A Thermus aquaticus-ból izolált Taq DNS polimeráz egy termosztható DNS-polimeráz, amely katalizálja a nukleotidok primer-függő beépülését duplex DNS-be az 5’→3′ irányba Mg2+jelenlétében. Ez a PCR alkalmazásokban használt szabványos termosztható DNS-polimeráz. A Taq nem rendelkezik 3’→5 ‘exonukleáz aktivitással, de 5’→3 ‘ exonukleáz aktivitással rendelkezik. A Taq polimeráz alkalmas a legtöbb olyan PCR alkalmazáshoz, amely nem igényel nagy hűségű enzimet, például specifikus DNS-vagy RNS-szekvenciák kimutatására.
egy tipikus polimeráz láncreakció (PCR) magában foglalja a cél DNS-t, egy termosztálható DNS-polimerázt, például Taq polimerázt, két oligonukleotid primert, dntp-t, reakciópuffert és magnéziumot. Ha összegyűjtötted a reakció kerül egy thermal cycler, amelyek érintettek a reakció ismétlődő ciklusok a hőmérséklet-változás, amely során a DNS-denaturált, alapozók kiizzít a cél, illetve meghosszabbodik a polimeráz, hogy hozzon létre egy példányt a DNS-szál. Minden PCR ciklus elméletileg megduplázza a reakció célzott szekvenciájának mennyiségét, amíg a reakciókomponensek korlátozódnak vagy el nem fogyasztanak.
a PCR végpontban az elemzés a PCR összes ciklusának befejezése után következik be, és az amplifikációs reakció elérte a platót (vagy a végpontot). Ez ellentétben áll a valós idejű qPCR-rel, ahol a PCR termékképződést valós időben figyelik, amikor az amplifikációs reakció bekövetkezik. A végpont PCR minőségi módszer. Széles körben használják számos célra, beleértve a specifikus DNS-szekvencia jelenlétének vagy hiányának meghatározását a célmintában, kórokozók kimutatását, célszekvenciák erősítését további elemzéshez, valamint specifikus DNS-szekvenciák kimutatását az egyének vagy sejttípusok azonosítása érdekében.
a PCR mesterkeverékek tartalmazzák a PCR összes reakciókomponensét, beleértve a Taq polimerázt, a dNTPs-t és az optimalizált puffert. A Master mixek egyszerűsítik a kísérleti beállításokat és időt takarítanak meg, mivel a felhasználónak egyszerűen hozzá kell adnia a sablont és az alapozókat a reakcióhoz.