Taq-polymeraasi

Taq-DNA-polymeraasi, joka on eristetty Thermus aquaticuksesta, on termostabiili DNA-polymeraasi, joka katalysoi nukleotidien primeriippuvaista inkorporoitumista duplex-DNA: han 5’→3′ – suunnassa Mg2+: n läsnä ollessa. Se on PCR-sovelluksissa käytettävä termostabiili DNA-polymeraasi. Taq: lla ei ole 3’→5′ eksonukleaasiaktiivisuutta, mutta sillä on 5’→3′ eksonukleaasiaktiivisuutta. Taq-polymeraasi soveltuu useimpiin PCR-sovelluksiin, joissa ei tarvita hifi-entsyymiä, kuten tiettyjen DNA-tai RNA-sekvenssien havaitsemiseen.

tyypilliseen polymeraasiketjureaktioon (PCR) kuuluvat kohde-DNA, termostabiili DNA-polymeraasi kuten Taq-polymeraasi, kaksi oligonukleotidialkuperää, dNTPs, reaktiopuskuri ja magnesium. Koottuaan reaktio asetetaan lämpösykliin, joka altistaa reaktion toistuville lämpötilamuutosten sykleille, joiden aikana DNA denaturoidaan, alukkeet hehkuttavat kohdetta ja polymeraasi laajentaa sitä DNA-juosteen kopioimiseksi. Jokainen PCR-sykli teoriassa kaksinkertaistaa kohdistetun sekvenssin määrän reaktiossa, kunnes reaktiokomponentit tulevat rajoittaviksi tai kuluvat.

päätetapahtuman PCR-analyysi tapahtuu sen jälkeen, kun kaikki PCR-syklit on saatu päätökseen ja monistusreaktio on saavuttanut tasannevaiheen (tai päätepisteen). Tämä eroaa reaaliaikaisesta qPCR: stä, jossa PCR-tuotteen muodostumista seurataan reaaliajassa vahvistusreaktion tapahtuessa. Päätetapahtuma PCR on kvalitatiivinen menetelmä. Sitä käytetään laajalti moniin tarkoituksiin, kuten tietyn DNA-sekvenssin esiintymisen tai puuttumisen määrittämiseen kohdenäytteessä, patogeenien havaitsemiseen, kohdesekvenssien vahvistamiseen lisäanalyysiä varten ja tiettyjen DNA-sekvenssien havaitsemiseen yksilöiden tai solutyyppien tunnistamiseksi.

PCR-Master-seokset sisältävät kaikki PCR: n reaktiokomponentit, mukaan lukien Taq-polymeraasin, dNTPs: n ja optimoidun puskurin. Master mixes yksinkertaistaa kokeellista asennusta ja säästää aikaa, koska käyttäjä tarvitsee vain lisätä mallin ja alukkeet reaktioon.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista. Pakolliset kentät on merkitty *