Gasteyer udviklede komedieoplevelse med Los Angeles improv – sketch-komediegruppen The Groundlings. Hun spillede små roller på Seinfeld (som en dømt kunde af suppen), samt på viser Party of Five, Frasier, Hope & Gloria og NYPD Blue. I 1996 sluttede Gasteyer sig til rollebesætningen af Saturday Night Live. Blandt hendes mest populære figurer var High school musiklærer Bobbie Mohan-Culp, National Public Radio Delicious Dish vært Margaret jo McCullen, Lilith Fair feministisk sanger Cinder Calhoun, og hendes indtryk af Martha Stuart og Celine Dion. I 2000 prøvede hun og Chris Parnell at efterfølge Colin som medankre for opdateringen af nyhedsparodiesegmentet, men positionerne gik i sidste ende til Tina Fey og Jimmy Fallon.efter seks sæsoner forlod Gasteyer SNL i 2002. Derefter optrådte hun i forskellige tv-programmer, film og sceneproduktioner. I 2004 spillede Gasteyer moren til hovedpersonen Cady Heron (Lindsay Lohan) i spillefilmen Mean Girls, skrevet af SNL castmate Tina Fey. Filmen indeholdt også andre tidligere SNL-rollebesætninger, herunder Fey, Tim Engeog Amy Poehler. Hun optrådte også i 2005 film musical Reefer Madness som Mae, den dødsdømte kæreste til Jack og ejer af Reefer Den.han er en af de mest kendte i verden, og han er en af de mest kendte i verden. Produktionen løb fra 24. marts til 25. juni 2006.den 24. juni 2005 opstod Gasteyer rollen som Elphaba i Chicago sit-ned produktion af musicalen Ugudeligsammen med Kate Reinders som Glinda. Produktionen åbnede 13. juli 2005. Gasteyer blev nomineret til en Jefferson-pris for sin præstation. Hun spillede sin sidste præstation den 22. januar 2006, erstattet af hendes standby Kristy Cates. Hun gentog senere rollen i produktionen fra 10. oktober 2006 til 7.januar 2007 og erstattede Eden Espinosa.
den 12. April 2007 meddelte medierne, at Gasteyer havde tilsluttet sig rollebesætningen af den daværende nye musical, der skrev Arthur, til 2007 nye værker Festival for teaterværker i Californien, der løb fra 14.April til 22. April. Gasteyer optrådte i Chicago i Stephen Sondheim musical Passion på Chicago Shakespeare Theatre fra 2. oktober 2007 til 11.November 2007.
hun blev oprindeligt kastet som Gloria i Encores! Sommer serieproduktion af Damn Yankees, men på grund af skade under repetitioner, hun blev erstattet af Megan Laurence. Gasteyer deltog i læsningen af den musikalske version af First koner Club.hun medvirkede som Kitty Dean i den kongelige familie, der begyndte forestillinger på Samuel J. Friedman Theatre den 15. September 2009 og officielt åbnede den 8.oktober 2009. Forestillingen sluttede sin løbetur den 13. December 2009. Gasteyer medvirkede også som Frisco Kate Fothergill i byens Centre Encores! produktion af pige skør, der løber fra 19. November til 22.November 2009.
hun vendte tilbage til Saturday Night Live til en særlig Morsdagsepisode den 8.maj 2010 og til en anden Morsdagsepisode den 11. maj 2012.Gasteyer optrådte i sæson otte af Curb Your Enthusiasm som Larry Davids kæreste.fra 2011 til 2014 medvirkede Gasteyer som Sheila Shay i ABC-komedieserien Suburgatory, og fra marts 2013 var hun talskvinde for Vægtvagternes diætplan.
i 2014, hvor hun udnyttede sin uddannelse som sanger, indspillede og udgav Gasteyer I ‘ m Hip, et album med standarder. “One Mint Julep” var et af de valg, det omfattede. I 2015 spillede hun Mimi Schvin i byens centrum Encores! En ny hjerne, der også vises på rollebesætningen.fra 2016 til 2017 havde Gasteyer en hovedrolle på TBS ‘ s kult hit People of Earth, som leder af en fremmed bortført støttegruppe.
i oktober 2019 udgav hun feriealbumet Sugar& sprut. Gasteyer optrådte senere som en deltager i anden sæson af The Masked Singer under dække af “The Tree” og sluttede i sidste ende konkurrencen på sjettepladsen.i februar 2020 spiller Gasteyer rollen som Katherine Hastings i NBC komedie pilot American Auto som blev skrevet af Justin Spits. I September og oktober 2020 gav hun udtryk for en rød panda ved navn Nut i en animeret serie med titlen Magical Girl Friendship trup.