細胞株のＩＣ５ ０プロファイルを図１ ０に記載した。 5つの抗がん剤を用いてすべての細胞株でIC50値を計算したが、同じ試薬の場合、同じ細胞株でIC50プロファイルパターンに差異がなかったため、ic50プロ 我々は、theic50プロファイルは、各抗癌剤とineach OSCC細胞株のために変化することがわかった。 図に示すように。図5、5-FUおよびドセタキセルは、OSCC細胞に細胞毒性効果を発揮し始めるために24時間以上（図では48時間）を必要としたが、IC50値はドキシフルリジンおよびカーボプラチンを添加した後に約24時間（図では48時間）から回復した。 したがって、我々は、リアルタイムic50プロファイルの違いは、抗癌剤によって引き起こされたことを示唆した。 このような調査は、RTCAを使用したリアルタイム測定なしでは不可能でした。 また、ic50値のリアルタイムモニタリングにより、これらの値は時間の経過とともに顕著に変化することが明らかになった。 抗癌剤による治療後のIC50の一時点のみがエンドポイントアッセイによって評価されるため、従来の方法を用いて変化を検出しない可能性がある。

RTCAシステムはインピーダンスの測定がacontinuous方法の細胞毒性の良質、量的なデータを提供する非侵襲的なandcanであるので従来のendpointassaysとは違ってあります。 図に示すように。図6に示すように、RTCAシステムで得られたic50値とWST-8assayとの間には、SQUU-B細胞株で得られた低いCI値などのCIの絶対値にいくつかの違いがあったにもかか これらの結果から，いくつかの細胞株に対して得られた低ＣＩでも，Ｒｔｃａｓｙｓｔｅｍにおける細胞毒性高感度を評価できることが示唆された。 一方、RTCAシステムで得られたリアルタイムIc50値は、WST-8アッセイで得られたエンドポイントIC50値と比較したときに、リアルタイムIC50値はendpoint IC50値よりこれらの結果は，ＲＴＣＡシステムが細胞増殖および接着に対する抗癌剤の効果を感受性的に評価するために使用できることを示唆している。

RTCAシステムでは、付着セルは電極の表面上の絶縁体として作用し、電極溶液のイオン媒体を変化させ、インピーダンスを増加させる（27）。 したがって、ＣＩは、異なる時間間隔でのセル数およびセルの比率の関数である。 細胞接着がない場合、CI=0(5)。 RTCAシステムによって記述されたCIchangesは、動的表現型ofcellを反映しています。 細胞-薬物相互作用のこれらの動的モニタリングは、特に薬物による治療直後に、invitroの時間的効果のより良い理解を得ることを可能にする（28）。 Thecellsの運動特徴はwst-8試金のようなaconventionalの単一の終点の試金から得ることができない見識がある情報を提供する。 一方、WST-8アッセイの結果は、survivalcellの代謝反応を反映している（29）。 Wst-8アッセイを用いた毒性は、動的細胞反応が起こったが、細胞代謝反応が行われた場合に過小評価される可能性がある。 我々は、二つの方法におけるプリンシパルのこれらの違いは、図に示すようにtwomethods間のIC50値の最大8倍の差を誘導したことをsuggestedthat。 以前の研究では、RTCAシステムおよびWST-8アッセイによって計算されたSQUU-Acells中のイマチニブのIC50は、それぞれ4μ mおよび60μ mであった（感度15倍）（6,7）。 その他の研究グループは、RTCAシステムおよびWST-8アッセイによって計算されたHK-2cellsにおけるシスプラチンのIC50は、それぞれ0.76μ mおよび25μ m（33倍の感度）（30,31）であったことを報告した。これらの以前のデータは、妥当性を示すために我々のデータを支持した。

抗癌剤による治療直後から測定値を取得し、薬剤の副作用とその所望の効果の両方を評価することが重要である。 しかし、invitroデータとヒトin vivoデータとを相関させる有用な方法の報告はほとんどありません。 ＲＴＣＡシステムを用いたリアルタイム測定は，正常細胞における抗癌剤の副作用の評価に有益であると考えた。

以前に報告された5-FU、ドキシフルリジン、カルボプラチン、およびドセタキセルのCmax値は次のとおりです60 (21), 40-800 (22), 40 (23), ヒトにおける静脈内治療のために使用される場合、それぞれ2μ m（24,25）および2μ m（24,25）。 Ourdataは、Cmax値がこの研究で使用された実験用量の範囲に含まれていたため、人間のデータと相関していました。

RTCAシステムは、MTTassayのような標的細胞における酵素活性ではなく、細胞接着のインピーダンス強度を用いた細胞毒性を評価する新しい主要な装置である。 RTCAシステムによって計算された抗癌剤のIC50値は、従来のエンドポイントアッセイによって計算されたIc50レベルと有意に相関していた。 さらに、RTCAシステムは、抗癌剤による治療直後からリアルタイムで自動的に測定を取得しました。

実際には、RTCAシステムは、インピーダンスに基づいて細胞指数を計算したため、細胞死やアポトーシスなどの細胞毒性を直接評価することはできません。 そのため，細胞死やアポトーシスなどの具体的な細胞反応を正確に評価する場合には，ＲＴＣＡシステムと細胞死測定との組み合わせアッセイが有効な方法であると考えられる。例えば、アネキシンV染色またはカスパーゼ-3アッセイの発現アポトーシスの検出のために、細胞死の検出のための乳酸脱水素酵素（LDH）リリースアッセイは有効な方法である可能性がある（32,33）。 さらに，ｅプレート上に播種した正常細胞に抗癌試薬を添加した場合の副作用の検出には，正常細胞における炎症性蛋白質の発現を評価することが有用であると考えられた。 抗癌剤を含む細胞培養中の動的リアルタイムモニタリングは、エンドポイントアッセイでは従来の方法では評価できない治療効率と副作用の早期発見に貴重な洞察を提供することができる。 従って、RTCAシステムによって計算されるIC50価値は自動化された、colorimetricallyproblemsまたは汚染の回避のofreal-time測定の観点からのスクリーニングのようなのための有用な なお、RTCAシステムは実験の全期間のtheanalysisを可能にし、否定的に細胞のcultureexperimentsに影響を与えることができるrequiretheの分類しない。

この研究の新規性は、RTCAシステムは、従来の方法、WST-8アッセイと比較して細胞毒性高感度を検出することができるということです。 なお、RTCAシステムはofanticancerの試薬の付加の後の少なくとも72hのためのrestrictionofの実験期間なしでリアルタイムでpreciously評価できましたic50価値。

結論として、我々の結果は、RTCAsystemsは細胞毒性をアッセイするのに有用であり、癌細胞を用いた化学療法剤の将来の開発と正常細胞におけるそれらの副作用の評価に使用することができることを示した。 さらに、ＲＴＣＡシステムを使用して、抗癌剤の併用療法および抗体−細胞または薬物−薬物相互作用などの細胞反応プロファイルを評価することができる。

補足資料

サポートデータ

謝辞

適用されません。

資金調達

資金調達は受けられませんでした。

データと資料の可用性

presentstudy中に使用および/または分析されたデータセットは、reasonablerequest上の対応する著者から入手できます。

著者の貢献

MHとMNは、研究を考案し、設計しました。 MHとtnは実験を行い、データを取得した。 MHはデータを分析し、図を準備し、原稿を起草した。 MH、TKY、mnは結果を解釈した。 MHとTKYはthemanuscriptを編集し、改訂しました。 すべての著者はfinalmanuscriptを読んで承認しました。

倫理の承認と同意participate

適用されません。

出版のための患者の同意

適用されません。

競合する利益

著者は、競合する利益を持っていないと宣言しています。

	Xing JZ、Zhu L、Jackson JA、Gabos S、SunXJ、Wang XBおよびXu X：マイクロエレクトロニクスセンサーの細胞毒性の動的モニタリング。 ケムレス-トキシコール 18:154–161. 2005.記事を見る：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Xing JZ、Zhu LJ、Gabos SおよびXie L：急性毒性の細胞毒性および予測の検出のためのマイクロエレクトロニクセルセンサーアッセイ。 In Vitroでのトキシコール。 20:995–1004. 2006.記事を見る：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Zhu J、Wang X、Xu X、Abassi YA：電子細胞センサーアレイを使用したナチュラルキラー細胞細胞傷害活性のダイナミ Jイムノールメソッド… 309:25–33.2006. 記事を見る：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Xi B、Yu N、Wang X、Xu x、Abassi YA：薬物発見における細胞ベースのラベルフリー技術の適用。 Biotechnol J.3:484-495。 2008. 記事を見る：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Türker Sener L、Albeniz G、Dinc B andAlbeniz I：癌細胞株に対する薬物の細胞毒性を検査するためのiCELLigenceリアルタイム細胞分析システム。 Exp Ther Med.14:1866–1870. 2017. 記事を見る：Google Scholar：PubMed/NCBI
	盛岡M、羽瀬川M、川久保靖子T、西中川T、中村S、中島M：口腔扁平上皮癌におけるコラゲンタイプIまたはヒトフィブロネクチンがイマチニブ細胞毒性に及ぼす影響。 ファーマコール-ファーム 7:255–263. 2016.記事を表示:Google Scholar
	羽瀬川M、盛岡M、西中川T、川久保-安河内T、中村S、中島M: 領域時間細胞解析システムによる口腔扁平上皮癌に対するイマチニブの細胞毒性の評価。 eJBio… 13:56–62. 2017.
	McEneny-King A、Edginton ANおよびRao PP：CYP3A4およびP-糖タンパク質との抗アルツハイマー薬ドネペジルの結合相互作用を調査する。 バイオオルグMed Chem Lett.25:297–301. 2015. 記事を見る：Google Scholar : PubMed/NCBI
	太田T、篠藤H、福士K、菊池T、佐藤K、田中N、島田H、平野S、三好M、新井H、ら：脳アセチルコリンエステラーゼ阻害に対するドネペジルの血漿IC50アルツハイマー病陽電子放射断層撮影法を用いた。 クリン-ニューロフェマコール 33:74–78.2010. 記事を見る : Google Scholar
	川久保靖河T、盛岡M、HayashiY、西中川T、Hazekawa M、川野S中村SおよびNakashimaM：SQUU-B細胞株は、同じ患者からの転移性クローンSQUU-Aをエキソソームを介して転移性を広げる。Jオーラルバイオシ… 58:33–38. 2016. 記事を表示:Google Scholar
	盛岡M、川久保-安河内T、林、羽瀬川M、西中川T、小野K、川野S、中村S、中島M: 口腔扁平上皮癌細胞株、SQUU-AおよびSQUU-Bからのエキソソームは、リンパ播種の指向性を定義する。 ジョラール-ビシッチ 58:180–184. 2016. 記事を見る：Google Scholar
	川久保-安河内T、盛岡M、ハゼカワム、安河内A、西中川T、小野K、川野S、中村S、中島M:miR-200c-3pは、ヒト口腔扁平上皮癌における侵襲性微小環境。 モレノグ 57:295–302.2018. ViewArticle:Google Scholar : PubMed/NCBI
	高橋K、金沢H、秋山Y、田崎、高原M、武藤T、Tanzaawa H、佐藤K：舌の分化不全ヒト扁平上皮癌からの細胞株（SAS）の確立と特徴化。 J Jpn Stomatol Soc.38:20–28. 1989.
	Yoshiya M：舌のヒト扁平上皮癌から確立されたフィブロネクチン産生細胞株およびその特徴付け。 日本口腔顎顔面外科学会第36回大会:868–880.1990. 記事を見る：Google Scholar
	田中H、豊嶋T、園田K、北村、篠栗M、川野S、松原R、後藤Y、中村S：口腔扁平上皮癌における腫瘍関連抗原RCAS1のアポトーシス機能。 JトランスL Med. 12:1122014. 記事を表示する：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Chien MH、Chang WM、Lee WJ、Chang YC、LaiTC、Chan DV、Sharma R、Lin YF、Hsiao M: 腫瘍関連糖タンパク質72に対するFasリガンド（FasL）融合ヒト化抗体は、選択的に低いFasL/Fas比で口腔癌細胞に対して細胞傷害効果を示す。 モルガン-サー16:1102–1113. 2017. 記事を見る：Google Scholar：PubMed/NCBI
	高岡S、岩瀬M、内田M、吉田S、近藤G、渡辺H、大橋M、南雲M、新谷S：表皮成長因子受容体阻害剤と口腔扁平上皮癌細胞のシスプラチノン増殖とアポトーシスの組み合わせの効果….. Int J Oncol. 30:1460–1476. 2007.
	森藤M、谷口S、酒井H、中別府Y、大石M：定義された転移能力の新たに確立されたヒト舌癌細胞株の同所性移植後のサイトケラチンの差動発現。 Am J Pathol.156:1317–1326. 2000. 記事を表示する：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Hung CM、Chang CC、Lin CW、Ko SY、HsuYC: ヒト扁平上皮癌細胞株SASにおける細胞死およびアポトーシスの誘導物質としてのククルビタシンE。 Int J Mol Sci.14:17147–17156. 2013. 記事を見る：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Chen YW、Huang HS、Shieh YS、Ma KH、HuangSH、Hueng DY、Sytwu HKおよびLin GJ：新規化合物Nsc745885は、in vitroおよびin vitroでの舌癌SAS細胞に対する抗腫瘍効果を発揮インビボ プロスワン 9:e1047032014. 記事を見る：Google Scholar : PubMed/NCBI
	Casale F、Canaparo R、Serpe L、Muntoni E、Pepa CD、Costa M、Marirone L、Zara GP、Fornari GおよびEandi M：5-フルオロウラシルおよびその代謝産物の血漿濃度は、結腸癌患者である。 Pharmacol Res.50:173-179. 2004. 記事を表示:Google Scholar:PubMed/NCBI
	Van Der Heyden SA,Highley MS,De BruijinEA,Tjaden UR,Reeuwijk HJ,Van Slooten H,Van Oosterom AT and MaesRA: 癌患者におけるoral5′-deoxy-5-fluorouridineの薬物動態および生物学的利用能。 Br J Clin Pharmecol.47:351–356. 1999. 記事を見る:Google Scholar
	Kern W,Braess J,Friedrichsen S,KaufmannCC,Schleyer E and Hiddemann W:Carboplatin pharmacokinetics高度肺癌のためのcarboplatinおよびpaclitaxel/docetaxelを受けている入院患者:年齢およびエリア上の腎機能曲線の下に。 Jガン-リズ-クリン-オンコール… 127:64–68. 2001.記事を見る：Google Scholar : PubMed/NCBI
	ケンモツHと谷川原Y：ドセタキセルの薬物動態、動態および毒性：なぜ日本の用量が西洋の用量と異なるのか。 がんサイ…106:497–504. 2015. 記事を見る：Google Scholar：PubMed/NCBI
	南H、川田K、佐々木Y、五十嵐T、佐伯T、田原M、伊藤K、藤井H：癌患者におけるタンパク質非結合ドセタキセルの薬物動態がんサイ… 97:235–241. 2006. 記事を見る：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Zhao P、Guo S、Tu Z、Di L、Zha X、Zhou Hand Zhang X：Gihl3は、e-カドヘリンのダウンレギュレーションを介してヒト上皮腫瘍細胞の移動と浸潤を誘導する。 Acta Biochim BiophysSin（上海）。 48:266–274. 2016. 記事を表示：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Szulccek R、Bogaard HJ、van NieuwAmerogen GP: 内皮増殖、バリア機能、および運動性のthequantificationのための電気細胞基質インピーダンスセンシング。 J Vis Exp. Mar28-2014. ViewArticle:Google Scholar
	Ku M、Kang M、Suh JSおよびYang J:胃癌細胞ライン上のsiAktおよびパクリタキセルの逐次治療の効果。 Int J Med Sci. 13:708–716. 2016. 記事を表示する：Google Scholar：PubMed/NCBI
	Feng Z、Wang Z、Yang M、Zhou L、Bao Y:Polysaccharopeptide exerts immunoregulatory effects viaMyD88-dependent signaling pathway. Int J Biol Macromol. 82:201–207.2016. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Genc G, Kilinc V, Bedir A and Ozkaya O:Effect of creatine and pioglitazone on Hk-2 cell line cisplatinnephrotoxicity. Ren Fail. 36:1104–1107. 2014. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ng NS, Wu MJ, Myers SJ and Aldrich-WrightJR: いくつかのunconventionalanticancerフェナントロリンベースの白金（II）cpmplexesのin vitro腎細胞毒性。 J-lnorgBiochem. 179:97–106. 2018. 記事を見る：Google Scholar
	Ma K、Zhang C、huang MY、Guo YXおよびHu GQ：ヒト肉腫MG-63細胞におけるトランスシノンIIAによって誘導されるBeclin-1依存性オートファジー Oncol Rep.36:1807-1818. 2016. 記事を見る：Google Scholar : PubMed/NCBI
	Augustine D, Rao RS, Anbu J and ChidambaraMurthy KN: In vitro cytotoxic and apoptotic induction effect ofearthworm coelomic fluid of Eudrilus eugeniae, Eisenia foetida, andPerionyx excavatus on human oral squamous cell carcinoma-9 cellline. Toxicol Rep. 6:347–357. 2019. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI