Taq Polymeráza

Taq DNA polymeráza, izolovaná z Thermus aquaticus, je termostabilní DNA polymeráza, která katalyzuje primer-dependentní zabudování nukleotidů v duplexu DNA na 5’→3′ směru v přítomnosti Mg2+. Jedná se o standardní termostabilní DNA polymerázu používanou v aplikacích PCR. Taq nemá 3 ‚→5 ‚exonukleázovou aktivitu, ale má 5’→3 ‚ exonukleázovou aktivitu. Taq polymeráza je vhodná pro většinu aplikací PCR, které nevyžadují vysoce věrný enzym, jako je detekce specifických sekvencí DNA nebo RNA.

typický polymerázové řetězové reakce (PCR), obsahující cílovou DNA, termostabilní DNA polymerázy, jako je Taq polymeráza, dvou oligonukleotidových primerů, dntp, reakční pufr a hořčíku. Jednou se shromáždil, reakce je umístěn v termocykleru, který podmiňuje reakce na opakující se cykly, změny teploty během kterého DNA je denaturována, primery nasedají na cíl a jsou rozšířeny na polymerázové vytvořit kopii DNA strand. Každého PCR cyklu, teoreticky zdvojnásobuje množství cílené sekvence v reakci dokud reakce součásti se omezení nebo jsou spotřebovány.

V koncovém bodě PCR dochází k analýze po dokončení všech cyklů PCR a amplifikační reakce dosáhla plató(nebo koncového bodu). To kontrastuje s qPCR v reálném čase, kde je tvorba PCR produktu sledována v reálném čase, jak dochází k amplifikační reakci. Endpoint PCR je kvalitativní metoda. To je široce používán k mnoha účelům, včetně stanovení přítomnosti nebo nepřítomnosti specifické sekvence DNA v cílovém vzorku, detekce patogenů, amplifikaci cílové sekvence pro další analýzu a detekci specifických sekvencí DNA za účelem identifikace osob nebo typy buněk.

PCR Master směsi obsahují všechny reakční složky pro PCR, včetně Taq polymerázy, dNTPs a optimalizovaného pufru. Master mixy zjednodušují experimentální nastavení a šetří čas, protože uživatel jednoduše potřebuje do reakce přidat šablonu a primery.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna. Vyžadované informace jsou označeny *