Structural Biochemistry/Enzyme/Double-Reconcilive plot: Lineweaver Burk plote

Lineweaver-Burke plot

kaksoisvastuuyhtälö saadaan ottamalla vastavuoroinen molemmin puolin Michaelis-Menten yhtälö. Kaksois-vastavuoroinen (tunnetaan myös nimellä Lineweaver-Burk) juoni luodaan piirtämällä Käänteinen alkunopeus (1/V0) substraattikonsentraation (1/) käänteisfunktiona. Vmax voidaan määrittää tarkasti ja siten myös KM voidaan määrittää tarkasti, koska muodostuu suora viiva. Syntyvän suoran kaltevuus on KM/Vmax, y-leikkaus on 1/Vmax ja x-leikkaus on -1 / KM. Michaelis-Menten-yhtälön avulla Vmax on asymptootti ja sitä voidaan siten vain approksimoida, minkä seurauksena KM, joka on Vmax/2, ei voida määrittää tarkasti. Tämä juoni on hyödyllinen tapa määrittää erilaisia estäjiä, kuten kilpailukykyinen, kilpailukyvytön ja kilpailukyvytön.

kompetitiivinen inhibiittori

kompetitiivinen inhibiittori kilpailee substraattimolekyylin kanssa sitoutumiskohdasta. Näin ollen KM kasvaa muuttamatta Vmax-arvoa. Tämä tarkoittaa, että kahdella kuvaajalla on sama y-leikkaus kuin alla. Uusi x-sieppaus voi kuitenkin olla melko vaikeasti saavutettavissa. Tämäntyyppisille inhibiittoreille tarvitaan substraatin suurempi pitoisuus, jotta puolet aktiivisista paikoista on käytössä. Näin ollen KM2 on suurempi kuin KM1. Tällöin KM1: n vastavuoroinen arvo on suurempi kuin KM2: n. X-katkaisijalla on kuitenkin sen edessä negatiivinen merkki, joten kuvaajassa sen on siirryttävä oikealle suhteessa edelliseen katkaisijaan. Tämän osoittamiseksi kaksinkertaisella vastavuoroisella tontilla kaltevuus kasvaa osoittamaan sitovan kilpailunestäjän vahvuutta. Vaikka kaltevuus kasvaa inhibiittorin läsnä ollessa, y-intercepti pysyy samana inhibiittorin läsnä ollessa ja ilman sitä.

kilpailukyvyttömillä estäjillä estäjä sitoutuu vain entsyymi-substraattikompleksiin; siksi se ei kilpaile substraatin kanssa sitoutumiskohdasta. Näin ollen sekä KM-että Vmax-arvot pienenevät. Näin ollen uuden Vmax: n vastavuoroisen arvon pitäisi olla korkeammassa asemassa akselilla, sillä murtoluku kasvaa, kun nimittäjä pienenee. KM: n uusi vastavuoroinen arvo siirtyy vasemmalle, ja selityksen pitäisi olla samanlainen kuin kilpailullisella estäjällä. Tämän osoittamiseksi kaksinkertaisella vastavuoroisella käyrällä kulmakerroin pysyy samana kuin jos entsyymi ei olisi sitoutunut inhibiittoriin, mutta x-akselin intercepti pienenee. Entsyymillä, jolla on sekä kilpailukyvytön estäjä että ilman sitä, on kaksi rinnakkaista viivaa.

ei-kilpailevilla estäjillä estäjä voi sitoutua entsyymiin ennen kuin substraatti ehtii sitoutua sitoutumiskohtaan. Sen ei tarvitse odottaa entsyymin muuttumista entsyymin substraattikompleksiksi sitoutuakseen entsyymiin. Esto laskee VMAX-arvoa, kun taas KM-arvo ei muutu. Tämä tarkoittaa, että arvo -1 / KM pysyy samana kahdella radalla, kun taas uusi arvo 1/Vmax on suurempi suhteessa edelliseen. Tämän osoittamiseksi kaksinkertaisella vastavuoroisella tontilla Vmax: n lasku kasvattaa y-leikkauspistettä suuremmalla rinteellä.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista. Pakolliset kentät on merkitty *