Gasteyer a The Groundlings című Los Angeles – i improvizációs-vázlatkomédia-csoporttal fejlesztette ki a komédiát. Kisebb szerepeket játszott a Seinfeldben (mint a Levesnáci elítélt vevője), valamint a Five, Frasier, Hope & Gloria és a NYPD Blue műsoraiban. 1996-ban Gasteyer csatlakozott a Saturday Night Live szereplőihez. Legnépszerűbb karakterei között volt a középiskolai Zenetanár, Bobbie Mohan-Culp, a nemzeti közszolgálati rádió Delicious Dish műsorvezetője, Margaret Jo McCullen, Lilith Fair feminista énekes, Cinder Calhoun, valamint Martha Stewart és Celine Dion benyomásai. 2000-ben ő és Chris Parnell meghallgatták Colin Quinn utódját, mint a news paródia szegmens hétvégi frissítésének társhorgonyait, de a pozíciók végül Tina Fey-re és Jimmy Fallonra kerültek.
hat szezon után Gasteyer 2002-ben elhagyta az SNL-t. Ezt követően különböző televíziós műsorokban, filmekben és színpadi produkciókban jelent meg. 2004-ben Gasteyer a főszereplő, Cady Heron (Lindsay Lohan) anyját játszotta a Mean Girls című játékfilmben, amelyet Tina Fey SNL castmate írt. A filmben több korábbi SNL-szereplő is szerepelt, köztük Fey, Tim Meadows és Amy Poehler. A 2005-ös Showtime film musical Reefer Madness-ben is feltűnt, mint Mae, Jack halálra ítélt barátnője és a Reefer Den tulajdonosa.
Gasteyer a Broadway-n játszott három Operában, mint Mrs. Peachum, Jim Dale, Alan Cumming és Cyndi Lauper. A termelés 2006.március 24-től június 25-ig tartott.
2005.június 24-én Gasteyer az Elphaba szerepét a Wicked című musical Chicagói sit-down produkciójában alakította, Kate Reinders mellett Glindaként. A termelés 2005.július 13-án nyílt meg. Gasteyert alakításáért Jefferson-díjra jelölték. Utolsó fellépését 2006.január 22-én játszotta, helyére Kristy Cates került. Később 2006. október 10-től 2007. január 7-ig újraírta a Broadway produkcióban játszott szerepet, Eden Espinosa helyett.
2007.április 12-én a média bejelentette, hogy Gasteyer csatlakozott az akkori új musical, Az Arthur írása szereplőihez a 2007. évi Kaliforniai Színházi Fesztiválra, amely április 14-től április 22-ig tartott. Gasteyer 2007.október 2-tól 2007. November 11-ig Chicagóban játszott a Stephen Sondheim musical Passion-ban a Chicago Shakespeare Színházban.
eredetileg Gloria-ként szerepelt a Encores-ban! A Damn Yankees nyári sorozatgyártása, de a próbák során bekövetkezett sérülés miatt, Megan Lawrence váltotta fel. Gasteyer részt vett az első feleségek Klub Broadway zenei változatának olvasásában.
Kitty Dean-ként szerepelt a Broadway-darabban, a királyi családban, amely 2009.szeptember 15-én kezdte meg előadásait a Samuel J. Friedman Színházban, és hivatalosan 2009. október 8-án nyílt meg. A műsor 2009.December 13-án fejeződött be. Gasteyer is szerepelt, mint Frisco Kate Fokhergill a városközpontokban Encores! A Girl Crazy produkciója, amely 2009.November 19-től November 22-ig tart.
2010.május 8-án visszatért a Saturday Night Live-ba egy különleges anyák napi epizódra, 2012. május 11-én pedig egy másik Anyák napi epizódra.
Gasteyer a nyolcadik évadban tűnt fel Larry David barátnőjeként.
2011 – től 2014-ig Gasteyer együtt szerepelt Sheila Shay-ként az ABC komédia sorozatában, 2013 márciusától pedig a Weight Watchers diet plan szóvivője volt.
2014-ben, kihasználva énekesképzését, Gasteyer felvette és kiadta az I ‘ m Hip-t, a jazz standardok albumát. “Egy menta Julep” volt az egyik választás, amelyet tartalmazott. 2015 – ben Mimi Schwinn-t játszotta a New York City Centerben Encores! Off-Broadway ébredés a zenei egy új agy, is megjelenik a leadott felvétel.
2016-tól 2017-ig Gasteyer főszerepet játszott a TBS kultikus slágereiben, mint egy idegen emberrablók támogató csoportjának vezetője.
2019 októberében kiadta a Sugar & című ünnepi albumot. Gasteyer később versenyzőként jelent meg a maszkos énekes második évadjában a “The Tree” leple alatt, végül a hatodik helyen fejezte be a versenyt.
2020 februárjában Gasteyer Katherine Hastings szerepét játssza az NBC comedy pilot American Auto-ban, amelyet Justin Spitzer írt. 2020 szeptemberében és októberében a Magical Girl Friendship Squad című felnőtt animációs sorozatban egy Nut nevű vörös pandát adott ki.